流式细胞分析

1、 BD FACSVantageBD-Calibur Flow Cell Injector Tip Sheath fluid 高流速适用于定性测量，如免疫表型。样本高流速适用于定性测量，如免疫表型。样本 流变宽，细胞间距离缩短，这样在单位时间内流流变宽，细胞间距离缩短，这样在单位时间内流 经激光照射区的细胞数量增加，可以快速获取数经激光照射区的细胞数量增加，可以快速获取数 据。据。 低流速促使样本流变窄，单个细胞得以依次低流速促使样本流变窄，单个细胞得以依次 通过，这样大多数细胞可流经激光束的中心，细通过，这样大多数细胞可流经激光束的中心，细 胞受激光照射的能量比较均一，因而低流速适用胞受激光照

2、射的能量比较均一，因而低流速适用 于检测分辨率要求高的实验，如于检测分辨率要求高的实验，如DNA分析。分析。 Forward Angle Light Scatter 前向角前向角 FALS Sensor Laser 90 Degree Light Scatter 90度侧向角度侧向角 FALS Sensor 90LS Sensor Laser 颗粒度 细胞大小 Fluorescein (FITC) 400 nm600 nm700 nm Relative Intensity Wavelength 500 nm Excitation Emission Phycoerythrin (PE) 400

3、nm600 nm700 nm Relative Intensity Wavelength Excitation Emission 500 nm Fluorescent Dyes 600 nm300 nm500 nm700 nm400 nm 457350514610 632488 Common Laser Lines Freq Fluorescence FALS Sensor Fluorescence detector PMT PMT PMT PMT Dichroic Filters Bandpass Filters Example Channel Layout for Laser-based

4、Flow Cytometry Laser 1 2 3 4 Flow cell n设门设门 n通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如 ：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴 球细胞，可根据球细胞，可根据FSC或细胞大小，在或细胞大小，在FSC， SSC的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴 细胞亚群的荧光特性。细胞亚群的荧光特性。 488 nm laser +- Charged Plates Single cells sorted into test tubes FALS Sen

5、sor Fluorescence detector Purdue University Cytometry Laboratories 流式细胞术的临床应用流式细胞术的临床应用 临床常见应用临床常见应用 微转移肿瘤细胞微转移肿瘤细胞 灵敏度:10-7 细胞周期分析细胞周期分析: :在细胞周期在细胞周期( (G0G0，G1G1，S S， G2 G2 ，M)M)的各个时期，的各个时期，DNADNA的含量随各时相呈现的含量随各时相呈现 出周期性的变化。通过核酸染料标记出周期性的变化。通过核酸染料标记DNADNA，并并 由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时 期

6、的分布状态，计算出期的分布状态，计算出G0/G1%G0/G1%，S%S%及及G2/M%G2/M%。 了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可 利用细胞周期蛋白（利用细胞周期蛋白（CYCLINCYCLIN）、）、Ki67Ki67、核增殖核增殖 抗原（抗原（PCNAPCNA）等，对细胞周期进行精确的分期：等，对细胞周期进行精确的分期： G0G0、G1G1、S S、G2G2、M.M. DNA含量及细胞周期分析含量及细胞周期分析 0 200 400 600 8001000 DNA content C o u n t 0 200 400 600 8001000 0 75 150 225 Counts G0/G1 G2/M S 异倍体 PI 荧光强度荧光强度(DNA含量含量) 流式DNA周期示意图 血小板计数新标准血小板计数新标准( (双平台法双平台法) ) R = 红细胞数R3/血小板数R1(流式) 血小板数血小板数=红细胞数(血球仪)/R (国际血液学标准化委