矮牵牛生根诱导汇总

1、综合性（设计性）实验实验报告实验名称： 姓 名： 指导教师： 专 业： 实验班级： 实验时间： 实验地点： 成 绩： 矮牵牛愈伤组织的生根诱导培养一、实验目的1. 掌握无菌操作技术及培养基的制备方法。2. 学会在无菌条件下建立矮牵牛的无性繁殖体系 。3. 筛选出适合矮牵牛生根诱导的最佳配方，为其快繁提供参考。二、实验原理矮牵牛为茄科矮牵牛属多年生生草本， 通常作一年生栽培。 矮牵牛花大， 花 色丰富，花期长， 6 10月整个夏、秋季节花开不断，栽培管理省工，园林绿化 上需求量大。但由于重瓣或大花品种常不易结实或实生苗不易保存母本的优良性 状，常采用扦插繁殖，但扦插繁殖速度太慢，满足不了生产发展

2、的需要，而组织 培养可在短时期内获得大量的优良种苗。 在培养基中有浓度较高的营养元素， 特 别是糖能满足的情况下， 试管苗产生依赖性而不易生根， 减少培养基中营养成分 和糖的含量可以刺激生根， 因此经常采用 1 2MS作为生根的基本培养基。 生根培 养基是在以 1/2MS为基本培养基的基础上添加 IBA和NAA，本实验以矮牵牛愈伤组 织为材料， 探讨不同浓度激素组合对诱导愈伤组织生根的影响。 最终筛选出适合 矮牵牛生根诱导的最佳配方，为其快繁提供参考。三、实验材料、试剂和仪器1、材料矮牵牛无菌苗2、试剂大量元素 （扩大 10倍）： NH4NO3、KNO3、CaCl22H2O 、MgSO47H2

3、O、KH2PO4微量元素 （扩大 100 倍）：MnSO4H2O、ZnSO47H2O、CoCl 6H2O、CuSO45H2O、H3BO3、 NaMo4O 7H2O 、KI铁盐母液 （扩大 100 倍）：FeSO47H2O、Na2-EDTA有机母液 （扩大 50 倍） ：盐酸吡哆醇（维生素 B6）、盐酸硫胺素（维生素 B1）、 肌醇、甘氨酸生长因子： 0.2mg/ml NAA、0.5mg/ml IBA琼脂、蔗糖、 1mol/L NaOH溶液、 1mol/LHCl 溶液（注：以上 MS培养基母液以及生长因子由实验室配置好）2、仪器电子天平、冰箱、 PH试纸、烧杯、玻璃棒、量筒、试剂瓶、移液管、三角

4、 瓶、吸尔球、微量加样器、高压蒸汽灭菌锅、微波炉、培养瓶、超净工作台、各 种接种器具。四、实验步骤与方法（一）生根培养基的配制（1）1/2MS培 养基 的配制称取 9.6g 琼脂， 50g蔗糖，放置于 500mL烧杯中，加入 300mL蒸馏水，放入微波炉中加热至溶解。 另取一只烧杯，按照表 1 所需求的量配制 1/2MS培养基。将配制好的的母液与琼脂溶化液混合，定容至 2000mL，待温度降至 50-60 ， 调节 pH至 5.8 ，并分装在 5 个 500ml 的烧杯中，每个烧杯装 400ml。表 1 1/2MS 用的元素量成分大量元素微量元素铁盐母液有机母液添加量（ ml）10020202

5、02）添加植物生长调节剂向 5 个烧杯中分别添加不同浓度的 6BA 和 NAA量如表 2 所示表2植物生长调节剂的添加量组号培养基植物生长调节剂6BA（mg/L）NAA（mg/L）CK1/2MS0011/2MS1.00.221/2MS1.00.431/2MS1.00.641/2MS1.00.83）培养基分装植物生长调节剂添加好后， 以 3040ml/ 瓶分装在培养瓶中， 用封口膜封口， 并在该培养瓶上标注组号。（二）培养基和接种工具灭菌1、将内层锅取出，在向外层锅中加入适量水，使水面与三脚架向平，加水量不 能过少，以防止灭菌锅底烧干而引起炸裂事故。2、放回内层锅，并装入培养基和接种工具，不要装

6、的太挤，以免妨碍蒸汽 流通过而影响灭菌效果。 三角瓶与试管口不要与筒壁接触， 防止冷凝水淋湿包口 的纸而透入棉底。3、加盖，两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿 使漏气，打开电源，同时关闭排气阀门。4、等到压力上升到 0.05MPa时打开放弃阀门，排冷空气 10min。关闭排气 阀，等到压力再次上升到 0.05MPa时打开放弃阀门，排冷空气 5min，关闭排气 阀门。5、加热让锅内的压力升到所需压力 0.1MPa。（ 121）。停止加热，维持 压力灭菌 1520min。6、达到灭菌时间后，关闭电源，让灭菌锅内的温度自然下降，当压力将至0 时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子，

7、取出灭菌物品。7、将取出的灭菌培养基在室温下放置一周， 经检查没有杂菌生长即可使用。（三）外植体的接种、培养和观察记录1、消毒与灭菌（1） 接种室的灭菌：接种前 1h 用 70%喷洒接种室，并打开室内紫外灯灭 菌。接种前 20min，打开超净工作台风机及紫外灯。（2）操作者消毒：流水洗手 3 次，自然晾干，在缓冲间换好专用实验服、 鞋套等。上工作台后，先用酒精棉球擦拭工作台面 3 次，并擦拭双手 3 次。2、外植体接种将培养瓶放在超净工作台内，打开紫外灯进行灭菌 15min。然后酒精灯旁， 小心从培养瓶中取出矮牵牛无菌苗叶片， 切成大小均匀，约为 0.5 1cm2的小块， 接入诱导培养基，每瓶

8、接 3 块，盖上封口膜后写上日期，处理号。3、外植体的培养在培养室中培养，培养条件：温度 1820，光照 800200Lx。4、观察记录四周后观察污染状况，根的长势、粗细、长度以及其他现象，生长块数和生 根的总数。统计组织生根情况，计算培养的生根率和污染率，如下： 记录不定根的发生情况，计算生根率生根率 (%)=生根组织块数 / 接种总组织块数 100(2 )记录生根的污染情况，计算污染率污染率=污染的瓶数 /接种的总瓶数 100%(3) 记录生根的生长情况，计算成活率成活率 =1-污染率五、试验结果与讨论(一)结果记录表1培养基种类 接种数（块）生根数 / 块污染数（块）平均生根数/块CKM

9、S3024091MS+6BA1+NAA0.230261102MS+6BA1+NAA0.430290133MS+6BA1+NAA0.630252104MS+6BA1+NAA0.8302317二）数据处理表2成活率（ %）生根率（%）污染率（ %）跟生长情况CK100%80%0根较多，较好，少量须根196.6%86.6%3.3%根较少，细，有须根2100%96.6%0根多、根粗壮、长、有须根393.3%83.3%6.6%根较多、较粗、短，有须根496.6%76.6%3.3%少、基部有白点出现、少量须根三）结果讨论由表 2 可以看出：生根数最好的是处理 2，达到每块平均 13个根；并且生 根多，主根

10、粗壮，较长，有须根，状况好。其次是处理 1和 3 都是每块 10个根. 对照组有 9 个根每块；根较多，生长较好，存在少量须根。处理 4较对照组，根 数较少，细，有须根。最差的是处理 4，每块只有 7 个根；根少，基部有白点出 现，有少量须根。综上所述，在生根诱导的 4个处理中， 1、2、3、4组合都能诱导出不定根， 但其根数较少。生根培养基处理 2 培养的块茎，不仅其成活率高达 100%，而且 生根数为实验中最高的处理；其中的瓶苗具有根生长较快、较为粗壮，叶绿、坚 挺等特点。相比之下，其余 3 种生根培养基以及对照组不如养基 2 适合生根培养 (表 2) 。因此认为试管苗比较适宜适生根培养基为 1/2 MS+6BA1.0+N AA0.4+蔗糖 25g+琼脂 4.8g 。六、实验结论6BA和 NAA对大多数植物不定根的形成有积极的促进作用， 对矮牵牛愈伤组 织生根培养的作用较为明显。 通过实验结果显示， 试管苗比较适宜适生根培养基 为 1/2 MS+BA1.0+ NAA0.4 蔗糖 25g+琼脂 4.8 。参考文献1 崔广荣 , 梁继田 ,崔海. 重瓣矮牵牛叶片的组织培养2 王贤荣 . 早樱种系的分类及其观赏价值 . 南京林业大学学报 : 自然科学版 , 2000 , 24(06) : 442