薄层色谱鉴别

1、薄层色谱法薄层色谱法 概念概念 薄层色谱法薄层色谱法(TLC)(TLC) 将固定相将固定相( (如硅胶如硅胶) )薄薄地均匀涂敷在底板薄薄地均匀涂敷在底板 ( (或棒或棒) )上，试样点在薄层一端，在展开罐内上，试样点在薄层一端，在展开罐内 展开，由于各组分在薄层上的移动距离不展开，由于各组分在薄层上的移动距离不 同，形成互相分离的斑点，测定各斑点的位同，形成互相分离的斑点，测定各斑点的位 置及其密度就可以完成对试样的定性、定量置及其密度就可以完成对试样的定性、定量 分析的色谱法。分析的色谱法。 薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它 利用各成分对同一吸附

2、剂吸附能力不同，使在利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在 移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程 中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解 吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 基本原理基本原理 在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚 度等），化合物移动的距离和展开剂移动的度等），化合物移动的距离和展开剂移动的 距离之比是一定的，即距离之比是一定的，即RfRf值是化合物的物理值是化合物的物理 常数，其大小只与化合物本身的结构有关，常

3、数，其大小只与化合物本身的结构有关， 因此可以根据因此可以根据RfRf值鉴别化合物值鉴别化合物。 比移值比移值 组分二组分二 组分一组分一 被分离被分离 混合物混合物 薄层色谱展开示意图薄层色谱展开示意图 薄层色谱法薄层色谱法 优点优点 操作简单，定性结果直观操作简单，定性结果直观 缺点缺点 有一定毒性、定量方面的精密度有一定毒性、定量方面的精密度 较差较差 实验仪器实验仪器 载板载板 固定相（吸附剂）或载体固定相（吸附剂）或载体 涂布器涂布器 点样器点样器 展开室展开室 实验操作实验操作 实验操作实验操作 1 薄层板的制备薄层板的制备 吸附剂（硅胶） 调制 玻璃板玻璃板 涂布 调制时慢慢搅拌

4、，勿使产生气泡。调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡。 均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干。均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干。 使用前放入烘箱内，在使用前放入烘箱内，在105-115105-115左右烘干左右烘干40-50min40-50min。冷。冷 却后使用。却后使用。 粘合剂、添加剂粘合剂、添加剂 固定相（吸附剂）的选择固定相（吸附剂）的选择 纤维素、淀粉纤维素、淀粉 硅酸镁硅酸镁 硫酸钙硫酸钙 硅胶硅胶 佛罗里硅土佛罗里硅土 氧化镁氧化镁 氧化铝氧化铝 活性炭活性炭 对极性有机物的吸附作用增强对极性有机物的吸附作用增强 2 供试品的制备供试品的制备：按照各药品质量标准规：按照各药品质量标准规

5、 定的方法进行提取分离。制得的供试品应放定的方法进行提取分离。制得的供试品应放 置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样 量。量。 3 3 对照品溶液的制备对照品溶液的制备：可按质量标准规定：可按质量标准规定 精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶 中备用。标准药材对照溶液，一般需照供试中备用。标准药材对照溶液，一般需照供试 品的制备方法制备。在使用对照品溶液时一品的制备方法制备。在使用对照品溶液时一 定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止 造成对照品污染。造成对照品污染。 4 4

6、点样点样：按规定吸取溶液用定量点样毛细按规定吸取溶液用定量点样毛细 管或色谱用微量注射器点样于薄层板上。管或色谱用微量注射器点样于薄层板上。 点样基线距底边的距离为点样基线距底边的距离为1 12cm2cm，点间距，点间距 一般为一般为1.0-1.5cm1.0-1.5cm。点样直径一般应小于。点样直径一般应小于 5mm5mm。两个以上的点样应在同一水平线。两个以上的点样应在同一水平线 上，并与薄层板的底边平行。点样时必须上，并与薄层板的底边平行。点样时必须 注意勿损伤薄层表面。注意勿损伤薄层表面。 点样示意图点样示意图 对照品对照品 样样 供试品样供试品样 点样直径点样直径5mm1cm点间距点间

7、距1.5cm 1-2cm 自动点样器自动点样器毛细管点样毛细管点样 5 5 展开展开 展开室展开室 展开剂（流动相）的选择展开剂（流动相）的选择：主要根据样品中主要根据样品中 各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解 度等因素来考虑。度等因素来考虑。 展开剂的选择展开剂的选择 正己烷正己烷 环己烷环己烷 四氯化碳四氯化碳 甲苯甲苯 氯仿氯仿 正丁醇正丁醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水 溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强 在一块薄层板上进行试验：在一块薄层板上进行试验： 若所选展开剂使混合物中所有的

8、组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极 性过强；性过强； 若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶 剂的极性过弱。剂的极性过弱。 理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的R Rf f值相差尽可能大。值相差尽可能大。 各组分理想的比移值在各组分理想的比移值在0.2-0.80.2-0.8之间。之间。 当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。先当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂

9、。先 用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大 的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组 合。合。 1-2cm 展开示意图展开示意图 展开剂要接触到薄展开剂要接触到薄 层板下沿，但切勿层板下沿，但切勿 接触到样点。接触到样点。 盖上盖子，展开。盖上盖子，展开。 观察展开情况。观察展开情况。 取出薄层板取出薄层板 上升法上升法倾斜上行法倾斜上行法下降法下降法 展开方式示意图展开方式示意图 影响展开的因素影响展开的因素 A

10、A 相对湿度的影响相对湿度的影响 B B 溶剂蒸汽的影响溶剂蒸汽的影响 C C 温度的影响温度的影响 D D 展距的影响展距的影响 展开中斑点异常现象的探讨展开中斑点异常现象的探讨 （1 1）边缘效应边缘效应：同一种化合物，在同一块薄层板上，：同一种化合物，在同一块薄层板上， 用同一展开剂，在同一层析缸内展开后，薄层中部的用同一展开剂，在同一层析缸内展开后，薄层中部的 斑点比薄层两侧边缘处的斑点的斑点比薄层两侧边缘处的斑点的 RfRf值小即为边缘效值小即为边缘效 应。应。 常用的常用的解决办法解决办法： 增加展开室（层析缸）中溶剂蒸气饱和度。增加展开室（层析缸）中溶剂蒸气饱和度。 选用较合适的

11、单一展开剂代替混合展开剂。选用较合适的单一展开剂代替混合展开剂。 采用共沸混合展开剂代替一般混合展开剂。采用共沸混合展开剂代替一般混合展开剂。 在薄层板的两边各刮去约在薄层板的两边各刮去约5mm5mm的吸附剂有助于防止的吸附剂有助于防止 边缘效应。边缘效应。 （2 2）拖尾现象拖尾现象 （3 3）斑点形成念珠状斑点形成念珠状 （4 4）同一块薄板上出现比移值相差悬殊同一块薄板上出现比移值相差悬殊 的斑点的斑点 （5 5）斑点比移值不稳定斑点比移值不稳定 （6 6）斑点异形斑点异形 6 6 显色显色 A 光学检出法光学检出法 a a 自然光自然光b b 紫外光紫外光c c 荧光荧光 B 蒸汽显色

12、法蒸汽显色法 C 物理显色法物理显色法 D 试剂显色法试剂显色法 a a喷雾显色喷雾显色 b b 浸渍显色浸渍显色 ( 通用显色剂通用显色剂 硫酸溶液、硫酸溶液、0.5%0.5%碘的氯仿溶液、碘的氯仿溶液、 中性中性0.05%0.05%高锰酸钾溶液、碱性高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液、碱性高锰酸钾溶液) ) 三用紫外仪三用紫外仪显色用喷雾器显色用喷雾器 举例举例 麻杏石甘冲剂中麻黄的鉴别麻杏石甘冲剂中麻黄的鉴别 处方处方 麻黄麻黄31g 31g 苦杏仁苦杏仁31g 31g 生石膏生石膏157g 157g 甘草甘草 31g31g 鉴别鉴别 供试品溶液制备：取本品供试品溶液制备：取本品10g10g，加水

13、，加水50ml50ml使溶解，使溶解， 加氨水加氨水1ml1ml使成碱性，用乙醚提取使成碱性，用乙醚提取2 2次，每次次，每次10ml10ml， 合并提取液，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液挥去合并提取液，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液挥去 乙醚，残渣加甲醇乙醚，残渣加甲醇2ml2ml，作为供试品溶液。，作为供试品溶液。 对照品溶液制备：取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成对照品溶液制备：取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成 每每1ml1ml含含1mg1mg的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。 展开系统：硅胶板；以展开系统：硅胶板；以 氯仿甲醇浓氨水试液氯仿甲醇浓氨水试液 （20:5:0.520:5:0.5）为展开剂；）为展开剂； 显色：茚三酮试液，在显色：茚三酮试液，在 105105加