长期毒性作用及其试验方法

1、2021-7-251 第十第十五五章章 长期毒性作用及其试验方法长期毒性作用及其试验方法 long-term toxicity impact and test method 2021-7-252 第一节第一节 基本概念和目的基本概念和目的 第二节第二节 试验设计原则及方法试验设计原则及方法 2021-7-253 2021-7-254 长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效为观察这种中毒效 应而设计的毒理学试验称之为应而设计的毒理学试验称之为长期长期( (慢性慢性) )毒性毒性试验试

2、验。 一、定义一、定义 急性毒性试验急性毒性试验 是为观察是为观察和评价急性毒性的和评价急性毒性的有害作用有害作用或中毒反应或中毒反应 而设计的一种毒理学试验而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或。研究药物一次或2424小小 时内多次给予时内多次给予受试受试药物药物后，一定时间内后，一定时间内所产生的所产生的 毒毒性性反应反应。 2021-7-2555/20 1 2 3 给给 药药 的的 期期 限限 不不 同同 长期毒性试验与急性毒性试验长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别的根本差别 2021-7-2566/20 1 2 3 给给 药药 的的 期期 限限 不不 同同 给给 药药 的的 剂剂

3、量量 范范 围围 不不 同同 长期毒性试验与急性毒性试验长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别的根本差别 2021-7-257 蓄积作用蓄积作用 (accumulation action)(accumulation action) 当较长时间连续、反复给药当较长时间连续、反复给药时，如果时，如果给药的给药的 时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力，就会，就会 出现药物进入机体的速度出现药物进入机体的速度 ( (或总量或总量) ) 超过排除的超过排除的 速度速度 ( (或总量或总量) ) 的现象的现象，此，此时药物就有可能在体时药物就有可能在体 内逐渐增加并贮存

4、起来内逐渐增加并贮存起来，即，即蓄积作用蓄积作用。 2021-7-258 蓄积作用蓄积作用的表现形式的表现形式 作用量积蓄作用量积蓄 功能性蓄积功能性蓄积 2021-7-2599/20 1 2 3 给给 药药 的的 期期 限限 不不 同同 给给 药药 的的 剂剂 量量 范范 围围 不不 同同 观观 察察 的的 毒毒 效效 应应 不不 同同 长期毒性试验与急性毒性试验长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别的根本差别 2021-7-2510 二、目的与意义二、目的与意义 2021-7-2511 1预测受试物可能引起的临床不良反应预测受试物可能引起的临床不良反应 2判断受试物反复给药的毒性靶器官或组

5、织判断受试物反复给药的毒性靶器官或组织 提示临床试验中需重点监测的指标提示临床试验中需重点监测的指标 4 3 推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围 为临床试验中的解毒或解救措施提供参考为临床试验中的解毒或解救措施提供参考5 长期毒性试验的目的 2021-7-2512 了解实验动物能耐受的最大剂量，找出完了解实验动物能耐受的最大剂量，找出完 全无毒的安全界量，这个界量是判断一个待选全无毒的安全界量，这个界量是判断一个待选 新药是否有进一步开发研究的价值以及能否过新药是否有进一步开发研究的价值以及能否过 渡到临床试用的重要依据，同时，也可为其

6、它渡到临床试用的重要依据，同时，也可为其它 毒性实验和临床初始剂量的选择提供依据。因毒性实验和临床初始剂量的选择提供依据。因 此长期毒性试验是临床前安全性评价的主要内此长期毒性试验是临床前安全性评价的主要内 容，它与急性毒性试验、生殖毒性以及致癌性容，它与急性毒性试验、生殖毒性以及致癌性 等毒理学研究有着密切的联系，是新药报批临等毒理学研究有着密切的联系，是新药报批临 床时重点审评项目之一，是药物从药学研究进床时重点审评项目之一，是药物从药学研究进 入临床试验的重要环节。入临床试验的重要环节。 长期毒性试验的长期毒性试验的意义意义 2021-7-2513 第二节第二节 试试 验验 设设 计计

7、原原 则则 及及 方方 法法 2021-7-2514 一、一般原则和要求一、一般原则和要求 基本原则基本原则 全面、严谨、合理全面、严谨、合理 整体性整体性 随机随机、对照对照、重复重复 2021-7-2515 一、一般原则和要求一、一般原则和要求 基本原则基本原则 整体性整体性 长期毒性试验不能与药效学、药代长期毒性试验不能与药效学、药代 动力性和其他毒理学研究割裂，试动力性和其他毒理学研究割裂，试 验设计应充分考虑其他药理毒理研验设计应充分考虑其他药理毒理研 究的试验设计和研究结果。长期毒究的试验设计和研究结果。长期毒 性试验的结果应该力求与其他药理性试验的结果应该力求与其他药理 毒理试验

8、结果互为印证、说明和补毒理试验结果互为印证、说明和补 充。充。 2021-7-2516 一、一般原则和要求一、一般原则和要求 总体总体原则原则 2021-7-2517 一、一般原则和要求一、一般原则和要求 总体总体原则原则 2021-7-2518 一、一般原则和要求一、一般原则和要求 总体总体原则原则 2021-7-2519 一、一般原则和要求一、一般原则和要求 总体总体原则原则 口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为 每天每天12ml/100g，也可将受试药物混在饲料或水，也可将受试药物混在饲料或水 中给予，但要保证每只动物按规定剂量在一定时中给予，但要

9、保证每只动物按规定剂量在一定时 间内服入，静脉注射大鼠时可采用腹腔代替，各间内服入，静脉注射大鼠时可采用腹腔代替，各 剂量组采用等容量不等浓度给药。特殊情况另作剂量组采用等容量不等浓度给药。特殊情况另作 说明。说明。 2021-7-2520 理想动物的标准：理想动物的标准： n对受试物的生物转化与人体相近；对受试物的生物转化与人体相近； n对受试物敏感；对受试物敏感； n已有大量历史对照数据。已有大量历史对照数据。 二、实验动物二、实验动物 2021-7-2521 我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, , 一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类

10、，一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。首选狗。 1.1.种类及品系种类及品系 二、实验动物二、实验动物 2021-7-2522 我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, , 一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。首选狗。 1.1.种类及品系种类及品系 二、实验动物二、实验动物 Wistar大鼠 SD大鼠 近亲繁殖鼠？近亲繁殖鼠？ 杂交鼠？杂交鼠？ 2021-7-2523 我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, , 一种为啮齿类，首选

11、大白鼠；另一种为非啮齿类，一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。首选狗。 1.1.种类及品系种类及品系 二、实验动物二、实验动物 一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗 2021-7-2524 我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, , 一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。首选狗。 1.1.种类及品系种类及品系 二、实验动物二、实验动物 在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在 呼吸系统的解剖学和生理学方面比其它动物更接呼吸系

12、统的解剖学和生理学方面比其它动物更接 近人类。近人类。 如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。 2021-7-2527 Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强 缺点：价格昂贵 2021-7-2528 2. 2. 起始月起始月( (周周) )龄龄 一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。 二、实验动物二、实验动物 2021-7-2529 2. 2. 起始月起始月( (周周) )龄龄 一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物一般选择较年轻的或正

13、处于生长发育阶段的动物。 二、实验动物二、实验动物 长期毒性试验的给药期限较长长期毒性试验的给药期限较长；1 3 原因原因： 年龄较大的动物反应性降低年龄较大的动物反应性降低, , 存存 在许多发性疾病干扰试验结果。在许多发性疾病干扰试验结果。 处于生长发育阶段的动物对药物处于生长发育阶段的动物对药物 的毒性反应较敏感的毒性反应较敏感； 2 3 2021-7-2530 n啮啮齿类动物最好在断奶后不久即开始给药齿类动物最好在断奶后不久即开始给药 大鼠大鼠起始周龄起始周龄要求在要求在 6 8周龄周龄； 如果试验周期如果试验周期超过超过3个月以上，则个月以上，则将起始周龄降至将起始周龄降至 5 6周

14、龄周龄。 n狗的起始月龄为狗的起始月龄为 6 月龄月龄，一般不超过一般不超过 12 月月 龄龄； 如选用杂种狗如选用杂种狗，起始年龄可稍大些起始年龄可稍大些，但也不能但也不能 超过超过 5 年。年。 二、实验动物二、实验动物 2. 2. 起始月起始月( (周周) )龄龄 2021-7-2531 n起始体重应在体重均值起始体重应在体重均值 20% 的范围内的范围内。 二、实验动物二、实验动物 2. 2. 起始月起始月( (周周) )龄龄 2021-7-2532 3. 3. 性别及数量性别及数量 （1 1）性别）性别 二、实验动物二、实验动物 一般来讲是兼用两种性别的动物，每个剂量组中一般来讲是兼

15、用两种性别的动物，每个剂量组中 雌雄性别的动物数必须一致。雌雄性别的动物数必须一致。 2021-7-2533 在特殊情况下如药物对雄性（或雌性）生殖在特殊情况下如药物对雄性（或雌性）生殖 细胞的毒效应已确知，或者急性试验已证明药物细胞的毒效应已确知，或者急性试验已证明药物 对雌雄两性动物的毒性有明显差别时，就应主要对雌雄两性动物的毒性有明显差别时，就应主要 选用敏感性别的动物进行试验。选用敏感性别的动物进行试验。 二、实验动物二、实验动物 3. 3. 性别及数量性别及数量 （1 1）性别）性别 2021-7-2534 超过超过 90 天的试验天的试验 啮齿类动物每组至少啮齿类动物每组至少 40

16、 只（雌雄各只（雌雄各 20 只）；只）； 非啮齿类每组非啮齿类每组 810 只（雌雄各只（雌雄各 45 只）。只）。 90 天以内的试验天以内的试验 啮齿类动物每组至少啮齿类动物每组至少20只（雌雄各只（雌雄各 10 只）；只）； 非啮齿类每组非啮齿类每组 46 只（雌雄各只（雌雄各 23只）；只）； 二、实验动物二、实验动物 3. 3. 性别及数量性别及数量 （2 2）数量）数量 2021-7-2535 超过超过 90 天的试验天的试验 啮齿类动物每组至少啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各只（雌雄各 20 只）；只）； 非啮齿类每组非啮齿类每组 8-10 只（雌雄各只（雌雄各 45 只）

17、。只）。 90 天以内的试验天以内的试验 啮齿类动物每组至少啮齿类动物每组至少20只（雌雄各只（雌雄各 10 只）；只）； 非啮齿类每组非啮齿类每组 46 只（雌雄各只（雌雄各 23只）；只）； 二、实验动物二、实验动物 3. 3. 性别及数量性别及数量 （2 2）数量）数量 指导原则指导原则：一般大鼠为雌、雄各：一般大鼠为雌、雄各30只，只， Beagle犬或猴各犬或猴各36只。只。 2021-7-2536 4. 4. 饲养管理饲养管理 严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素 是非常重要的。是非常重要的。 二、实验动物二、实验动物 2021-7-2537

18、 酮症酸中毒酮症酸中毒 室内温度室内温度 饲料或饲料配方饲料或饲料配方 湿湿 度度 光光 照照 通风条件通风条件 饮水质量饮水质量 4. 4. 饲养管理饲养管理 二、实验动物二、实验动物 2021-7-2538 酮症酸中毒酮症酸中毒 室内温度室内温度 饲料或饲料配方饲料或饲料配方 湿湿 度度 光光 照照 通风条件通风条件 饮水质量饮水质量 4. 4. 饲养管理饲养管理 二、实验动物二、实验动物 啮齿类动物啮齿类动物 适宜温度为适宜温度为 1827 。 相对湿度为相对湿度为 40%70%。 光照宜持续光照宜持续 12 小时明亮，小时明亮，12 小时黑暗。小时黑暗。 通风条件良好。通风条件良好。

19、所用饲料应符合动物的营养标准。所用饲料应符合动物的营养标准。 雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过 5只只 2021-7-2539 酮症酸中毒酮症酸中毒 室内温度室内温度 饲料或饲料配方饲料或饲料配方 湿湿 度度 光光 照照 通风条件通风条件 饮水质量饮水质量 4. 4. 饲养管理饲养管理 二、实验动物二、实验动物 犬犬 单笼饲养，定量喂食。单笼饲养，定量喂食。 Beagle 狗实验前至少驯养狗实验前至少驯养 12 周周; 杂种狗应先检疫，驱虫。杂种狗应先检疫，驱虫。 2021-7-2540 三、给药期限三、给药期限 按我国药政管理部门的要求，长期毒性试按我国药政管

20、理部门的要求，长期毒性试 验的给药期限一般为临床疗程的验的给药期限一般为临床疗程的34倍时间。倍时间。 创新药品试验周期应不少于创新药品试验周期应不少于90天，天， 超过超过180天天 的新药可以在试验开始的新药可以在试验开始90天后，同时进行天后，同时进行I期临期临 床试验。床试验。 2021-7-2541 临床拟用临床拟用 毒性试验期限毒性试验期限 给药时间给药时间 啮齿类动物啮齿类动物 非啮齿类动物非啮齿类动物 5 5天天 2 2周周 2 2周周 2 2周周 1 1月月 1 1月月 2-42-4周周 3 3月月 3 3月月 1-31-3月月 6 6月月 6 6月月 3 3月月 6 6月月

21、 9 9月月 每天给药最好固定时间。每天给药最好固定时间。 2021-7-2542 四、剂量水平的选择四、剂量水平的选择 三个剂量组是必不可少的：三个剂量组是必不可少的： n一个是足以引起明显的毒性反应的高剂量，但死一个是足以引起明显的毒性反应的高剂量，但死 亡率应控制在亡率应控制在 20% 以内；以内； n第二个是不引起毒性作用的低剂量第二个是不引起毒性作用的低剂量(一般为动物一般为动物 有效剂量或临床治疗量的有效剂量或临床治疗量的23倍倍)； n为表明毒性作用的量为表明毒性作用的量效关系，在上述两个剂量效关系，在上述两个剂量 之间插入一个之间插入一个(或多个或多个)中间剂量。中间剂量。 中

22、剂量按中剂量按 计算计算 高剂量低剂量X 2021-7-2543 在选择合适的剂量时还应考虑到：在选择合适的剂量时还应考虑到： 药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性 药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束 时各剂量均有可能出现毒性作用；时各剂量均有可能出现毒性作用； 药物是否有可能被特殊的酶所药物是否有可能被特殊的酶所“解毒解毒”或或 “活化增毒活化增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱，而这些酶又是否易被药物本身所诱 导或抑制。导或抑制。 药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容药物在消化道中的稳定性。与胃

23、肠道内容 物有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。物有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。 可供参考的具体方法可供参考的具体方法 （1 1）半数致死量法（）半数致死量法（LDLD50 50法） 法） 根据急性毒性的根据急性毒性的LD50值决定三个剂量。一般在值决定三个剂量。一般在 大鼠大鼠3个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可 分别采用约分别采用约LD50的的1/10、1/50和和1/100剂量，狗各剂剂量，狗各剂 量组可采用大鼠相应各组的一半剂量。量组可采用大鼠相应各组的一半剂量。 可供参考的具体方法可供参考的具体方法 （1）半数致死量法（）半数致死量法（

24、LD50法）法） （2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 根据急性毒性试验所提供的相关信息，如毒根据急性毒性试验所提供的相关信息，如毒 性的量性的量效关系，毒性出现的剂量范围及敏感动效关系，毒性出现的剂量范围及敏感动 物等，先过渡到物等，先过渡到7 7天至天至2121天的短期蓄积性试验，再天的短期蓄积性试验，再 将获得的参数外推于长期毒性试验。将获得的参数外推于长期毒性试验。 急性毒性试验急性毒性试验 蓄积毒性试验蓄积毒性试验 和和/ /或或 7 7天短期重复给药试验天短期重复给药试验 9090天重复给药试验天重复给药试验180180天或更长期重复给药试验天或更长期重复给药试验 可供参考

25、的具体方法可供参考的具体方法 （1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法） （2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 （3）药代动力学法）药代动力学法 根据药代动力学最大有效安全浓度（根据药代动力学最大有效安全浓度（MCD） 大鼠大鼠3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别采个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别采 用大鼠的用大鼠的1.0 、3.36.6 和和1020 MCD; 狗一般可采用大鼠一半左右的剂量。狗一般可采用大鼠一半左右的剂量。 可供参考的具体方法可供参考的具体方法 （1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法） （2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试

26、验过渡法 （3）药代动力学法（）药代动力学法（MBS法）法） 根据大鼠急性毒性试验的最大耐受量根据大鼠急性毒性试验的最大耐受量(MTD) 大鼠长期毒性试验的三个剂量分别为大鼠长期毒性试验的三个剂量分别为1、1/3及及1/10MTD； 狗和猴可采用大鼠一半左右的剂量。狗和猴可采用大鼠一半左右的剂量。 （4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法） 可供参考的具体方法可供参考的具体方法 （1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法） （2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 （3）药代动力学法（）药代动力学法（MBS法）法） 根据临床拟用剂量（根据临床拟用剂量（3个月长期毒性试验）个

27、月长期毒性试验） 大鼠低、中、高三个剂量可分别采用大鼠低、中、高三个剂量可分别采用50100倍、倍、2550倍和倍和 1020倍临床剂量倍临床剂量 狗可分别采用狗可分别采用3050倍、倍、1525倍和倍和510倍临床剂量倍临床剂量 猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验 （4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法） （5）临床拟用剂量法（）临床拟用剂量法（ACD法）法） 可供参考的具体方法可供参考的具体方法 （1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法） （2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 （3）药代动力学法（）药代动

28、力学法（MBS法）法） 根据人和动物的等效剂量比值，再按一定倍数根据人和动物的等效剂量比值，再按一定倍数 扩大。扩大。 （4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法） （5）临床拟用剂量法（）临床拟用剂量法（ACD法）法） （6）等效剂量法）等效剂量法 2021-7-2551 不同动物的剂量折算系数不同动物的剂量折算系数 动物种属动物种属 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 猫猫 猴猴 狗狗 人人 标准标准 K(K(剂量折算系数剂量折算系数) ) 1 1 7 7 12.312.3 27.527.5 29.729.7 64 64 124124 388388 体重体重 K(kgK(kg体重剂量

29、折算系数体重剂量折算系数) ) 1 1 0.710.71 0.62 0.62 0.37 0.37 0.30 0.30 0.320.32 0.210.21 0.110.11 任何任何 R(R(动物体型系数动物体型系数) ) 0.0590.059 0.090.09 0.099 0.099 0.0930.093 0.0820.082 0.1110.111 0.104 0.104 0.10.1 体重体重 W(W(标准体重标准体重kg)kg) 0.020.02 0.20.2 0.40.4 1.51.5 2 2 4 4 1212 7070 注：有些资料记载的动物体型系数（注：有些资料记载的动物体型系数（R

30、 R）为此表中）为此表中R R 值的值的1000 1000 倍，如小鼠倍，如小鼠R R 为为5959，大鼠，大鼠R R 为为9090， 这不影响药物剂量的折算。这不影响药物剂量的折算。 2021-7-2552 对于标准体重的动物：对于标准体重的动物： 每只用量（每只用量（mg/mg/只）只）D DB B D DA A K KB B K KA A 千克体重剂量（千克体重剂量（mg/kgmg/kg）d dB B d dB B K KB B K KA A K KA A，K KB B，R RA A，R RB B 值由上表查找值由上表查找 2021-7-2553 对于任何体重的动物：对于任何体重的动物：

31、 每只用量（每只用量（mg/mg/只）只）D DB B D DA A R RB B ( ( W WB B ) )2/3 2/3 R RA AW WA A 千克体重剂量（千克体重剂量（mg/kgmg/kg）d dB B d dA A R RB B ( ( W WB B ) )2/3 2/3 R RA AW WA A 式中式中D DB B、d dB B 分别是欲计算的分别是欲计算的B B 种动物的每只剂量及公斤体种动物的每只剂量及公斤体 重剂量，重剂量，D DA A、d dA A 分别是已知分别是已知A A 种动物的每只剂量及公斤体种动物的每只剂量及公斤体 重剂量，重剂量，W WA A、W WB

32、B 是已知动物体重，是已知动物体重，R RA A、R RB B 是体型系数，可是体型系数，可 由上表查得由上表查得。 可供参考的具体方法可供参考的具体方法 （1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法） （2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 （3）药代动力学法（）药代动力学法（MBS法）法） （4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法） （5）临床拟用剂量法（）临床拟用剂量法（ACD法）法） （6）等效剂量法）等效剂量法 2021-7-2555 五、限度试验五、限度试验 我国药政部门规定我国药政部门规定，如小鼠急性毒性的口服如小鼠急性毒性的口服 给药剂量大于给药剂量大于 5

33、g/kg5g/kg，注射给药剂量大于注射给药剂量大于 2g/kg 2g/kg 仍未产生毒性反应和死亡仍未产生毒性反应和死亡，或仅个别动物有毒性或仅个别动物有毒性 反应时反应时，可考虑只做一个高于临床拟用剂量可考虑只做一个高于临床拟用剂量5050倍倍 ( (狗用狗用3030倍倍) )的剂量组。的剂量组。 2021-7-2556 经济合作与开发组织经济合作与开发组织(OECD)提出如果一种提出如果一种 化合物以化合物以1000mg/kg的剂量的剂量，按规定期限连续给按规定期限连续给 药药，不产生任何可观察到的毒性反应不产生任何可观察到的毒性反应，而且根据而且根据 结构相关药物的已有资料结构相关药物

34、的已有资料，估计不会产生毒性的估计不会产生毒性的 话话，就不需要再用三个剂量来进行试验就不需要再用三个剂量来进行试验，除非预除非预 期临床需要更高的剂量。期临床需要更高的剂量。 五、限度试验五、限度试验 2021-7-2557 六、给药方法六、给药方法 n长期毒性试验的给药途径一般应尽量与预期临床长期毒性试验的给药途径一般应尽量与预期临床 使用的途径相一致。使用的途径相一致。临床用药途径为静脉或肌注临床用药途径为静脉或肌注 时，时，3 3个月及以上的试验，由于试验周期长大鼠给个月及以上的试验，由于试验周期长大鼠给 药有困难，可用腹腔或皮下注射代替。药有困难，可用腹腔或皮下注射代替。 n如采用灌

35、胃给药的方式可将供试药物制成一种如采用灌胃给药的方式可将供试药物制成一种 溶液或混悬液，但必须注意给药容量不应超过溶液或混悬液，但必须注意给药容量不应超过 12ml/100g 体重体重/天。天。 2021-7-2558 六、给药方法六、给药方法 n长期毒性试验长期毒性试验一般均强调每天给药，每周必一般均强调每天给药，每周必 须给药须给药 7 天。给药期限长（天。给药期限长（3个月或以上）的个月或以上）的 药物每周至少应给药药物每周至少应给药6天。天。 2021-7-2559 七七、观察及测定指标、观察及测定指标 试验前，啮齿类动物至少应进行试验前，啮齿类动物至少应进行5天的适应性天的适应性 观

36、观 察，非啮齿类动物至少应驯养观察察，非啮齿类动物至少应驯养观察12周，应对周，应对 动物进行一般观察及血液生化学指标的检测。动物进行一般观察及血液生化学指标的检测。 试验期间，至少应每天或每两天作一次详细的试验期间，至少应每天或每两天作一次详细的 观察。观察。 试验结束时，必须留试验结束时，必须留1/3的动物做恢复期的观察的动物做恢复期的观察 试验，其观察期时间一般不超过试验，其观察期时间一般不超过28天。天。 2021-7-2560 （一一）日常观察日常观察 1. 一般一般观察观察内容内容 包括对实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、包括对实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、 孔道孔道 ( 及其分泌

37、物及其分泌物 ) 、呼吸、循环、自主神经系、呼吸、循环、自主神经系 统、躯体和肢体活动情况以及精神行为进行仔细统、躯体和肢体活动情况以及精神行为进行仔细 地观察地观察；对动物粪便的量、色泽和内含物对动物粪便的量、色泽和内含物，散失散失 的食物的食物，饮水瓶中残余的水以及一切可以反映动饮水瓶中残余的水以及一切可以反映动 物生活情况变化的各种迹象物生活情况变化的各种迹象，都必须加以注意。都必须加以注意。 所有出现的症状都必须记录在案。所有出现的症状都必须记录在案。 2021-7-2561 1. 一般一般观察观察内容内容 如果发现动物死亡如果发现动物死亡，必须尽可能快地进行尸必须尽可能快地进行尸 体

38、剖检体剖检，以减少组织自溶。将组织置于以减少组织自溶。将组织置于 10% 的中的中 性福尔马林或其它适宜的固定液中。如果尸体剖性福尔马林或其它适宜的固定液中。如果尸体剖 检不能立即进行检不能立即进行，则必须将动物则必须将动物冷藏冷藏起来以延缓起来以延缓 组织自溶组织自溶 。 （一一）日常观察日常观察 2021-7-2562 1. 一般一般观察观察内容内容 对濒死的动物也应立即处死作尸体剖检。对濒死的动物也应立即处死作尸体剖检。 （一一）日常观察日常观察 尸体剖检尸体剖检后行组织病理学检查、评价后行组织病理学检查、评价。 2021-7-2563 2. 生长率生长率 （一一）日常观察日常观察 20

39、21-7-2564 3. 食耗食耗 食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响 食耗的计算食耗的计算 将加入供食器具中饲料的重量减去剩余 的饲料重量再除以给食天数 （一一）日常观察日常观察 2021-7-2565 3. 食耗食耗 食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响 食耗的计算食耗的计算 将给药组和对照组的食耗加以比较将给药组和对照组的食耗加以比较，有助于说有助于说 明药物是否影响实验动物的食欲。明药物是否影响实验动物的食欲。 （一一）日常观察日常观察 2021-7-2566 3. 食耗食耗 食耗常用来评

40、价给药对食欲及食物利用率的影响食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响 食耗的计算食耗的计算 将给药组和对照组的食耗加以比较将给药组和对照组的食耗加以比较，有助于说有助于说 明药物是否影响实验动物的食欲。明药物是否影响实验动物的食欲。 （一一）日常观察日常观察 如对食欲有影响如对食欲有影响，则每日进食量必然减少则每日进食量必然减少, , 体重增体重增 长亦受影响长亦受影响, , 但此时食物利用率并不一定降低但此时食物利用率并不一定降低 如果不影响食欲如果不影响食欲, ,而体重增长却下降而体重增长却下降, ,表明药物有可表明药物有可 能影响食物的吸收或合成代谢能影响食物的吸收或合成代谢, ,此

41、时食物利用率就此时食物利用率就 必然会有变化必然会有变化 2021-7-2567 （二）测定指标（二）测定指标 1. 器官重量器官重量 涉及的主要器官有涉及的主要器官有： 心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺、脑、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺、脑、 肾上腺、甲状腺、肾上腺、甲状腺、睾丸睾丸、前列腺、子宫、前列腺、子宫等等。 目的：确定靶器官 2021-7-2568 年组织编写年组织编写 药物研究技术指导原则药物研究技术指导原则规定规定 长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官：长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官： l脑脑 l肝脏肝脏 l肾上腺肾上腺 l脾脏脾脏 l附睾附睾 l子宫子宫 l心脏心脏 l

42、肾脏肾脏 l胸腺胸腺 l睾丸睾丸 l卵巢卵巢 l肺脏肺脏 2021-7-2569 年组织编写年组织编写 药物研究技术指导原则药物研究技术指导原则规定规定 长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官：长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官： l脑脑 l肝脏肝脏 l肾上腺肾上腺 l脾脏脾脏 l附睾附睾 l子宫子宫 l心脏心脏 l肾脏肾脏 l胸腺胸腺 l睾丸睾丸 l卵巢卵巢 l肺脏肺脏 甲状腺、甲状腺、 前列腺前列腺 长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官：长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官： l脑（大脑、小脑、脑干）脑（大脑、小脑、脑干） l垂体垂体 l甲状腺甲状腺 l食管食管 l

43、胃胃 l肝脏肝脏 l肾脏肾脏 l脾脏脾脏 l气管气管 l主动脉主动脉 l附睾附睾 l卵巢卵巢 l前列腺前列腺 l坐骨神经坐骨神经 l眼（眼科检查发现异常时）眼（眼科检查发现异常时） l给药局部给药局部 l淋巴结淋巴结 l脊髓脊髓 l胸腺胸腺 l甲状旁腺甲状旁腺 l唾液腺唾液腺 l小肠和大肠小肠和大肠 l胆囊胆囊 l肾上腺肾上腺 l胰腺胰腺 l肺肺 l心脏心脏 l睾丸睾丸 l子宫子宫 l乳腺乳腺 l膀胱膀胱 l视神经视神经 l骨髓骨髓 注：为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官注：为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官 2021-7-2571 1. 1. 器官重量器官重量 器官重

44、量降低器官重量降低，表示该器官萎缩或发育不良表示该器官萎缩或发育不良； 器官重量增加提示可能有充血器官重量增加提示可能有充血、水肿、增生、肥大、酶诱水肿、增生、肥大、酶诱 导变化或新生物等。导变化或新生物等。 将动物处死后取出上述器官将动物处死后取出上述器官，除去附着的组除去附着的组 织、除尽余血后立即称重织、除尽余血后立即称重（）。 （二）测定指标（二）测定指标 2021-7-2572 2. 2. 血液学血液学 （二）测定指标（二）测定指标 u常规的血液学参数常规的血液学参数 u骨髓涂片骨髓涂片 1. 1. 器官重量器官重量 2021-7-2573 年组织编写年组织编写 药物研究技术指导原则

45、药物研究技术指导原则规定规定 血液学指标血液学指标 l红细胞计数红细胞计数 l红细胞容积红细胞容积 l平均红细胞血红蛋白平均红细胞血红蛋白 l网织红细胞计数网织红细胞计数 l血小板计数血小板计数 l血红蛋白血红蛋白 l平均红细胞容积平均红细胞容积 l平均红细胞血红蛋白浓度平均红细胞血红蛋白浓度 l白细胞计数及分类白细胞计数及分类 l凝血酶原时间凝血酶原时间 红细胞压积红细胞压积 2021-7-2574 血液学指标血液学指标观察时间观察时间 非非啮啮齿类动物齿类动物一般于整个试验周期中每隔一般于整个试验周期中每隔 1.5 2 个月采血测定一次各项指标。个月采血测定一次各项指标。 啮啮齿类动物齿类动物 试验周期为试验周期为 6 个月时个月时，可于试验中期、试验末可于试验中期、试验末 期以及恢复期分别剖杀部分动物期以及恢复期分别剖杀部分动物 ( 约约 1/4 、 2/4 、 1/4)，进行各项检查进行各项检查； 试验周期为试验周期为 3 个月时个月时，可于试验未期以及恢复可于试验未期以及恢复 期分别剖杀部分动物期分别剖杀部分动物 ( 约约 2/3、1/3)，取血，取血检查。检查。 （二）测定指标（二）测定指标 2