HPLC法测定阿莫西林舒巴坦酯片人体血药浓度(一).doc

1、HPLC法测定阿莫西林舒巴坦酯片人体血药浓度(一)【摘要】目的建立阿莫西林舒巴坦酯片中阿莫西林和舒巴坦的血药浓度测定方法。方法以色谱柱为SpberiserbODS( 3.9mm200mm,5m)；流动相为乙腈 -0.068mol/LKH2PO4(4.5：95.5)；流速为 0.8ml/min; 检测浓度为 225nm;柱温为（ 250.1）方法测定人体内阿莫西林血药浓度。以 色谱 柱为HypersilC18( 4.6mm200mm， 5m)；流 动相 为乙 腈-0.068mol/LKH2PO4(4.5：95.5);流速为 1.2ml/min; 检测波长为 210nm;柱温为（250.1）方法测

2、定人体内舒巴坦血药浓度。结果阿莫西林和舒巴坦在选定的色谱分离条件下，与血浆中杂质峰分离良好，分离度大于 1.5。阿莫西林血浆药物浓度在0.12510g/ml 范围内线性良好，r=0.9998;舒巴坦血浆药物浓度在0.10 10 g/ml 范围内线性良好，r=0.9999。阿莫西林和舒巴坦的平均回收率分别为96.25%、102.3%。两种成分的日内、日间RSD10%。结论 HPLC法测定方人体内阿莫西林和舒巴坦血药浓度方法准确度精度和灵敏度均较高，符合血浆中药物测定要求。【关键词】阿莫西林舒巴坦酯片；高效液相色谱法；血药浓度Todetecthumanbloodconcentrationofamo

3、xicillinandsulbactamwithHPLC【Abstract】ObjectiveTosetupthedetectionmethodofhumanbloodconcentrationofamoxicillinandsulbactam.MethodsThechromatographiccolumnwasSpberiserbODS( 3.9mm 200mm.5 m),andthemobilephasewasacetonitrile-0.068mol/LKH2PO4(4.5:95.5),theflowratewas0.8ml/min,thedetectionwavelengthwas22

4、5nm,andthecolumntemperaturewas25.0Wedetectedthehumanblood.1concentrationofamoxicillin,thechromatographiccolumwasHypersilC18(6mm 200mm5 m),themobilephasewasacetonitrile-0.068mol/LKH2po4(4.5:95.5),theflowratewas1.2ml/min,thedetectionwavelengthwas210nm,andthecolumntemperaturewas250.Wedetectedthehumanbl

5、oodconcentra1tionofsulbactam.ResultsWefoundthatamoxicillinandsulbactamwereundertheconditionofselectedchromatographicseparation,theresolutionofamoxicillinandsulblactamandtheimpurityinthebloodplasmawasfavorable.Theresolutionwas1.5,thehumanbloodconcentrationofamoxicillinwas0.12510 g/ml,andthelinearregr

6、ossionwasfavorable,r=0.9998.Thehumanbloodconcentrationofsulbactamwas0.1010 g/ml,andthelinearregrossionwasfavorable,r=0.9999.Theaveragerecoveryofamoxicillinandsulbactamwere96.25%and102.3%.ThetwokindsofcomponentswereRSD10%inadayornext.ConclusionThestudyshowsthatwecandetectthehumanbloodconcentrationofa

7、moxicillinandsulbactamwithHPLC,andthemethodhasverygoodaccuracy,precisionandsensitivity.Itisaccordwithdemandsofdrugdetection.【Keywords】amoxicillinandsulbactam;liquidchromatography;bloodconcentration阿莫西林舒巴坦酯是由阿莫西林和舒巴坦以共价键结合形成的化合物，阿莫西林为广谱的-内酰胺类青霉素，舒巴坦是-内酰胺酶抑制剂，无抑菌活性，能够抑制细菌产生的型型 -内酰胺酶，使阿莫西林免受酶的水解灭活，从而增加

8、阿莫西林对细菌的敏感性。该药口服后在胃肠上壁被非特异酯酶分解为阿莫西林和舒巴坦，并吸收进入人体血液循环 1。临床上主要用于治疗上、下呼吸道感染和皮肤、软组织感染及性病等 2。本文研究阿莫西林舒巴坦片口服后血浆中阿莫西林和舒巴坦药物浓度测定方法，为该制剂的人体药代动力学和生物学等效性研究及临床用药提供参考。1 材料与方法1.1 药品与试剂阿莫西林对照品 （中国药品生物制品检定所， 含量 86.2%、批号 0409-9706）；舒巴坦对照品（中国药品生物制品检定所， 含量 99.8%、批号 0430-9501）；阿莫西林舒巴坦酯片（珠海联邦制药有限公司中山分厂生产，每片含阿莫西林250mg、舒巴坦

9、 250mg，批号 030418）；乙腈为色谱纯； 乙醚、磷酸二氢钾、 盐酸高氯酸为分析纯； 水为超纯水。 1.2 仪器 waters 高效液相色谱分析系统（包括 717 自动进样器、 510 低压梯度泵、 996PDA二极管检测器， 2010 色谱管理系统），waters 高效液相色谱分析系统（包括 717 自动进样器、 600 低压梯度泵、 996PDA 二极管检测器， 2010 色谱管理系统）；液体快速混合仪 （北京长安仪器厂）；普通离心机（北京医用离心机厂） 。1.3 色谱条件1.3.1 阿莫西林色谱条件SpberserbODS( 3.9mm 200mm,5 m),C18预柱；流动相：

10、乙腈 -0.068mol/LKH2PO4(4.5:95.5);流速：0.8ml/min; 检测波长：225nm；柱温：（25 0.）1 ;灵敏度 1.0AUFS。1.3.2 舒巴坦色谱条件HyperisilC18( 4.6mm 200mm,5，C18m)预柱；流动相：乙腈 -0.068mol/LKH2PO4(4.5:95.5);流速：1.2ml/min; 检测波长：210nm；柱温：（25 0.）1 ;灵敏度 0.5AUFS。1.4 受试对象与实验设计健康男性自愿受试者20 人，汉族，年龄2325 岁，体重 6070kg,身高 168175cm。经心电、血压、血尿常规及肝肾功能检查均正常并无青

11、霉素过敏史，签署知情同意书者入选，实验前 2 周禁服任何药物。 实验前空腹 12h，于早 8：00 时用 250ml 温开水送服药物。服药后4h 统一食低蛋白低脂肪午餐，观察病房准备危急情况的抢救措施。受试者口服阿莫西林舒巴坦酯片2 片（含阿莫西林和舒巴坦均为500mg），于服药前（0h）与服药后10、20、 30、45、60、90、120、180、240、420min 采静脉血 3ml，肝素抗凝，离心取血浆，置于 -20冰箱中备用。1.5 血浆样品处理与测定1.5.1 阿莫西林血浆样品处理与测定精密量取上述储备血浆样本0.5ml，加入 0.5mol/L 高氯酸溶液 0.5ml 沉淀蛋白，旋涡

12、震荡30s,9000r/min 离心 5min,取上清液 50l,按“1.3.1项”下色谱条件分离，记录色谱图。1.5.2 舒巴坦血浆样品处理与测定精密量取上述储备血浆样本0.5ml，加入 0.5mol/LHCl 溶液 0.5ml，旋涡震荡 30s,然后加入 3ml 乙醚提取 2 次，每次旋涡震荡 60s，3000r/min 离心 5min,吸取乙醚 2.5ml。合并两次提取液，40水浴蒸干乙醚，残留物加 200l流动相充分溶解，40l进样，按“1.3.2项”下色谱条件分离，记录色谱图。1.6 血浆样本测定方法学考查1.6.1 专一性考查（ 1）取阿莫西林对照品溶液进样，按“ 1.3.1项下”方法进行色谱分离，得阿莫西林对照品色谱峰