扫描电镜与透射电镜

1、（一）一般光学显微镜术 镜下结构称光镜（light microscope LM) 结构； 放大倍数1000倍； 分辨率0.2m； 组织制成薄片，以利光线通过。 制片过程 （1）取材（1.0cm) 固定(甲醛） 酒精脱水 （低-高） 透明（二甲苯） 浸蜡包埋 切 片（510 um） 展片； （2）脱蜡（二甲苯） 酒精（高-低） 水 苏木精-伊红染色 酒精脱水（低-高） 透明 （二甲苯） 封片（树胶） （3）染色(staining)： 是用染料使无色组织切片着色，增加对 比度， 便于镜下观察。染色方法很多，但没有 一种 能使细胞全部结构同时着色。 常用的染色方法： 苏木精（hematoxylin）

2、：细胞核和胞质内的嗜 碱性物质着蓝紫色 。 伊红（eosin）：细胞质基质和间质内的胶 原纤维等着红色。 H.E 银染：用硝酸银将神经细胞染为黑色。 醛品红染色：将弹性纤维染为紫色。 甲苯胺蓝：将肥大细胞的分泌颗粒染为紫 色。 活体染色：取动物组织材料之前活体注射 染料，观察巨噬细胞的吞噬情况。 冰冻切片：组织液氮骤冷，恒冷箱切 片机切片(糖类、脂类、酶、核酸 等）。 涂片：将游离的细胞直接涂于切片上。 铺片：将疏松结缔组织或肠系膜等撕 成薄片铺在载玻片上。 磨片：骨和牙等硬组织可磨为薄片。 (transmission electron microscope TEM) 透射电子显微镜技术的组织

3、须用戍二醛或锇酸固定， 树脂包埋，超薄切片(厚5080nm），再经铅盐等 重金属盐染色后，在透射电子显微镜下观察。 电镜下所见的结构称(ultrastructure)， 被金属所染部位，荧光屏上显得暗，图象较黑，称 为电子密度高；反之则称为电子密度低。 被检结构和重金属盐相结合的称正染色；被检结构 本身不与重金属盐结合，而其周围染上重金属盐的 称负染色。一般染色都是正染色。 分辨率为0.2m，放大倍数约为1000倍； 分辨率为0.2nm，比光镜高1000倍，可放 大几万倍到几十万倍，因此电镜能观察到细胞 的更微细结构。 在光镜与电镜下进行观察，常用的长度计量单 位为毫米（mm）、微米（m）和纳

4、米（nm）。 这些单位间的关系如下：m(微米)10-3mm(毫 米)；nm(纳米)10-3m(微米) （scanning electron microscope） 扫描电子显微镜技术要观察的组织不需 制成切片。 固定后的标本，在其表面喷镀金，在荧 光屏上即可显示细胞或组织表面的立体结 构。 如细胞表面的突起、微绒毛、纤毛等。 临床分离葡萄球菌L型葡萄球菌L型回复后 细菌细菌L型型 菌落类型菌落类型 电镜照片电镜照片 1、透射电镜 ：观察组 织、细胞内部超微结构。 分辨率0.2nm。 标本制备：1、固定 （戊二 醛与锇酸等） 2、包埋（树 脂） 3、切片（50-80nm) 4、 染色（醋酸铀和柠

5、檬酸铅等 重金属） 标本在荧光屏上呈黑白反差 的结构影像。 电子密度高、 电子密度低：被重金属浸染 呈黑色的结构，称电子密度 高；反之，浅染的部分称电 子密度 细胞膜细胞膜 为于细胞壁内紧包细胞质，结构与真核细胞基本相同。为于细胞壁内紧包细胞质，结构与真核细胞基本相同。 功功 能能 细胞膜电镜照片细胞膜电镜照片 分泌呼吸分泌呼吸 载体蛋白载体蛋白脂质双层脂质双层 细胞膜 模式结构图 物质转运物质转运 生物合成生物合成 白喉杆菌白喉杆菌 细胞膜与中介体细胞膜与中介体 中介体中介体 部分细胞膜折叠形成的向内陷入细胞质中的囊状物部分细胞膜折叠形成的向内陷入细胞质中的囊状物 功功 能能 类似真核细胞

6、线粒体，为细菌提 供大量能量。 Mesosome 异染颗粒异染颗粒 质粒质粒 细菌核蛋白体细菌核蛋白体 电镜照片 特殊结构 荚荚 膜膜 化学组成：化学组成： 功能：功能： 肺炎链球菌 产汽荚膜杆菌 肺炎链球菌 Capsule 多糖或多肽 抗吞噬作用 粘附作用 抗有害物质损伤作用 鞭鞭 毛毛 特殊结构 Flagellum 化学组成：化学组成： 功能：功能： 鞭毛蛋白 运动器官 与致病有关 鉴定分类细菌 芽 胞 功能与医学上意义：功能与医学上意义： 特殊结构 Spore 脱水而成，为细菌休眠形式脱水而成，为细菌休眠形式 对外界的抵抗力增加 可发芽成繁殖体有致病性 有鉴别作用 应以杀死芽胞为灭菌效果的指标 组织化学术(histochemistry) 通过化学或物理反应原理,在切片上加 某种试剂，和组织中的待检物质发生化 学反应，其最终产物或为有色沉淀物， 以光镜观察；或为重金属沉淀，用电镜 观察。显示组织切片或细胞内糖类、脂 类、酶、核酸等化学成分。 PAS反应： (periodic acid Schiff reaction) 显示多糖和蛋白多糖的常用方法， 又称过碘酸一雪夫反应。过碘酸 先将糖分子的乙二醇基氧化为乙 二醛基，后者继而与Schiff试剂结 合