实时荧光定量RT

1、实时荧光定量 检测鼻咽癌骨转移相关基因表达的研究 (一) 作者：翟晓晓，刘腾飞，姚开泰【摘要】目的研究 CXCR、4 CTGF、MST1R、种基因在鼻咽癌细胞 与骨共培养前后的表达情况，分析这些基 因在鼻咽癌骨转移中的作用。方法采用基于 SYBRGREEN法的实时荧 光定量 检测 细胞与骨共培养前后骨转移相关基因的表 达情况。结果 细胞与骨共培养后 CXCR、4 CTGF、MST1R、 的表达水平较共培养前差异有显著性 (P0.05)，均表达上调；、则差异无显著性。结论实时荧光定量能够敏感、特异地检测出鼻咽癌细胞在与骨组织共培养前后的 mRNA 的表达变化，方 法准确可靠，操作方便； CXCR

2、、4 CTGF、MST1R、 有可能成为判 断鼻咽癌骨转移的潜在标志物。【关键词】实时荧光定量 ；骨转移相关基因；鼻咽癌 Abstract:ObjebonetissueandanalyzetherelationshipbetweenrelatedmRNAexpressionleve lsandthebonemetastasisofNPC.MethodsThemRNAexpressionsofsixgenesin ignificantdifference.ConclusionCXCR4,CTGF,MST1R,andEastasisinNPC.;nasopharyngealcarcinoma 骨转

3、移是晚期恶性肿瘤的常见并发症，近年来逐渐成为肿瘤转移机制 研究领域的热点之一，在骨转移的发生过程中，由于骨组织微环境与 肿瘤细胞的相互作用， 使得肿瘤细胞具有特定的基因型。 研究发现1： 趋化因子受体 4(chemokinereceptor4 ，CXCR)4、结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF) 、 基 质 金 属 蛋 白 酶、白细胞介素( )是乳腺癌骨转移的标签基因；巨噬细胞刺激蛋白受 体( macrophagestimulating1receptor,MST1R在) 乳腺癌骨转移中发挥作 用 2;而则在前列腺癌的骨转移中表达增高3。鼻咽癌

4、作为我国南方常见的上皮性恶性肿瘤， 远处转移以骨最为常见，本 研 究 选 取 较 常 规更 好 的 实 时 荧 光 定 量(realtimefluorescencequantitativePCR，)技术对目的基因在鼻咽癌细胞株与骨共培养前后的表达情况进行研究，以探讨上述 6 个基 因在鼻咽癌骨转移中的作用。1 材料与方法1.1 细胞鼻咽癌细胞株 为本实验室冻存，低分化人鼻咽癌细胞株，细胞 均呈上皮样，贴壁生长，生长培基为含有 10（ 新）生牛血清的 。1.2 实验动物6 8 周 龄 BALB/c 裸 鼠 ， SPF 级 ， 合 格 证 号 ： SCXK（ 粤 ） 2006-00152006B0

5、232006A048，体质量 16 20g，雌雄不限，购自南方 医科大学实验动物中心。1.3 主要试剂和仪器BGJb培养基购自 Invitrogen 公司，购自 Hyclone 公司，胎牛血清购自杭州四季青， Trizol试剂购自 Invitrogen 公司，Stratagene公 司的 Mx3000PRealTimePCR扩增仪，试剂盒以及SYBRPremixExTaqTM试剂盒购自 Takara。1.4 共培养实验 从裸鼠取前肢骨和后肢骨（包括大腿骨、胫骨、肱骨和桡骨） ，去除骨 周围的肌肉，沿长轴切开骨干，使骨髓腔暴露，切成 0.8cm 长的骨块 置于含有抗生素的 BGJb培养基中， 37平衡 24h 后，将 35 块