色谱分析技术在兽药残留及违禁添加物检测中的应用具体实例

1、色谱分析技术在兽药残留及违禁 添加物检测中的应用具体实例 赵立军 四川省畜产品安全检测中心 2013年12月 国内检测方法的分类： 国家标准方法、地方标准方法、 行业标准方法、企业标准方法 . 检测方法标准的基本内容： 1.范围 2.规范性引用文件 3.原理 4.试剂和材料 5.仪器设备 6.试样的制备 7.测定步骤 8.结果计算 9.精密度 10.附录 1、样品提取 2、样品净化 3、上机测定 4、结果计算 畜产品检测分析的一般步骤： 1. 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法高效液相高效液相 色谱法色谱法 2. 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强可食动物肌

2、肉中土霉素、四环素、金霉素、强 力霉素残留量的测定力霉素残留量的测定 液相色谱紫外检测法液相色谱紫外检测法 3.蛋中苏丹红染料的检测方法蛋中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法高效液相色谱法 4. 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定-高效高效 液相色谱法液相色谱法 1. 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法高效高效 液相色谱法（原文参见液相色谱法（原文参见GB/T 22388-2008） 2008-10-07发布发布 2008-10-07实施实施 1.1 方法原理 试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后， 用高

3、效液相色谱测定，外标法定量。 1.2 样品处理 1.2.1提取 （1）液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等 称取2g（精确至0.01g）试样于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯 乙酸溶液和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min后，以不低于4000 r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸 溶液定容至25mL，移取5mL滤液，加入5mL水混匀后做待净化液。 注：若样品中脂肪含量较高，可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液- 液分配除脂后再用SPE柱净化。 1.2.2 净化 阳离子固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化 的聚苯乙烯-二

4、乙烯基苯高聚物，60mg/3mL ，或性能相当者。使用前依次用 3mL甲醇、5mL水活化。 将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，抽至 近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。 洗脱液于50下用氮气吹干，残留物用1mL流动相定容，涡旋混合1 min，过 微孔滤膜后，供HPLC测定。 a）色谱柱：C8柱，250 mm4.6 mm（i.d.），5m，或相当者； C18柱，250 mm4.6 mm（i.d.），5m，或相当者。 b) 流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（85+15，体积比），混匀。 C18柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（90

5、+10，体积比），混匀。 c) 流速：1.0 mL/min。 d) 柱温：40。 e) 波长：240 nm。 f) 进样量：20 L。 1.3 高效液相色谱测定 HPLC 参考条件 1.4 标准曲线的绘制 用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、40、 80g/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标 准曲线回归方程。 1.5 定量测定 待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则 应稀释后再进样分析。 1.6 结果计算 试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得： X f mA VcA s 1000 10

6、00 式中： X试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A样液中三聚氰胺的峰面积； c标准溶液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）； V样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； As标准溶液中三聚氰胺的峰面积； m试样的质量，单位为克（g）； f稀释倍数。 1.7 空白实验 除不称取样品外，均按上述测定条件和步聚进行。 1.8 回收率及方法定量限 在添加浓度2mg/kg10 mg/kg浓度范围内，回收率在80%110%之间， 相对标准偏差小于10%。本方法的定量限为2mg/kg。 1.9 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值 的10%。 2. 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强 力霉素残留量的测定力霉素残留量的测定 液相色谱紫外检测法液相色谱紫外检测法 （原文参见（原文参见GB/T20764-2006） 1.1 方法原理 用0.1 molL Na2EDTA-Mcllvaine (pH40.05) 缓冲溶液提取可食动 物肌肉（牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉）中四环素族抗生素残留，上清液 用Oasis HLB或相当的固相萃取柱和羟酸型阳离子交换柱净化，液相色谱- 紫外检测器测定，外标法