九层塔萃取物对小鼠黑色素瘤细胞分泌黑色素产量的影响.doc

1、九層塔萃取物對小鼠黑色素瘤細胞分泌黑色素產量的影響高而仕 1,黃俊銘 2*1. 建國科技大學美容系2. 中山醫學大學應用化學系摘要九層塔又可稱為羅勒，學名為Ocimum basilicum ，是一種脣形科的植物，多數種類為一年生，亦有多年生的品種。台灣地區種植廣泛，為常見的香料植物。由於許多台灣本土的菜餚中使用大量的九層塔，例如：九層塔炒蛋。因使有可能使食用者在當下攝取大量的九層塔 ，因此坊間開始盛傳攝取過量的九層塔可能導致肝癌或是使皮膚變黑等未經證實的謠傳。由於九層塔屬唇形科植物，而脣形科植物往往具有大量的類黃酮成分，此成分具有強大的抗自由基、抗病毒、抗氧化、抗發炎與抗肝癌的功效，因此攝取九

2、層塔會導致肝癌則是完全沒有學理根據的謠言，事實上，攝取適量的唇形科植物反而具有保肝的功效。九層塔的水萃取物經過我們的實驗測試，結果發現在具有高達10000ppm濃度的九層塔水萃取物的環境下，小鼠黑色素細胞的存活率與黑色素產量並不會被影響。根據此濃度與人體體重的換算，一個體重60kg 的成人，九層塔攝取量高達600 克 / 日也不會對於人體的黑色素有增加的作用。根據( 行政院衛生署食品資訊網的成人均衡飲食建議量，2010) ，毎餐綠色蔬菜建議攝取三個種類，毎種類約100 公克，所以食物的攝取應注意多來源性，避免過度集中攝取某一種類的食物來源，才可以確保均衡的營養攝取與健康管理。總合以上的實驗結果

3、與飲食健康管理的正確觀念，可以放心的攝取九層塔所烹製的菜餚，而不需要擔心對於膚色變的黝黑，而九層塔的營養成分很多，植株又富含類黃酮等抗氧化成分，對於人體健康有正向的幫助。關鍵詞：九層塔、黑色素、類黃酮1壹、研究背景九層塔是種常見的香料植物，台灣民間盛傳多吃九層塔會造成皮膚黝黑，但是實際上卻沒有相關的實例報告。此外就營養學的角度而言，攝取適量的九層塔可以當作營養的來源，而攝取過量是否會對人體的黑色素有增加的作用尚未有科學證據的支持。因此本研究採用 B16-F10（小鼠黑色素瘤細胞）為實驗對象，將預先經冷凍乾燥後的九層塔萃取物按日常飲食所攝取的劑量範圍，對於B16-F10 細胞進行試驗，並偵測黑色

4、素瘤細胞的存活率與黑色素產量的測定，藉此評估經由飲食中所攝取的九層塔是否具有改變皮膚顏色的能力。九層塔又可稱為羅勒，學名：Ocimum basilicum ，是一種脣形科的植物，多數種類為一年生，亦有多年生的品種。台灣地區種植廣泛，為常見的香料植物。由於許多台灣本土的菜餚中使用大量的九層塔，例如：九層塔炒蛋。因使有可能使食用者在當下攝取大量的九層塔 ，因此坊間開始盛傳攝取過量的九層塔可能導致肝癌或是使皮膚變黑等未經證實的謠傳。由於九層塔屬脣形科植物，而脣形科植物往往具有大量的類黃酮成分，此成分具有強大的抗自由基、抗病毒、抗氧化、抗發炎與抗肝癌的功效 ( 鄭珮妏， 2003) ，因此攝取大量的九

5、層塔會導致肝癌則是完全沒有學理根據的謠言，事實上，攝取適量的唇形科植物反而具有保肝的功效。而本實驗，則欲著力研究九層萃取物對於黑色素的增生是否有顯著的影響，選用 B16-F10（小鼠黑色素瘤細胞）為研究對象，因為小鼠黑素素瘤細胞的生長迅速，培養容易，此外對於黑色素的產量多，容易觀察，因此設計以下實驗，以便進行九層塔對於黑色素細胞產量的影響。貳、研究方法一、小鼠黑色素瘤細胞的培養小鼠黑色素瘤細胞(B16-F10) 的培養方法 (Yuto Kamei ， 2009) 主要是將B16-F10 細胞培養在DMEM培養基 (Dulbecco s minimum essential medium)，此培養

6、基另外添加的成分含有10% fetal calf serum (胎牛血清 ) ， 2 mM 麩醯胺酸 (Glutamine)， 1% 非必需胺基酸 (Non EssentialAmino Acids) 與 1% 抗生素 (100 units/ml of penicillin與 100 g/ml of streptomycin)，細胞5培養箱控制在5 %CO，237 恒溫的環境 ，實驗所需的細胞培養密度維持在2106 1 10 cells/ml，每 23 天更換培養基一次，或進行繼代培養。二、 九層塔水萃取物的製備購買無農藥之新鮮九層塔莖葉部份，清洗後置入研磨機內與少許碎冰一起研磨使其均質化，經

7、簡單過濾後，將其汁液冷凍後，使用冷凍乾燥機減壓乾燥，再將取得的乾燥物研製成粉末狀密封保存於-4 乾燥環境。2圖 1：九層塔可食用的莖與葉三、 黑色素瘤細胞存活率測試細胞存活率測試主要是採用MTT試劑測定法 ( 黃俊銘， 2005) 所進行。秤取適量九層塔水萃物的粉末，溶解於DMEM培養基而製備成0、50、100、500、1500、2000、5000、 10000 ppm等濃度後滅菌處理備用。將事先培養於24-well培養皿的 B16 細胞老廢培養基抽除，並使用PBS磷酸緩衝溶液清洗後，加入含有不同濃度的九層塔萃取物培養基培養48 小時後，移除含藥培養基後使用PBS清洗兩次，在加入含有 0.5

8、M之 MTT測試劑培養 4 小時，抽去試劑保留培養皿底部藍色結晶，在加入 DMSO溶解結晶後使用波長 570nm之吸收光譜測定細胞存活率。140120100806040200050100200500100015002000500010000圖 2：經過加藥處理 48 小時培養後的小鼠黑色素瘤細胞存活率並無明顯變化，顯示九層塔濃度 10000ppm以下並不具有細胞毒性。3四、 黑色素瘤細胞黑色素產值測試黑色素產值的測試採用黑色素萃取法(Yuriko Yamaoka ， 2009) 進行。秤取適量九層塔水萃物的粉末，溶解於DMEM培養基而製備成0、50、100、500、1500、2000、5000

9、、 10000 ppm等濃度後滅菌處理備用。將事先培養於24-well培養皿的 B16 細胞老廢培養基抽除，並使用PBS磷酸緩衝溶液清洗後，加入含有不同濃度的九層塔萃取物培養基培養48 小時後，移除含藥培養基並使用PBS清洗兩次後，使用100L之 2M NaOH水溶液將收集下來的B16 細胞使用超音波震碎後萃取其黑色素，直接使用波長405nm吸收光譜測定黑色素的產值。160140120100806040200050100200500100015002000500010000圖 3：經過加藥處理 48 小時培養後的小鼠黑色素瘤細胞的黑色素產量並無明顯變化，顯示九層塔濃度 10000ppm以下並不

10、會對於黑色素有增加的作用。參、結論九層塔的水萃取物經過我們的實驗測試，結果發現在具有高達10000ppm濃度的九層塔水萃取物的環境下，小鼠黑色素細胞的存活率與黑色素產量並不會被影響。根據此濃度與人體體重的換算，一個體重60kg 的成人，九層塔攝取量高達600 克/ 日也不會對於人體的黑色素有增加的作用。根據( 行政院衛生署食品資訊網的成人均衡飲食建議量， 2010) ，毎餐綠色蔬菜建議攝取三個種類，毎種類約100 公克，所以食物的攝取應注意多來源性，避免過度集中攝取某一種類的食物來源，才可以確保均衡的營養攝取與健康管理。總合以上的實驗結果與飲食健康管理的正確觀念，我們可以放心的攝取九層塔所烹製

11、的菜餚，而不需要擔心對於膚色變的黝黑，而九層塔的營養成分很多，植株又富含類黃酮等抗氧化成分，對於人體健康有正向的幫助。4肆、參考文獻1. 鄭珮妏， 2003 年，九層塔及相關成分之抗病毒及抗癌研究，高雄醫藥大學醫學研究所碩士論文，指導教授：蔣連財。2. Yuto Kamei,Yuri Otsuka, Kouichi Abe.(2009) Comparison of the inhibitoryeffectsof vitaminE analogues on melanogenesisin mouse B16 melanoma cells.Cytotechnology 59,183 190.3. 黃俊銘， 2005 年，中藥活性成分之保護與抗癌作用之研究，中山醫學大學醫學研究所博士論文，指導教授：朱嘉一、劉哲育。4. Yuriko Yamaoka, Kenji Ohguchi, Tomohiro Itoh, Yoshinori Nozawa, Yukihiro Akao (2009) Effect of Theaflavins on melanin biosynthesis in