微生物检测实习

1、一、实习时间、地点和实习单位 实习时间：2014年6月9日-2014年6月20日 实习地点：生化系实验室 实习单位：邵阳学院二、实习过程概述 2014年6月9日：实习动员大会 2014年6月10日-2014年6月13日：查找资料，制定方案 2014年6月15日：酸奶中酸度的测定 2014年5月16日：酸奶中脂肪的测定 2014年6月17 日：酸奶中蔗糖的测定 2014年6月 18日：酸奶中非乳脂总固体的测定 2014年6月19 日：酸奶中蛋白质的测定2014年6月20日：实验数据的统计分析三、 实习内容课题名称：酸奶质量分析与检验实验一 酸度的测定（一）、实验目的1、熟练氢氧化钠标准溶液的配制

2、和标定；2、掌握直接滴定法测酸度的方法。（二）、原理 酸度是指中和100g样品所需0.1000mol/l氢氧化钠标准溶液的体积（ml）。以酚酞为指示液，用0.1000mol/l标准溶液滴定10g（三）、试剂和材料1、酚酞指示液：称取0.5g酚酞75m体积分数95%的乙醇中，并加入20ml水，然后滴加氢氧化钠溶液至微粉色，再加入水定容至100ml。2、0.1mol/l氢氧化钠标准溶液(250ml):准确称取1g氢氧化钠固体加水溶解稍冷却后转入250 ml容量瓶中定容，充分摇匀。3、中性乙醇乙醚混合液：取等体积的乙醇、乙醚混合后加 3 滴酚酞指示液，以氢氧化钠溶液（4 g/l）滴至微红色。（四）、

3、仪器：分析天平，碱式滴定管（2个）、200ml的锥形瓶（2个）、量筒（1个）、移液管（1个）、吸尔球、玻璃棒、水浴锅。（五）、操作步骤1、氢氧化钠溶液的标定：、准确称取0.400.50g基准试剂邻苯二甲酸氢钾三份,置于锥形瓶中标号，、加2030ml蒸馏水溶解后，加1滴酚酞指示剂。、用配制好的氢氧化钠溶液分别滴定至溶液呈微红色，30s内不褪色。记录每次消耗 的氢氧化钠溶液的体积数，计算。2、酸度的测定：、称取10g（精确到0.001g）样品，置于150ml锥形瓶中。、加20ml蒸馏水，混匀。、再加入2.0ml酚酞指示液，混匀。、用氢氧化钠标准溶液滴定至微红色并30s内不褪色。记录消耗的氢氧化钠标

4、 准溶液的体积数，重复三次。（六）、结果计算 试样中的酸度数值以（ot）表示，按下式计算：式中： x2试样的酸度，单位为度（ot）； c2氢氧化钠标准溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升（mol/l ）； v2滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积，单位为毫升（ml ）； m2试样的质量，单位为克（g）； 0.1酸度理论定义氢氧化钠的摩尔浓度，单位为摩尔每升（mol/l ）。（七）、实验数据及记录试样一试样二试样的质量9.9869.981v2滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积7.687.65x2试样的酸度，单位为度（ot）76.9176.65国标中发酵乳酸度70g/100g，所以该酸奶符合国家标准实验二 蔗糖的

5、测定（一）、实验目的掌握盐酸水解法测定蔗糖的方法和原理（二）、实验原理1、样品脱脂后，用水或乙醇提取，提取液经澄清处理以除去蛋白质等杂质，再用盐酸进行水解，是蔗糖转化为还原糖。然后按还原糖测定方法分别测定水解前后样品液中还原糖量，两者差值即为由蔗糖水解产生的还原糖量，即转化糖含量，乘以换算系数即为蔗糖含量。2、一定量的酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成蓝色氢氧化铜沉淀，沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的酒石酸钾钠铜络合物。样品经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，用样品液滴定，样品液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，将其中的二价铜还原生成红色氧化亚铜沉淀，稍微过量的还原糖立即将次甲

6、基蓝还原，溶液蓝色消失，以此为滴定终点。根据含还原糖样品液滴定的体积，就可计算样品中还原糖的含量。（三）、实验器材与试剂（1）容量瓶100 ml、250 ml (2)三角瓶250 ml (3)酸式滴定管50 ml或25 ml (4)烧杯100m1 (5)吸管5 ml、50 ml (6)分析天平 (7)电烧炉 (8)恒温水浴锅（9）6mol/l盐酸溶液（10）0.1%甲基红乙醇溶液 称取0.1g甲基红，用60%乙醇溶解并定容100ml。（11）20%氢氧化钠溶液（12）0.1%转化糖标准溶液 准确称取105烘干至恒重的纯蔗糖1.9000g，加水溶解并移入1000ml容量瓶中，定容，混匀。取50m

7、l于100ml容量瓶中，加6mol/l盐酸溶液5ml，在6870水浴中加热15min，取出迅速冷却至室温，加2滴0.1%甲基红乙醇溶液，用20%氢氧化钠溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。此溶液每毫升含转化糖1mg。(1) 碱性酒石酸铜溶液甲液：称取15.00 g硫酸铜(cuso45h2o)(ar)及0.03g次甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释至1000 ml。(13) 碱性酒石酸铜溶液乙液：称取50g酒石酸钾钠(ar)和75g氢氧化钠(ar)，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后用蒸馏水稀释至1000 ml，贮存于具橡胶塞玻璃瓶中。(14)乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3ml冰乙酸，

8、加水溶解并稀释至100ml。(15)10.6%亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100ml。（16）葡萄糖标准溶液：精密准确称取1.0000g至(991)干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加人5ml盐酸，并以水稀释至1000ml。此葡萄糖溶液浓度为l.0 mg/ml。（四）、实验步骤1、样品处理乳类、乳制品及含蛋白质的冷食品：称取约2.505.00g固体样品置于250ml容量瓶中，加50ml水，摇匀。摇匀后慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。取一定量样品，按直接滴定法或高锰酸钾滴定法中的样品

9、处理方法处理。吸取处理后的样液2份各50ml，分别放入100ml容量瓶中，一份加入5ml6mol/l盐酸溶液，6870水浴中加热15min，取出迅速冷却至室温，加2滴0.1%甲基红乙醇溶液，用20%氢氧化钠溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。另一份直接用水稀释到100ml。然后按直接滴定法或高锰酸钾滴定法测定还原糖含量。2、标定碱性酒石酸铜溶液吸取5.0ml碱性酒石酸铜乙液及5.0ml甲液，置于100ml锥形瓶中（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶），加水20ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁

10、沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录葡萄糖标准溶液消耗体积；平行操作两份，取其平均值，计算每10ml（甲、乙液各5ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。 3、样品溶液预测吸取5.0ml碱性酒石酸铜乙液及5.0ml甲液，置于100ml锥形瓶中，加水20ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾状态，以先快后慢，从滴定管中滴加样品溶液，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样品液消耗体积。4、样品溶液测定吸取5.0ml碱性酒石酸铜乙液及5.0ml甲液，置于100ml锥形瓶中，加水20ml，加入玻璃

11、珠2粒，快速从滴定管中滴加比预测体积少1ml的样品溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度滴定至终点，记录样品液消耗体积；平行操作三份，得出平均消耗体积。（五）、计算方法计算公式式中：x 样品中还原糖的含量(以葡萄糖计)，%； m110ml碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，mg； m2样品质量，g； v1测定时消耗样品溶液的平均体积，mlv2测定是消耗未经过水解的样品稀释体积 ml（六）、实验记录及数据处理实验编号12标定消耗体积v0/ml12.9812.99 标定平均消耗体积 12.985m110m碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量13.1513.20 样品质量m2/g3.5

12、433.544滴定时消耗体积v2/ml17.7017.80 消耗体积v1/ml无论多少不变化无论多少不变化 蔗糖含量9.969.94平均蔗糖含量 9.95实验三 酸奶中脂肪含量的测定（一）、实验目的熟悉酸奶中脂肪含量的测定方法及应用范围；掌握酸水解法测定脂肪含量的方法；掌握恒温水浴锅的使用。（二）、实验原理样品用酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。（三）、主要仪器与试剂 1、分析天平、恒温水浴锅、具塞刻度量筒（100ml）、大试管（50ml）、干燥管、锥形瓶、玻璃棒、瓷盘 2、盐酸：25+11: 3、95%乙醇 4、乙醚 5、石油醚（沸程30-60）（四）、实验步骤1、样品处理

13、固体样品：精密度称取酸奶2g，置于50ml大试管内，混匀后再加10ml盐酸。 2、将试管放入70-80水浴中，每隔5-10min以玻璃棒搅拌1次，至酸奶样品消化完全为止，约40-50min。3、取出试管，加入10ml乙醇，混合。冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中，以总量为25ml乙醚分次洗试管和玻璃棒，一并倒入具塞量筒中。待乙醚完全倒入量筒后，加塞振摇1min（不可猛摇），小心开塞，放出气体，再塞好，静置12min,小心开塞，并用石油醚-乙醚等量混合液（取10ml）冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置15min以上，不可摇荡，待上部液体清晰，吸出上清液置于已恒重的锥形瓶内。再加5ml乙醚于具塞量筒

14、内，振摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入原锥形瓶内。将锥形瓶置水浴上蒸干，置95-105烘箱中干燥1h，取出放入干燥器内冷却0.5h后称量。（五）、计算 x=(m1-m0)/m2100%式中： x：酸奶中脂肪的含量，%; m1:锥形瓶和脂肪的含量，g; m0:锥形瓶的质量，g; m2:酸奶的质量，g.(六)、实验记录及数据处理一二m1:锥形瓶和脂肪的含量88.99179.535m0:锥形瓶的质量88.78679.322m2:酸奶的质量10.00310.005x：酸奶中脂肪的含量2.052.12平均含量2.09实验四 非脂乳固体的测定（一）、原理先分别测定出乳及乳制品中的总固体含量、脂肪含量（如

15、添加了蔗糖等非乳成分含量，也应扣除），再用总固体减去脂肪和蔗糖等非乳成分含量，即为非脂乳固体。（二）、试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为 gb/t 6682 规定的三级水。2.1 平底皿盒：高 20 mm25 mm，直径 50 mm70 mm 的带盖不锈钢或铝皿盒，或玻璃称量皿。2.2 短玻璃棒：适合于皿盒的直径，可斜放在皿盒内，不影响盖盖。2.3 石英砂或海砂：可通过 500 m 孔径的筛子，不能通过 180 m 孔径的筛子，并通过下列适用性测试：将约 20 g 的海砂同短玻棒一起放于一皿盒中，然后敞盖在 100 2 的干燥箱中至少烘 2 h。把皿盒盖盖后放入干燥器中冷却

16、至室温后称量，准确至 0.1 mg。用 5 ml 水将海砂润湿，用短玻棒混合海砂和水，将其再次放入干燥箱中干燥 4 h。把皿盒盖盖后放入干燥器中冷却至室温后称量，精确至 0.1 mg,两次称量的差不应超过 0.5 mg。如果两次称量的质量差超过了 0.5 mg，则需对海砂进行下面的处理后，才能使用：将海砂在体积分数为 25 %的盐酸溶液中浸泡 3d，经常搅拌。尽可能地倾出上清液，用水洗涤海砂，直到中性。在 160 条件下加热海砂 4 h。然后重复进行适用性测试。（三）、仪器和设备1 天平：感量为 0.1 mg。2 干燥箱。3 水浴锅。（四）、分析步骤1 总固体的测定在平底皿盒（4.1）中加入

17、20 g 石英砂或海砂（4.3），在 100 2 的干燥箱中干燥 2 h，于干燥器冷却 0.5 h，称量，并反复干燥至恒重。称取 5.0 g（精确至 0.0001 g）试样于恒重的皿内，置水浴上蒸干，擦去皿外的水渍，于 100 2 干燥箱中干燥 3 h，取出放入干燥器中冷却 0.5 h，称量，再于100 2 干燥箱中干燥 1 h，取出冷却后称量，至前后两次质量相差不超过 1.0 mg。试样中总固体的含量按式（1）计算：式中：x试样中总固体的含量，单位为克每百克（g/100g）；m1皿盒、海砂加试样干燥后质量，单位为克（g）；m2皿盒、海砂的质量，单位为克（g）；m试样的质量，单位为克（g）。2

18、.总固体的数据m1皿盒、海砂加试样干燥后质量为16.712 gm2皿盒、海砂的质量15.861 gm试样的质量为4.806 gx试样中总固体的含量为17 g/100g(五)、分析结果的表达式中：xnft试样中非脂乳固体的含量，单位为克每百克（g/100g）；x试样中总固体的含量，单位为克每百克（g/100g）；x1试样中脂肪的含量，单位为克每百克（g/100g）；x2 试样中蔗糖的含量，单位为克每百克（g/100g）。（六）、实验记录及数据处理x试样中总固体的含量17 g/100gx1试样中脂肪的含量2.09 g/100gx2 试样中蔗糖的含量9.95 g/100gxnft试样中非脂乳固体的含

19、量4.96 g/100g实验五 蛋白质的测定(一)、目的1掌握微量凯氏定氮法测定蛋白质的方法2了解微量定氮装置的原理及应用(二)、原理食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，在 ph 4.8 的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的 3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。在波长 400 nm 下测定吸光度值，与标准系列比较定量，结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。(三)、试剂和材料1 硫酸铜（cuso45h2o）。2 硫酸钾（k2so4）。3 硫酸（h2so4密度为 1.84 g/l）：优级纯。4 氢氧化钠（naoh）。5 对硝基

20、苯酚（c6h5no3）。6 乙酸钠（ch3coona3h2o）。7 无水乙酸钠（ch3coona）。8 乙酸（ch3cooh）：优级纯。9 37%甲醛（hcho）。10 乙酰丙酮（c5h8o2）。11 氢氧化钠溶液（300g/l）：称取 30 g 氢氧化钠加水溶解后，放冷并稀，释至 100 ml。12 对硝基苯酚指示剂溶液（1g/l）：称取0.1g对硝基苯酚指示剂溶于 20 ml 95%乙醇中，加水稀释至 100 ml。13 乙酸溶液（1 mol/l）：量取 5.8 ml 乙酸（3.8），加水稀释至 100 ml。14 乙酸钠溶液（1 mol/l）：称取 41 g 无水乙酸钠（3.7）或 68

21、 g 乙酸钠（3.6），加水溶解后并稀释至 500 ml。15 乙酸钠-乙酸缓冲溶液：量取 60 ml 乙酸钠溶液（3.14）与 40 ml 乙酸溶液（3.13）混合，该溶液 ph 4.8。16 显色剂：15 ml 甲醛（3.9）与 7.8 ml 乙酰丙酮（3.10）混合，加水稀释至 100 ml，剧烈振摇混匀（室温下放置稳定 3d）。17 氨氮标准储备溶液（以氮计）（1.0 g/l）：称取 105 干燥 2 h 的硫酸铵 0.4720 g 加水溶解后移于 100 ml 容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于 1.0 mg 氮。18 氨氮标准使用溶液（0.1 g/l）：用移液管吸取

22、10.00 ml 氨氮标准储备液（3.17）于 100ml 容量瓶内，加水定容至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于 0.1mg 氮。（四）、仪器和设备1 分光光度计。2 电热恒温水浴锅：100 0.5 。3 10 ml 具塞玻璃比色管。4 天平：感量为 1mg。（五）、分析步骤1 试样消解称取经粉碎混匀过 40 目筛的固体试样 0.1 g0.5 g（精确至 0.001 g）半固体试样 0.2 g1 g（精确至 0.001 g）或液体试样 1 g5 g（精确至 0.001 g），移入干燥的 100 ml 或 250 ml 定氮瓶中，加入 0.1 g硫酸铜、1 g 硫酸钾及 5 ml 硫酸（3.3），

23、摇匀后于瓶口放一小漏斗，将定氮瓶以 45角斜支于有小孔的石棉网上。缓慢加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热半小时。取下放冷，慢慢加入 20 ml 水，放冷后移入 50 ml 或 100 ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。按同一方法做试剂空白试验。2 试样溶液的制备吸取 2.00 ml5.00 ml 试样或试剂空白消化液于 50 ml 或 100 ml 容量瓶内，加 1 滴2 滴对硝基苯酚指示剂溶液（3.12），摇匀后滴加氢氧化钠溶液（3.11）中和至黄色，再滴加乙酸溶液（3.13）至

24、溶液无色，用水稀释至刻度，混匀。3 标准曲线的绘制吸取 0.00 ml、0.05 ml、0.10 ml、0.20 ml、0.40 ml、0.60 ml、0.80 ml 和 1.00 ml 氨氮标准使用溶液（相当于 0.00 g、5.00 g、10.0 g 、20.0 g、40.0 g、60.0 g、80.0 g 和 100.0 g 氮），分别置于 10 ml 比色管中。加 4.0 ml 乙酸钠-乙酸缓冲溶液（3.15）及 4.0 ml 显色剂（3.16），加水稀释至刻度，混匀。置于 100 水浴中加热 15 min。取出用水冷却至室温后，移入 1 cm 比色杯内，以零管为参比，于波长 400

25、nm 处测量吸光度值，根据标准各点吸光度值绘制标准曲线或计算线性回归方程。4 试样测定吸取 0.50 ml2.00 ml（约相当于氮100 g）试样溶液和同量的试剂空白溶液，分别于 10 ml 比色管中。以下按 5.3自“加 4 ml 乙酸钠-乙酸缓酸溶液（ph 4.8）及 4 ml 显色剂”起操作。试样吸光度值与标准曲线比较定量或代入线性回归方程求出含量。（六）、分析结果的表述试样中蛋白质的含量按式（1）进行计算 式中：x 试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）；c 试样测定液中氮的含量，单位为微克（g）；c0试剂空白测定液中氮的含量，单位为微克（g）；v1 试样消化液定容体积，

26、单位为毫升（ml）；v2 制备试样溶液的消化液体积，单位为毫升（ml）；v3 试样溶液总体积，单位为毫升（ml）；v4 测定用试样溶液体积，单位为毫升（ml）；m 试样质量，单位为克（g）；f 氮换算为蛋白质的系数。m试样的质量，单位为克（g）；f氮换算为蛋白质的系数。一般食物为 6.25；纯乳与纯乳制品为 6.38；面粉为 5.70；玉米、高粱为 6.24；花生为 5.46；大米为 5.95；大豆及其粗加工制品为 5.71；大豆蛋白制品为 6.25；肉与肉制品为 6.25；麦、小米、燕麦、裸麦为 5.83；芝麻、向日葵为 5.30；复合配方食品6.25。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，蛋白质含量1 g/100 g 时，结果保留三位有效数字；蛋白质含量1 g/100 g 时，结果保留两位有效数字（七）、数据记录及分析1标准曲线的绘制0.0010.0020.0040.0060.0080.00吸光度0.000.0630.2420.4050.7190.8512.试样的测定m=0.642g试样一试样二吸光度0.1550.168平均吸光度0.162将a=0.162代入方程得，c=15.46在上述公式中，c=15