动物细胞工程高三一轮复习(超好)

1、动物细胞工程动物细胞工程 考试大纲考试大纲考点考点2016全国全国2014全国全国自主命题自主命题 地区地区 1.动物细胞动物细胞 培养与体细培养与体细 胞克隆。胞克隆。 2.细胞融合细胞融合 与与 单克隆抗单克隆抗 体。体。 3.生物技术生物技术 中的伦理问中的伦理问 题。题。 动物细胞培动物细胞培 养与体细胞养与体细胞 克隆（克隆（15%） 2016全国全国， 40,15分分 动物细胞融动物细胞融 合与单克隆合与单克隆 抗体的制备。抗体的制备。 （5%） 2014全国全国， 40,15分分 2015江苏，江苏， 3,2分分 2014浙江，浙江， 3,6分分 2013浙江，浙江， 6,6分分

2、 考点一考点一.动物细胞培养动物细胞培养 单个细胞 细胞悬液 原代培养 传代培养 一轮材料一轮材料 P238-239 50代后 细胞癌变 2次胰蛋白酶次胰蛋白酶 动物细胞培养原理：动物细胞培养原理：_。其过程所用培养基一般。其过程所用培养基一般 是是_培养基。培养基。 动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养，因动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养，因 为为_._. 动物细胞培养过程中两次用到动物细胞培养过程中两次用到_，第一次的作用，第一次的作用 是是_；第二次是；第二次是_，目，目 的是避免动物细胞的接触抑制。的是避免动物细胞的接触抑制。 将动物细胞分散成单个细胞培养的

3、原因：将动物细胞分散成单个细胞培养的原因： 保证细胞所需要的营养供应。保证细胞所需要的营养供应。 保证细胞内有害代谢产物的及时排出。保证细胞内有害代谢产物的及时排出。 细胞增殖细胞增殖 液体液体 分化程度低，增殖能力强，更易于培养。分化程度低，增殖能力强，更易于培养。 胰蛋白酶胰蛋白酶 将剪碎的组织分散成单个细胞将剪碎的组织分散成单个细胞将贴壁细胞从瓶壁上分离下来将贴壁细胞从瓶壁上分离下来 特特 别别 提提 醒醒 微量元素微量元素 1.分析命题热图，明确答题要点分析命题热图，明确答题要点 如图，为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E两点表 示经筛选、分装后继续培养。据图分析：

4、(1)原代培养和传代培养的分界点是哪个？ (3)E点后细胞大多数具有异倍体核型，这样的细胞有什么特点？ E点后的细胞属于细胞系，能无限增殖。点后的细胞属于细胞系，能无限增殖。 (2)AB段和DE段繁殖速度缓慢的原因是什么？ B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养。点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养。 发生了接触抑制。发生了接触抑制。 癌细胞癌细胞 阅读题目阅读题目 圈出关键词圈出关键词 分析考点分析考点 C 过程过程 条件条件 培养过程过程中培养过程过程中 细胞变化细胞变化 阅读题目阅读题目 圈出关键词圈出关键词 分析考点分析考点 难难 易易 结果结果 选取10代以内

5、的 细胞，因为： _ _ _。 一般能保持正常一般能保持正常 的二倍体核型的二倍体核型 重组细胞重组细胞 重组胚胎重组胚胎 1.(2016全国课标卷全国课标卷，40)下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动 物物(二倍体二倍体)的流程。的流程。回答下列问题：回答下列问题： (1)图中图中A表示正常细胞核，染色体数为表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为，则其性染色体的组成可为 _。过程。过程表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当 时期再进行，去核时常采用时期再进行，去核时常采用

6、_的方法。的方法。 XX或或XY 显微操作去核法显微操作去核法 (2)经过多次传代后，供体细胞中经过多次传代后，供体细胞中_的稳定性会降低。的稳定性会降低。 因此，选材时必须关注传代次数。因此，选材时必须关注传代次数。 (3)若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其 原因是原因是_。 (4)与克隆羊与克隆羊“多莉多莉(利利)”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了 _ 遗传物质遗传物质（核型）（核型） 卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响卵

7、母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响 已经分化的已经分化的动物体动物体细胞核细胞核具有全能性具有全能性 供体供体 性别性别 选修三选修三 P49 来源来源 供体核供体核 卵母卵母 核移植技术核移植技术 阅读题目阅读题目 圈出关键词圈出关键词 分析考点分析考点 1.动物细胞融合动物细胞融合 (1)原理：_ 。 (2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、_ 、电激等。 (3)意义：突破了 的局限，使 成为可能， 也为制造_开辟了新途径。 细胞膜的流动性 灭活的病毒 有性杂交方法 远缘杂交 单克隆抗体 考点三、动物细胞融合与单克隆抗体的制备 (1)优点：特异性强、 ，可大量制备。 2.单克

8、隆抗体单克隆抗体 (1)制备过程 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 能产生特异性抗体能产生特异性抗体 灵敏度高灵敏度高 妙学妙记妙学妙记 1 1、制备过程的、制备过程的 “ “122” 一融合，二筛选，二培养一融合，二筛选，二培养 2、单克隆抗体的优点、单克隆抗体的优点 可、特、灵可、特、灵 第第1 1次次-杂交瘤细胞（多种）。杂交瘤细胞（多种）。 第第2 2次次-能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 问题强化：问题强化： 1 1）、本过程利用了哪些原理？）、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，动物细胞融合和动物细胞培养原理免疫原理，动物细胞融合和动物细胞培养原理 2 2）、为什么选

9、用小鼠骨髓瘤细胞与）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？ 继承了双亲细胞的遗传物质，能无限增殖又能分泌特异性抗体。继承了双亲细胞的遗传物质，能无限增殖又能分泌特异性抗体。 灭活的病毒能使细胞膜打开，细胞发生融合，不灭灭活的病毒能使细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 1.(20141.(2014课标卷课标卷，40) 40) 研究者用抗原研究者用抗原(A)(A)分别免疫分别免疫3 3只小鼠只小鼠(X(X、Y Y和和Z)Z)，每只，每只 小鼠免疫小鼠免疫5 5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价次，每次

10、免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价( (能检测出抗原能检测出抗原 抗体反应的血清最大稀释倍数抗体反应的血清最大稀释倍数) )，结果如下图所示。，结果如下图所示。 制备杂交瘤细胞，取免疫后小鼠的制备杂交瘤细胞，取免疫后小鼠的B B淋巴细胞淋巴细胞( (染色体数目染色体数目4040条条) ) 与体外培养的骨髓瘤与体外培养的骨髓瘤 细胞细胞( (染色体数目染色体数目6060条条) )按一定比例加入试管中，再加入按一定比例加入试管中，再加入PEGPEG诱导细胞融合，经筛选诱导细胞融合，经筛选 培养及抗体检测，得到不断分泌抗培养及抗体检测，得到不断分泌抗A A抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。 (1)

11、(1)制备融合所需的制备融合所需的B B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到1600016000以上，则以上，则 小鼠最少需要经过小鼠最少需要经过_次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X X、Y Y、Z Z这这3 3只只 免疫小鼠中，最适合用于制备免疫小鼠中，最适合用于制备B B淋巴细胞的是淋巴细胞的是_小鼠，小鼠， 理由是理由是_。 (2)(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 _，体系中出

12、现多种类型，体系中出现多种类型 细胞的原因是细胞的原因是_。 (3)(3)未融合的未融合的B B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_。 4 Y Y小鼠的抗体效价最高小鼠的抗体效价最高 B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的，且融合率达不到细胞融合是随机的，且融合率达不到100% 正常细胞不能无限增殖正常细胞不能无限增殖 融合融合 2.2.（海南高考）单纯疱疹病毒（海南高考）单纯疱疹病毒型型(HSV)(HSV)可引起水泡性口唇炎。可引起水泡性口唇炎。 利

13、用杂交瘤技术制备出抗利用杂交瘤技术制备出抗HSVHSV的单克隆抗体可快速检测的单克隆抗体可快速检测HSVHSV。 回答下列问题：回答下列问题： (1)(1)在制备抗在制备抗HSVHSV的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSVHSV蛋蛋 白，一段时间后，若小鼠血清中抗白，一段时间后，若小鼠血清中抗_的抗体检测呈阳性，说明小鼠体的抗体检测呈阳性，说明小鼠体 内产生了内产生了_反应，再从小鼠的反应，再从小鼠的_中获取中获取B B淋巴细胞。将该淋巴细胞。将该B B淋巴细胞淋巴细胞 与小鼠的与小鼠的_细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤

14、细细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细 胞，该细胞具有的特点是胞，该细胞具有的特点是_。 (2)(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的 _中使其增殖，再从中使其增殖，再从_中提取、纯化获得。中提取、纯化获得。 (3)(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSVHSV蛋白，其原因蛋白，其原因 是该抗体具有是该抗体具有_和和_等特性。等特性。 HSV-蛋白蛋白 体液免疫体液免疫 脾脏脾脏 骨髓瘤骨髓瘤 无限增殖且产生特异性抗体无限增殖且

15、产生特异性抗体 腹腔腹腔腹水腹水 灵敏度高灵敏度高 特异性强特异性强 单克隆抗体单克隆抗体 易错易错清零清零 易易错点错点1 1动物细胞培养时，动物细胞培养时，可可使用使用胰蛋白酶胰蛋白酶或或胃蛋白酶胃蛋白酶。 胃蛋白酶适宜胃蛋白酶适宜pHpH约为约为1.81.8。 胰蛋白酶为胰蛋白酶为7.27.27.87.8，而动物细胞培养的适宜，而动物细胞培养的适宜pHpH为为7.27.27.47.4。 易易错点错点2 2动物细胞培养液中加入动物细胞培养液中加入5%CO5%CO2 2的目的是维持气体平衡或用于呼的目的是维持气体平衡或用于呼 吸吸。 目的是目的是“维持培养液的维持培养液的pH”pH”。 易易错点错点3 3选择选择MM末末期期的卵母细胞作核移植的受体细胞的卵母细胞作核移植的受体细胞。 MM中期中期的卵母细胞，此时具备受精能力，细胞质中的物质能刺激融的卵母细胞，此时具备受精能力，细胞质中的物质能刺激融 合后重组细胞进行分裂分化，形成重组胚胎。合后重组细胞进行分裂分化，形成重组胚胎。 易易错点错点4 4混淆原代培养与传代培养混淆原代培养与传代培养 (1)(1)原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养，没有分瓶前的细胞培养。原