课题3血红蛋白的提取与分离自制课件

1、课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制1 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制2 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制3 写出氨基酸脱水缩合形成二肽写出氨基酸脱水缩合形成二肽 示意图示意图 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制4 氨基酸的结合方式 C H COOH R1 C H NH2COOH R2 NH2C OH NHOH 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制5 氨基酸的结合方式 C H R1 NH2OHC O H2O C H COOH R2 H NH 课题课题3血红蛋白的提取与分离自

2、制血红蛋白的提取与分离自制6 氨基酸的结合方式氨基酸的结合方式: C H R1 NH2C O C H COOH R2 H N H2O 二二 肽肽 肽键肽键 脱水缩合脱水缩合 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制7 氨基酸的结合方式氨基酸的结合方式:脱水缩合脱水缩合 肽键肽键 C H COOH R3 H NOH HCC H R1 NH2C O C H R2 H N O 二肽二肽 H2OH2O 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制8 氨基酸的结合方式氨基酸的结合方式:脱水缩合脱水缩合 C C H R1 NH2C O C H R2 H N O 肽键肽键 二

3、肽二肽 C H COOH R3 H N H2O 肽键肽键 三三 肽肽 以此类推，由多个氨基酸分子缩合而成的含有多个以此类推，由多个氨基酸分子缩合而成的含有多个 肽键的化合物，叫多肽（链状）。肽链盘曲，折叠，肽键的化合物，叫多肽（链状）。肽链盘曲，折叠， 形成有一定空间结构的蛋白质分子。形成有一定空间结构的蛋白质分子。 H2O 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制9 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制10 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制11 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制12 课题课题3血红蛋白

4、的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制13 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制14 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制15 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制16 思考思考1 1 分离生物大分子的基本思路是什么？分离生物大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理或化学的方法分离具有选用一定的物理或化学的方法分离具有 不同物理或化学性质的生物大分子。不同物理或化学性质的生物大分子。 思考思考2 2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异根据蛋白质各种特性的差异 分子的形状和

5、大小分子的形状和大小 所带电荷的性质和多少所带电荷的性质和多少 溶解度溶解度 分离不同蛋白质分离不同蛋白质 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制17 思考思考3 3 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质 的何种作用，作用结果是什么被破坏？的何种作用，作用结果是什么被破坏？ 变性、变性、空间结构变性、变性、空间结构 思考思考4 4 人们用鸡的红细胞提取人们用鸡的红细胞提取DNADNA，用人，用人 的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 鸡的红细胞具有细胞核，含有鸡的红细胞具有细胞核，含有DNADNA，便，便 于进行于

6、进行DNADNA的提取，人的红细胞无细胞的提取，人的红细胞无细胞 核，结构简单，血红蛋白含量丰富便核，结构简单，血红蛋白含量丰富便 于提取血红蛋白。于提取血红蛋白。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制18 一、凝胶色谱法原理一、凝胶色谱法原理 一些微小多孔的球体一些微小多孔的球体 内含许多贯穿的通道，内含许多贯穿的通道， 由多糖类化合物构成的如葡聚糖、琼脂糖，由多糖类化合物构成的如葡聚糖、琼脂糖， 具多孔的凝胶就叫分子筛具多孔的凝胶就叫分子筛 什么是凝胶？什么是凝胶？ 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制19 原理：原理： 当不同的蛋白质通过凝胶时

7、当不同的蛋白质通过凝胶时 相对分子质量较小相对分子质量较小相对分子质量较大相对分子质量较大 凝胶内部的通道凝胶内部的通道 容易进入容易进入 无法进入凝胶无法进入凝胶 内部的通道内部的通道 只能在只能在凝胶外部凝胶外部移动移动 路程路程较长较长 移动速度移动速度较慢较慢 路程路程较短较短 移动速度移动速度较快较快 相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制20 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制21 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制22 缓冲溶液的配制缓

8、冲溶液的配制 调节缓冲剂的（调节缓冲剂的（ ）就可）就可 以制得（以制得（ ）使）使 用的缓冲液。用的缓冲液。 12 使用比例使用比例 在不同在不同PHPH范围内范围内 通常由（通常由（ ）种缓冲剂溶解）种缓冲剂溶解 于水中配制而成。于水中配制而成。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制23 (1)0.2 mol/L(1)0.2 mol/L的的Na2HPO4Na2HPO4溶液溶液 将将71.64 g71.64 g的的NaNa2 2HPOHPO4 412H12H2 2O O溶解在溶解在1 000 mL1 000 mL 的蒸馏水中的蒸馏水中 (2)0.2 mol/L(2)0.

9、2 mol/L的的NaH2PO4NaH2PO4溶液溶液 将将31.21 g31.21 g的的NaH2PO4NaH2PO42H2O2H2O溶解在溶解在1 000 mL1 000 mL 的蒸馏水中的蒸馏水中 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制24 pHpHpHpH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 8.0 12.3 18.5 26.5 37.5 49.0 92.0 87.7 81.5 73.5 62.5 51.0 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 61.0 72.0 81.0 87.0 91.5 94.7 39.0 28.0 19.0 13.0

10、8.5 5.3 0.2 mol/L NaHNaH2 2POPO4 4/mL/mL 0.2 mol/L NaNa2 2HPOHPO4 4/mL/mL 0.2 mol/L 0.2 mol/L NaHNaH2 2POPO4 4/mL/mLNaNa2 2HPOHPO4 4/mL/mL 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制25 思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲 液是什么？它的目的是什么？液是什么？它的目的是什么？ 使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲 液模拟细胞内的液模拟细胞内的PHPH环境，保证血红蛋白环境，

11、保证血红蛋白 的正常结构和功能，便于观察（红色）的正常结构和功能，便于观察（红色） 和材料的科学研究（活性）和材料的科学研究（活性） 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制26 二、电泳的原理二、电泳的原理 概念：指概念：指带电粒子带电粒子在在电场作用下电场作用下发生发生 迁移的过程。迁移的过程。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制27 待分待分 离样离样 品中品中 各种各种 分子分子 带电性质的差异带电性质的差异 大小、形状的不同大小、形状的不同 带电分子产生不带电分子产生不 同的同的迁移速度迁移速度 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提

12、取与分离自制28 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制29 1 1、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 等因素。等因素。 分子的大小分子的大小 它所带静电荷的多少以及分子的大小它所带静电荷的多少以及分子的大小 2、SDS：十二烷基硫酸钠 十二烷基硫酸钠 为了消除静电荷对迁移率的影响为了消除静电荷对迁移率的影响 SDSSDS能与各种蛋白质形成蛋白质能与各种蛋白质形成蛋白质SDSSDS复合物，复合物， SDSSDS所所带负电荷带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原的量大大超过了蛋白质分子原 有电荷量。有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的

13、电因而掩盖了不同种蛋白质间的电 荷差别，使电泳迁移率完全取决于荷差别，使电泳迁移率完全取决于 ( )( )。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制30 电泳检测电泳检测PCR结果结果 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制31 课堂小结：课堂小结： 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制32 1、凝胶色谱法原理：、凝胶色谱法原理： 当不同的蛋白质通过凝胶时当不同的蛋白质通过凝胶时 相对分子质量较小相对分子质量较小相对分子质量较大相对分子质量较大 凝胶内部的通道凝胶内部的通道 容易进入容易进入 无法进入凝胶无法进入凝胶 内部的通道内部

14、的通道 只能在只能在凝胶外部凝胶外部移动移动 路程路程较长较长 移动速度移动速度较慢较慢 路程路程较短较短 移动速度移动速度较快较快 相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制33 待分待分 离样离样 品中品中 各种各种 分子分子 带电性质的差异带电性质的差异 大小、形状的不同大小、形状的不同 带电分子产生不带电分子产生不 同的同的迁移速度迁移速度 2、凝胶电泳原理、凝胶电泳原理 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制34 二二 实验操作实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步：蛋

15、白质的提取和分离一般分为四步： 1.样品处理和粗分离样品处理和粗分离 血血 液液 血浆血浆 水分水分 固体物质固体物质 血浆蛋白血浆蛋白 无机盐无机盐 磷脂磷脂 葡萄糖等葡萄糖等 血细胞血细胞 白细胞白细胞 血小板血小板 红细胞红细胞 （最多）（最多） 血红血红 蛋白蛋白 （ ） 两个两个a a肽链肽链 两个两个一肽链肽链 样品处理和粗分离样品处理和粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定 共四条肽链共四条肽链90 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制35 亚铁血红素集团亚铁血红素集团 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制36 课题课题3血红蛋白的提取与分离自

16、制血红蛋白的提取与分离自制37 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制38 1、红细胞的洗涤：目的是去除杂蛋白。要 加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分 层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水 洗涤。 2、血红蛋白的释放：在蒸馏水和甲苯作用 下，红细胞破裂释放 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制39 磁力搅拌器 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制40 搅拌器转子 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制41 搅拌器正在工作 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制42 3、分离血红蛋白溶液

17、：离心分层；滤纸 过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出 红色透明液体。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制43 第第1 1层（最上层）：层（最上层）： （ ）甲苯层）甲苯层 第第2 2层（中上层）：层（中上层）： （ ）的沉淀层，的沉淀层， （ ）色薄层固体）色薄层固体 第第3 3层（中下层）：层（中下层）： （ ）的水溶液层的水溶液层 （ ）的液体）的液体 第第4 4层（最下层）：层（最下层）： 其它杂质（其它杂质（ ）的沉淀层）的沉淀层 无色透明无色透明 脂溶性物质脂溶性物质 白白 血红蛋白血红蛋白 红色透明红色透明 暗红色暗红色 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血

18、红蛋白的提取与分离自制44 用滤纸过滤，用滤纸过滤， 除去红细胞破除去红细胞破 碎物沉淀，于碎物沉淀，于 分液漏斗中静分液漏斗中静 置片刻后，置片刻后，分分 出下层的红色出下层的红色 透明液体透明液体。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制45 4 4、透析：、透析：装入透析袋并置装入透析袋并置 于磷酸缓冲液中（于磷酸缓冲液中（PHPH为为7.07.0） 透析。透析。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制46 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制47 利用透析袋透析 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制48

19、 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制49 二、凝胶色谱纯化 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制50 2.2.凝胶色谱制作凝胶色谱制作 1 1）凝胶色谱柱的制作）凝胶色谱柱的制作 取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米的玻璃厘米的玻璃 管，两端需用砂纸磨平。管，两端需用砂纸磨平。 底塞的制作：底塞的制作： 打孔打孔 挖出凹穴挖出凹穴 安装移液管安装移液管 头部头部 覆盖尼龙网覆盖尼龙网，再用，再用100100目尼龙纱包目尼龙纱包 好。好。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制51 课题课题3血红蛋白的提取与分离自

20、制血红蛋白的提取与分离自制52 2 2）凝胶色谱柱填料的处理）凝胶色谱柱填料的处理 （1 1）凝胶的选择：）凝胶的选择： （ ）（）（G-75G-75） “G G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度表示凝胶的交联程度，膨胀程度 及分离范围。及分离范围。 7575表示凝胶的得水值，即每克凝胶表示凝胶的得水值，即每克凝胶 膨胀时吸水膨胀时吸水7.57.5克。克。 （2 2）方法：）方法： 配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量 的凝胶浸泡于（的凝胶浸泡于（ ）中充分溶胀后，）中充分溶胀后， 配成（配成（ ）。）。 蒸馏水蒸馏水 凝胶悬浮液凝胶悬浮液 交联葡聚糖凝胶交联葡聚糖凝胶

21、 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制53 固定：将色谱柱处置固定在支架上固定：将色谱柱处置固定在支架上 装填：装填： 将（将（ ）一次性的缓慢一次性的缓慢 倒入（倒入（ ）内，装填时轻轻敲动色）内，装填时轻轻敲动色 谱柱，使凝胶填装均匀。谱柱，使凝胶填装均匀。 （3）凝胶色谱柱的装填方法）凝胶色谱柱的装填方法 凝胶悬浮液凝胶悬浮液 色谱柱色谱柱 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制54 洗涤平衡洗涤平衡 装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在( )( ) 高的操作压下，用高的操作压下，用300ml300ml的的20mm

22、ol/l20mmol/l的的磷酸缓冲磷酸缓冲 液（液（pHpH为为7.07.0）充分（）充分（ ）1212小时。小时。 洗涤平衡洗涤平衡 50cm50cm 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制55 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制56 3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱 加样前加样前 打开下端出口，使柱内凝打开下端出口，使柱内凝 胶面上的（胶面上的（ ）缓慢下）缓慢下 降到与（降到与（ ）平齐，）平齐， 关闭出口关闭出口 缓冲液缓冲液 凝胶面凝胶面 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制57 加加透析透析样样品品 注意正确

23、的加样操作：注意正确的加样操作： 不要触及破坏凝胶面不要触及破坏凝胶面 贴壁加样贴壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动使吸管管口沿管壁环绕移动 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制58 调整缓冲液面：与凝胶面平齐调整缓冲液面：与凝胶面平齐 滴加透析样品：用（滴加透析样品：用（ ）将）将1ml1ml（ ） 的样品加到色谱柱的（的样品加到色谱柱的（ ） 样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：（ ） 洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱 收集：收集：待（待（ ）接近色谱柱底接近色谱柱底 端时，用试管收集流出液，每（端时，用试管收集流出液，每（ ） 收集一试管连

24、续收集收集一试管连续收集 吸管吸管透析液透析液 顶端顶端 样品完全进凝胶层样品完全进凝胶层 5ml 红色的蛋白质红色的蛋白质 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制59 开始进行层析 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制60 收集得到的纯化后的蛋白 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制61 实验录像 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制62 血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱 分离时可以通过观察颜色来判断什么时分离时可以通过观察颜色来判断什么时 候应该收集洗脱液。这使血红蛋白

25、的分候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分 离过程非常直观，大大简化了实验操作。离过程非常直观，大大简化了实验操作。 思考思考 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制63 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步， 包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。 首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离 心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处 理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即 （ ）；然后通过凝

26、胶色谱法）；然后通过凝胶色谱法 将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品 的（的（ ）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进 行（行（ ）。）。 思考思考 样品的粗分离样品的粗分离 纯化纯化 纯度鉴定纯度鉴定 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制64 三、纯度鉴定三、纯度鉴定 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制65 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制66 3.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 判断（判断（ ）的蛋白质是否达到要求，）的蛋白质是否达到要求， 需要

27、进行蛋白质的鉴定。需要进行蛋白质的鉴定。 纯化纯化 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制67 实验录像 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制68 观察你处理的血液样品离心后是否分层观察你处理的血液样品离心后是否分层 （见教科书图（见教科书图5-185-18），如果分层不明显，），如果分层不明显， 可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白 的原因。此外，离心速度过高和时间过的原因。此外，离心速度过高和时间过 长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀， 也得不到纯净的红细胞，影响后续血红也得不到纯净的

28、红细胞，影响后续血红 蛋白的提取纯度。蛋白的提取纯度。 三三 实验结果分析与评价实验结果分析与评价 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制69 注意：注意：凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶 颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气 泡存在：泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质 的洗脱次序，降低分离效果。的洗脱次序，降低分离效果。 洗涤平衡洗涤平衡注意液面不要低于凝胶表面，否注意液面不要低于凝胶表面，否 则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流 动与最终生物

29、大分子物质的分离效果。不动与最终生物大分子物质的分离效果。不 能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象， 否则重新填装。否则重新填装。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制70 由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝 胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝 胶是否装填得均匀。胶是否装填得均匀。 此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝 色葡聚糖色葡聚糖20002000或红色葡聚糖，观察色带移动或红色葡聚糖，观察色带移

30、动 的情况。的情况。 如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱 的性能良好。的性能良好。 如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体 以消除气泡，消除不了时要重新装柱。以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制71 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也 正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区 带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出； 如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离 的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 课题课题3血红蛋白的提取与分离自制血红蛋白的提取与分离自制72 讨论：如何测定蛋白质的分子量？讨论：如何测定蛋白质的分子量？ 使用使用SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质 的分子量时，的分子量时，可选用一组已知分子量的标准可选用一组已知分子量的标准 蛋白同时进行电泳蛋白同时进行电泳，根据已知分子量的标准，根据已知分子量的标准 蛋白的电泳区带位置，用蛋白的电泳区带位置，用电泳迁移率和分子电泳迁移