PCR产物的纯化_第1页
PCR产物的纯化_第2页
PCR产物的纯化_第3页
PCR产物的纯化_第4页
PCR产物的纯化_第5页
已阅读5页，还剩4页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、PCRPCR产物的回收纯化产物的回收纯化 . . 实验目的实验目的 学习和掌握从琼脂糖凝胶中纯化回收学习和掌握从琼脂糖凝胶中纯化回收DNADNA片段的有片段的有 关技术。关技术。 背景知识背景知识 vDNADNA片段的纯化：主要目的是回收得到纯的目的片段的纯化：主要目的是回收得到纯的目的DNADNA片段，去片段，去 除影响除影响DNADNA连接酶活性的物质以及其它的连接酶活性的物质以及其它的DNADNA片段。片段。 v纯化纯化DNADNA片段的方法有多种，如：电洗脱法、从低熔点或普片段的方法有多种，如：电洗脱法、从低熔点或普 通琼脂糖凝胶中回收、玻璃珠纯化、柱层析以及硅胶吸附等通琼脂糖凝胶中回

2、收、玻璃珠纯化、柱层析以及硅胶吸附等 方法。目前一些生物公司推出了直接从方法。目前一些生物公司推出了直接从 PCRPCR产物中或琼脂糖产物中或琼脂糖 凝胶中回收凝胶中回收DNADNA片段的试剂盒，有效地加快了片段的试剂盒，有效地加快了DNADNA的纯化的速的纯化的速 度。度。 实验材料实验材料 vPCRPCR产物产物(1.15kb(1.15kb，带有，带有BamBamHIHI、XhoXhoI I酶切位点酶切位点) ) v酚；氯仿；无水乙醇；酚；氯仿；无水乙醇；70%70%乙醇；灭菌双蒸水乙醇；灭菌双蒸水 vTAETAE缓冲液缓冲液(1(1) ) v上样液上样液(10(10) ) 实验仪器实验仪

3、器 v1、琼脂糖凝胶电泳系统 v2、紫外观察分析仪 v3、离心机（Eppendoff） v4、单面刀片 实验步骤实验步骤 v1、制备1%琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳。 v2、在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用 纸巾吸尽凝胶表面的液体。 此时应注意尽量切除不含目的此时应注意尽量切除不含目的DNADNA部分的凝胶，部分的凝胶， 尽量减少凝胶体积，提高尽量减少凝胶体积，提高DNADNA回收率。回收率。 注：切胶时请注意不要将注：切胶时请注意不要将DNADNA长时间暴露于紫外长时间暴露于紫外 灯下，以防止灯下，以防止DNADNA损伤损伤。 v3、将切下的凝胶放入Eppendorf管中，移入100ulTE缓冲液， 使其浸没于TE缓冲液中 v4、捣碎凝胶 ,-80 ,10min 。 v5、加入等体积（各200L )酚氯仿，盖紧，剧烈振摇。 10000rpm 4 离心5分钟。 v6在一新1.5mL 离心管中加入 2.5倍体积预冷 无水乙醇、 1/10体积3M的醋酸钠。将步骤5的上清小心加入本步骤离心 管中。颠倒数次混匀。在 -80,静置30min，12000rpm 4 离心15分钟。 v7弃上清，将离心管倒置于干净吸水纸巾上5分钟。室温下 吹风

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论