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1、染色液配制1）X Glue母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺（DMF）配成20mM的贮存液，分装成每管100卩L,保存于-20 Co2）XGluc 基液（ 50mM PBS， pH7.0 ）。配制方法：50mM NaH2P040.78g/100ml ;50mM Na2HPO4 1.79g/100ml共同溶解；Na2EDTA( 10mM， 372mg)，Triton-100(0.1 %, 100 卩 l),K3 Fe(CN) 6（铁氰化钾） （0.5mM， 16.5mg）K4 Fe(CN) 6(亚铁氰化钾) (0.5mM， 21.1mg)染色液：50卩l X-Gluc 母液+ 450卩l基

2、液需要试剂：5-溴-4-氯-3-吲哚-B -匍萄糖苷酸酯（X Gluc）N-N-二甲基甲酰胺（DMF）;NaH2P0；4Na2HP04；Na2EDTA； Triton-100 ；K3 Fe（CN） 6 （铁氰化钾）；K4 Fe（CN） 6 （亚铁氰化钾）二 染色方法：1将准备好的试材浸泡在染液，于25 37C保温1小时至过夜。2. 叶片等绿色材料转入 70%乙醇中脱色 23次，至阴性对照材料呈白色。3. 肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。三 实验原理适宜的反应条件下，B -葡萄糖苷酸酶（GUS可将x Glue水解成蓝色物质，因 此具有GUSS性的部位或位点呈现蓝色或蓝

3、色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。gus基因是目前常用的一种报告基因，是BD葡萄糖苷酸酶（gus）基因，其表达产物B -葡萄糖苷酸酶（GUS）能催化裂解一系列的葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-B -葡萄糖苷酸酯（X Glue）分解为蓝色的物质，也可以将4-甲基 -伞形花酮-B -D-葡萄糖苷酯（4-MUG）分解为蓝色物质。其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。gus 基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它 报告基因所不能及的。四 注意事项用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如， 拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是 像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须

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