实验用培养基适用性检查标准操作规程讲述

1、:on iioijnquisiQdvdoj poinquisiQ:LI您紈OJPQ A9IA9H冊車茸卿 HW 偵93dosJOJ p93ECb爼秘紳耶QQA问归冊口卿0Xqponssj门胆綁qd腥再餌:Xq poACuddy:网mmvd:Xq paggY射車0:网:Kq paggY射車:网o:Xq paiEchyY胡TSI GROUP Yessamin Health标准操作规程 Standard Operating Procedure页码/Page: 5 of 8实验用培养基适用性检査标准操作规程Standard Operating Procedure for Growth Promotio

2、n test of Media编号/No.: SOP-QC-MOIO版本号/Version: ()0目的 Purpose为觸微生物检验的准确性及相关工作特制左本规邕Scope本程序适用于微生柳眠测定培养基的适用性检查及相关工作。职责 Responsibility分析员：严格按!说本操作规程执行。及时完成各类相关记录。在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。 主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导田可可能的OOS和偏差调查。内容procaliwe1 检验员应根据培养基配制程序或焙养基各自的说明书砂妝蒔基。2 说鈿菌种及瞬基2.1 菌种：2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株

3、传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。2.1.2 枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)ATCC 66332.13 大肠埃希菌(Escherichia coli) ATCC 87392.1.4 金黄色術萄球菌(Slaphylococcus aureus) ATCC 65382.1.5 白色念珠菌(Candida albicans) ATCC 102312.1.6 黑曲霉(Aspeiillus niger)ATCC 164042.1.7 伤寒沙门菌(Salmonella) ATCC 140282.1.8 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeniginosa) A

4、TCC 90272.2 培养基2.2.1按照培养基说明书进行配制火菌。2.2.2 大豆酪蛋白消化肉汤 Soyt)ean-Casein Digest Brotli2.2.3 大豆酪蛋白消化琼脂 Soybeaii-Casein Digest Agar2.2.4 沙氏fltj萄臓；脂 Sabouimid Dextrose Agar2.2.5 肠道菌增菌肉汤 Enterobacteria Eiuichnicnt Broth MossclTSI GROUP Yessamin Health标准操作规程 Standard Operating Procedure页码/Page: 5 of 8实验用培养基适用性

5、检査标准操作规程Standard Operating Procedure for Growth Promotion test of Media编号/No.: SOP-QC-M010版本号/Version: ()02.2.6 紫纟色妙十匍萄臓脂 Violet Red Bile Glucose Agar2.2.7 麦康凯肉汤 MacConkey Brotli2.2.8 麦康痂脂 MacCoiikeyAgar2.2.9 RV 沙I、J 氏菌富集肉汤 Rappaport Vassiliadis Salinonclla Enrichment Broth2.2.10 木糖赖氨酸II兑氧I囲洌鵬 Xylos

6、e Lysine Dcoxycholatc Agar2.2.11甘露醇氯化钠琼脂培养基Mannitol Salt Agai*2.3微生物汁数培养基的适用性检查2.3.1微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检査,2.3.2菌悬液的側备夕淋金黄色痢萄球菌ATCC 6538輙假单胞菌ATCC9027菌株制备大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂大豆酪蛋白消化肉汤或大前峨白消化琼脂3OG35C 1X24 小时3OC-35C, 1X24 小时需称枯草菌 ATCC6633白色念珠菌ATCC 10231菌株制备大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂沙氏葡萄海京脂3O

7、G35C, 824 小时20G25C, 23 天需称黑曲霉ATCC 16404菌株制备沙氏匍萄糖琼J20C-25C,匸7天或考直到 形成良好僦子状态2.3.3上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2踊臨缓冲液制成每1ml含菌数不大于OOcfU的菌悬 液，制备黑曲銚子悬浮液时，添加3-5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液 或pH7.2磷酸够冲液，将抱子洗脱。然后，用适宜方法吸岀抱子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸臓冲液制成每lml含砲子数不大于lOOcfti 術包子悬液。菌悬液在室温下昨应在2

8、小时内使用，若保存在2&C可在24小时内使用。黑曲 靈抱子悬液可保存在在验证过的贮存期内使用。2.4大豆酪蛋白消化肉汤促生长试验2.4.1取以上前3种菌悬液各O.lnW不大于lOOcfu),分别注入火过菌的含有10ml大豆酪蛋白消化肉汤的 试管中，于3OC-35C培养不超过3天。同时用相应的上一扌It通过促生长减的培养基替代被检培 养基进行上述试验。培养结朿后进行观察，如果肉眼能淸晰看到的微生物的生长与上一批通过促生 长询佥的培养基的生长情形基本贝恻定此焙养基通过促生长试验。反之则判疋此培养基不符TSI GROUP Yessamin Health标准操作规程 Standard Operatin

9、g Procedure页码/Page: 5 of 8实验用培养基适用性检査标准操作规程Standard Operating Procedure for Growth Promotion test of Media编号/No.: SOP-QC-MOIO版本号/Version: ()02.5 大豆酪蛋白消他;脂和沙氏葡萄楓脂促生长试验2.5.1取以上5种菌悬液各耐（不大于于lOOcfu）,分别注入无菌平皿中，立即倾注大豆酪蛋白消化琼 脂，每株试验菌平行备2个平皿，混匀、凝固，苣3OC-35C培养不超过3天，计数，后2种菌 悬液不超过5天，计数。再取后2种菌悬液各少于OOcfU,分别注入无菌平皿中，

10、立即倾注沙氏葡 萄臓脂，每侏试验菌平行备2个平皿，混匀、凝固，lt2OC-25C培养不超过5天，计数。同 时用相应的上一社硕砂长礙的培养基密弋被細养基进行血概。进行灘长礙的瞬 基平皿上，微生物生长情况必须与申航促生长试J佥的培养基平HL上白观物生长情况一者更 好，同时将待测宦的培养基上的菌落数与已通过促生长试验的培养基上的菌落数对比两者之间的 比值应处于70%-200%之间,贝刿左此培养基通过促生长讪验反之则判宦该培养基不符合规屯未 融贮圖佥。2.6控制菌测试所用培养基的适ffl性检查2.6.1控制菌检查ffl的成品培养基、由丿1沐1咅养基或I安处方配fliij押咅养基均融行培糊适用性检査。2

11、.6.2菌悬|备序号1金黄色衙萄球菌ATCC 6538大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂3OC-35C, 824小时2輙假单胞菌 ATCC9027大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30oC-35oC, 18-24河寸3枯草芽抱杆菌 ATCC6633大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂3OC-35C, 18-24刘寸4大肠埃希菌ATCC 8739大前濾白消化肉汤或大豆酪蛋白消化战哺3OC-35C, 18-24 N寸5鼠伤寒沙门菌 ATCC 14028大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂3OC-35C, 824小时2.63上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2臧盐缓冲液制成适宜

12、浓度的菌悬液。菌悬液在室温下 放宜应在2何寸内使用，若保存在28C可在24小时内使用。2.6.4控制菌检查ffl培养基的固fl性检查项目包括I蒔基的促长能力、抑能力及指示能力的检查。齐 培养基的检査测试项目及所用菌株见下表控制菌检查畴基特性说錨株胆汁耐受革兰氏 阴性菌的检测肠道菌增菌肉i狗养基促生长能力大肠埃希菌 铜擁单胞菌扌脚能力金黄色葡萄球菌紫红色胆汁简萄糖娜促生长能力+指示能力趣矣希菌 铜绿假单胞菌九扬杆菌的绷麦康凯肉汤他长能力趣矣希菌扌脚能力金黄色葡萄球菌TSI GROUP Yessamin Health标准操作规程 Standard Operating Procedure页码/Pag

13、e: 5 of 8实验用培养基适用性检査标准操作规程Standard Operating Procedure for Growth Promotion test of Media编号/No.: SOP-QC-MOIO版本号/Version: ()0麦翩咖培养基促生长能力+指示能力趣矣希菌沙门氏菌的检测RV沙门氏菌富集肉汤他长能力鼠伤寒沙门菌扌脚能力金黄色匍萄球菌木糖赖氨酸脱氧胆盐骂弗培养基促生长能加H示能力鼠伤寒沙门菌铜绿假单胞菌的 检则澳化协烷三甲基彼琼促生长能力铜擁单胞菌扌脚能力大肠埃希菌金黄色匍萄球菌 的检则甘露醇氮化删鵬培养基促生长能力+指示能力金黄色葡萄球菌扌脚蚀大肠埃希菌2.7 液

14、体培养基促生长能力检查取试验菌各0.1ml （含菌数不大于lOOcfii）（壮表）于被检培养基和上一批检验并通过的培养基中，在相 应控制菌检查规左的培养温度及最短培养时间下培养。两者比较，彼检培养基与上一批检验并通过的培养 基比较，微生物生长良好并且相当。2.8 I昭繇长能力检查取试验菌各0.1ml （含菌数不大于lOOcfti）（见上表）分別涂布于被检培养基和上一批检验并通过的培养基 中，在相应控制菌检查规左的培养温度及最短壌养时间下培养。两者也交，被检培养基与上一批检验并通 过的培养基比较，微生物生长良好并且相当。2.9 液体培养基和固体培养基的抑制能力检查取试验菌各0.1ml （含菌数不

15、小于lOOcfii）（社上表）于被检培养基中，在相应控制菌检查规左的培养温度 及最长时间下培养，诩佥菌应不得生长。2.10培养基指示能力检查取试验菌各0.1血（含菌数不大于lOOcfti）（见上表）分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过的培养基 中，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间范用内培养。被检培养基中生长的菌落在外观和指示反应上 与从此前已检测并批的培养基批次所获得的菌落是相当的。3 裁文件Currcnt USP BP、EP附件及相关文件Attachmoit tmd related documentsR01微生物汁数固体培养基适用性检査R02微生物计财体培养基适用性检查记录R03魁姗制

16、菌培养性检History修订号生效日期修订内容001.培养對牲长、扌脚蚀寧耽了礎菌的取样星TSI GROUPYessamin Health标准操作规程 Standard Operating Procedure页码/Page: 6 of 8实验用培养基适用性检査标准操作规程Standard Operating Procedure for Growth Promotion test of Media编号/No.: SOP-QC-MOIO版本号/Version: ()0附件编号Attachment No.:R01微生物计数固体培养基适用性检查记录Growth promotion test of so

17、lid media for Microbial enumeration test培养基名称厂家/批号配制后批号有效期至检验日期培养温度培养箱编号有效期至对照批号有效期至检验员1 操作步骤1.1使用0.9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液制备测试菌悬液，制备黑曲霉抱子悬浮液时，可以添加0.05%的聚山梨脂80到缓冲液中。测试菌悬液应在两小时 内使用，或者在2-8*C的条件下24小时内使用。1.2取金黄色匍萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种菌悬液各少于lOOcfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注大豆酪蛋白消化琼脂， 每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置30C-35C培养不超

18、过3天，计数；后2种菌悬液不超过5天，计数。再取后2种菌悬液各少于lOOcfu,分 别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏匍萄糖琼脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，巻20C-25C培养不超过5天，计数。取铜绿假单胞菌、枯草 芽泡杆菌2种菌悬液各少于lOOcfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注R?A,每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置30C-35C培养不超过3天。同 时用相应的上一批通过促生长测试的培养基替代被检培养基进行上述试验。13进行促生长试验的培养基平皿上，微生物生长情况必须与已通过促生长测试的培养基平皿上的微生物生长情况一致或者更好，同时将待测定的培养基上的菌 落数与已通过促生

19、长测试的培养基上的菌落数对比，两者之间的比值应处于70%-200%之间，则判左此培养基通过促生长测试；反之则判立该培养基不符合 规定，未通过促生长测试。2 记录：菌种菌液批号开始培养 时间/温度结束培养 时间/温度测试培养基菌落数对照培养基菌落数对比生长情况（基本一致或更好）两者比值（70%-200% 之间）观察员结果判定平皿1平皿2平均平皿1平皿2平均IJ 期 Date:复核人 Checked by:日期Date:TSI GROUP Yessamin Health标准操作规程 Standard Operating Procedure页码/Page: 6 of 8实验用培养基适用性检査标准操作

20、规程Standard Operating Procedure for Growth Promotion test of Media编号/No.: SOP-QC-MOIO版本号A ersion: 00附Attachment No.:R02Growth promotion test of liquid nrdia for Microbial cnium*ation test培养基称厂 家批号酉喇后批号培养齡号有对照批号检廖检验日期1曲步骤1 1使用0.9%无菌氯化钠溶液或PH7.2磷酸盐缓冲液制备测试菌悬液。测试菌悬液应在两力耐内使用，或者在28C的条件下 24小时内使用。1.2取金黄色匍萄球菌、

21、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌3种菌悬液各少于lOOcfU，分别注入火过菌的含有10ml大豆酪蛋白消 化肉汤的试管中，于3OC-35C培养不超过3天。同时用相应的上一扌H迪过促生长测试的培养基替代被检培养基进行一上述 询佥。培鮒束后进行观察。13如果肉眼能淸晰看到的微生物的生长与上一批通过灵敏度测试的培养基的生长情形相同的话，贝恻定此养基通过促生长 测试。反之则判迴時基不符合规迄柚过促生长测试。2 鈕 开菌种菌液批号测试瞬基 生炜况对鮒咅养基 生帰况对比生长情况（基 本一哋蒯）观察员结果判上齡不彳饴齡不彳饴复核人 Checked by:TSI GROUPYessamin Health标准操作规程 Standard Operating Procedure页码/Page: 6 of 8实验用培养基适用性检査标准操作规程Standard Operating Procedure for Growth Promotion test of Media编号/No.: SOP-QC-MOIO版本号/Version: ()0附件编号Attachment No.:R03微生物控制菌培养基适用性检査记录Growth promotion test of media for Spe