章蛋白质的分离纯化和表征教学用PPT学习教案

1、会计学1 章蛋白质的分离纯化和表征教学用章蛋白质的分离纯化和表征教学用 一、蛋白质的酸碱性质 第1页/共34页 对某种蛋白质来说，在某一对某种蛋白质来说，在某一pH，它所带的正电荷与负电荷恰，它所带的正电荷与负电荷恰 好相等，也即净电荷为零，这一好相等，也即净电荷为零，这一pH，蛋白质的，蛋白质的等电点。等电点。 蛋白质的等电点 有中性盐时，蛋白质等电点在一定程度上决定于介质中有中性盐时，蛋白质等电点在一定程度上决定于介质中 离子的组成。如离子的组成。如Ca2+、Mg2+、Cl-、等可与蛋白质某些可、等可与蛋白质某些可 解离基团结合，影响等电点。解离基团结合，影响等电点。 无盐类干扰时，蛋白质

2、分子本身的质子供体基团解离出无盐类干扰时，蛋白质分子本身的质子供体基团解离出 来的质子数与它的质子受体基团结合的质子数相等时的来的质子数与它的质子受体基团结合的质子数相等时的 溶液溶液pH称为等离子点称为等离子点(isoionic point,或称等离点或称等离点)。等离子。等离子 点是每种蛋白质的一个特征常数。点是每种蛋白质的一个特征常数。 第2页/共34页 一、蛋白质的酸碱性质一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 三、蛋白质分离纯化的一般原则三、蛋白质分离纯化的一般原则 四、蛋白质的分离纯化方法四、蛋白质的分离纯化方法 五、蛋白质相对分

3、子质量的测定五、蛋白质相对分子质量的测定 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 教学内容教学内容 第3页/共34页 二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 ( (一一) ) 蛋白质胶体性质蛋白质胶体性质 ( (二二) ) 蛋白质沉淀蛋白质沉淀 第4页/共34页 分散相质点在分散相质点在1 1l00 nml00 nm范围内范围内, , 在动力学上是稳定的在动力学上是稳定的, , 介质介质 分子对这种质点碰撞的合力不等于零分子对这种质点碰撞的合力不等于零, , 使它能在介质中作不断使它能在介质中作不断 的布朗运动的布朗运动; ; 分散相质点带有同种符号的净电荷分散相质点带有同种

4、符号的净电荷, ,互相排斥互相排斥, ,不易聚集成大颗不易聚集成大颗 粒而沉淀粒而沉淀; ; 分散相质点能与溶剂形成溶剂化层分散相质点能与溶剂形成溶剂化层, ,例如与水形成例如与水形成水化层水化层, ,质点质点 有了水化层有了水化层, ,相互间不易靠拢而聚集相互间不易靠拢而聚集. . (一)蛋白质胶体性质 分散相质点在胶体系统中保持稳定的分散相质点在胶体系统中保持稳定的3 3个条件个条件: : 蛋白质溶液蛋白质溶液, ,稳定的稳定的亲水胶体亲水胶体: : 亲水基团与水发生亲水基团与水发生水化作用水化作用 ；某一某一pHpH下相同电荷。也有丁大尔现象、布朗运动以及不下相同电荷。也有丁大尔现象、布

5、朗运动以及不 能透过半透膜性质能透过半透膜性质 第5页/共34页 蛋白质溶液的稳定性与质点大小、电荷和水化作用有关蛋白质溶液的稳定性与质点大小、电荷和水化作用有关, 影影 响这些条件的因素都会影响蛋白质溶液的稳定性：加人响这些条件的因素都会影响蛋白质溶液的稳定性：加人脱脱 水剂水剂以除去它的水化层；改变溶液的以除去它的水化层；改变溶液的pH达到蛋白质等电点达到蛋白质等电点 使质点的净电荷为零，蛋白质分子则聚集成大的颗粒而沉使质点的净电荷为零，蛋白质分子则聚集成大的颗粒而沉 淀。淀。 (二)蛋白质沉淀 第6页/共34页 沉淀蛋白质的方法有以下几种沉淀蛋白质的方法有以下几种: : 盐析法：中性盐盐

6、析法：中性盐( (硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等) )，脱去水化，脱去水化 层而聚集沉淀，蛋白质不变性。层而聚集沉淀，蛋白质不变性。 有机溶剂沉淀法：脱去水化层、降低介电常数增加异性电有机溶剂沉淀法：脱去水化层、降低介电常数增加异性电 荷间的相互作用，蛋白质变性。低温操作，且尽量缩短处荷间的相互作用，蛋白质变性。低温操作，且尽量缩短处 理时间则可使变性速度减慢。理时间则可使变性速度减慢。 重金属盐沉淀法：带负电荷时易与重金属离子结合成不溶重金属盐沉淀法：带负电荷时易与重金属离子结合成不溶 性盐而沉淀。可口服大量牛奶或豆浆等可解重金属盐中毒性盐而沉淀。可口服大量牛奶或豆浆等可解

7、重金属盐中毒 。 生物碱试剂和某些酸沉淀法：生物碱试剂和某些酸沉淀法：蛋白质带正电合适与之结合蛋白质带正电合适与之结合 沉淀。沉淀。 加热变性沉淀法：加热变性而凝固。少量盐类促进蛋白质加热变性沉淀法：加热变性而凝固。少量盐类促进蛋白质 加热凝固加热凝固 第7页/共34页 一、蛋白质的酸碱性质一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 三、蛋白质分离纯化的一般原则三、蛋白质分离纯化的一般原则 四、蛋白质的分离纯化方法四、蛋白质的分离纯化方法 五、蛋白质相对分子质量的测定五、蛋白质相对分子质量的测定 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定六、蛋白质的含量测定

8、与纯度鉴定 教学内容教学内容 第8页/共34页 三、蛋白质分离纯化的一般原则 (1)(1)前处理前处理: : (2)(2)粗分级分离粗分级分离: : (3)(3)细分级分离细分级分离: : 蛋白质纯化测总目标：增加蛋白质纯化测总目标：增加纯度或比活力纯度或比活力 第9页/共34页 动物材料剔除结缔组织、脂肪组织动物材料剔除结缔组织、脂肪组织; ; 种子材料应先去壳种子材料应先去壳 和种皮以免受单宁等物质的污染和种皮以免受单宁等物质的污染, , 油料种子脱脂油料种子脱脂. . 选择适当方法选择适当方法, ,破碎组织或细胞：动物组织破碎组织或细胞：动物组织( (电动捣碎机电动捣碎机 或匀浆器或超声

9、或匀浆器或超声);); 植物组织植物组织( (英砂或玻璃粉和适当的缓冲液研磨或用英砂或玻璃粉和适当的缓冲液研磨或用纤维纤维 素酶素酶); ); 细菌细胞细菌细胞( (超声超声, ,与砂研磨或与砂研磨或溶菌酶溶菌酶).). 选择适当的缓冲液把所要的蛋白质提取出来选择适当的缓冲液把所要的蛋白质提取出来. . 如果蛋白质是与细胞膜或膜质细胞器结合的如果蛋白质是与细胞膜或膜质细胞器结合的, , 用超声波用超声波 或去污剂使膜结构解聚或去污剂使膜结构解聚, , 用适当的介质提取。用适当的介质提取。 (1)(1)前处理前处理: : 第10页/共34页 (2)(2)粗分级分离粗分级分离: : 常用盐析、等电

10、点沉淀和有机溶剂分级分离等方法，有时常用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法，有时 可用超过滤或凝胶过滤等方法。可用超过滤或凝胶过滤等方法。 (3)(3)细分级分离细分级分离: : 各种层析、电泳巧妙配合各种层析、电泳巧妙配合, , 后期可后期可 用结晶法。用结晶法。 第11页/共34页 一、蛋白质的酸碱性质一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 三、蛋白质分离纯化的一般原则三、蛋白质分离纯化的一般原则 四、蛋白质的分离纯化方法四、蛋白质的分离纯化方法 五、蛋白质相对分子质量的测定五、蛋白质相对分子质量的测定 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴

11、定六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 教学内容教学内容 第12页/共34页 四、蛋白质的分离纯化方法 根据分子大小不同根据分子大小不同 利用溶解度差别利用溶解度差别 根据电荷不同根据电荷不同 利用选择性吸附利用选择性吸附 利用对配体的特异生物利用对配体的特异生物 学亲和力的纯化方法学亲和力的纯化方法 ( (一一) ) 透析和超过滤透析和超过滤 ( (二二) ) 凝胶过滤凝胶过滤 ( (三三) ) 盐溶和盐析盐溶和盐析 ( (四四) ) 有机溶剂分级分离法有机溶剂分级分离法 ( (五五) ) 凝胶电泳和等电聚焦凝胶电泳和等电聚焦 ( (六六) ) 离子交换层析离子交换层析 ( (七七) ) 亲和层析

12、亲和层析 ( (八八) ) 高效液相层析高效液相层析 第13页/共34页 常用凝胶：交联葡聚糖、常用凝胶：交联葡聚糖、聚丙烯聚丙烯 酰胺凝胶，琼脂糖（酰胺凝胶，琼脂糖（sepharose 或或 Bio-Gel A）；）； 凝胶网孔大小一定，只允许相应凝胶网孔大小一定，只允许相应 大小的分子进入凝胶颗粒内部，大小的分子进入凝胶颗粒内部， 大分子则被排阻在外，即分大分子则被排阻在外，即分级分级分 离范围或排阻极限离范围或排阻极限; 大分子从颗粒间隙流下来，洗脱大分子从颗粒间隙流下来，洗脱 液体积小。小分子在颗粒网状结液体积小。小分子在颗粒网状结 构洗脱历程长，后洗脱下来，洗构洗脱历程长，后洗脱下来

13、，洗 脱体积大；脱体积大； 用洗脱体积同标准分子量的蛋白用洗脱体积同标准分子量的蛋白 质的比例关系测定蛋白质分子量质的比例关系测定蛋白质分子量 ； (二)凝胶过滤 凝胶过滤层析、大小排阻层析或凝胶渗透层析凝胶过滤层析、大小排阻层析或凝胶渗透层析 第14页/共34页 Vt: 柱床总体积，常称柱床总体积，常称柱床体积；柱床体积； V0 ：为孔隙体积或：为孔隙体积或外水体积外水体积，测出不，测出不 被凝胶滞留的蓝色葡聚糖被凝胶滞留的蓝色葡聚糖-2000的洗脱的洗脱 体积即为体积即为V0; Vi ：内水体积内水体积，凝胶珠内部的水相体，凝胶珠内部的水相体 积；积； Vm ：为凝胶基质体积；：为凝胶基质

14、体积； Vt=V0+Vi+Vm Ve某一待分离物质组分的洗脱体积某一待分离物质组分的洗脱体积,自自 加样品开始到该组分的洗脱峰加样品开始到该组分的洗脱峰(峰顶峰顶) 出现时所流出的体积；出现时所流出的体积； 各组分的流出顺序，可用分配系数各组分的流出顺序，可用分配系数Kd 来量度：来量度： Kd=(VeVo)/Vi。 几个要说明的问题 V0 VtV0 Vt Kd：组分分子大小的函数；：组分分子大小的函数； 完全排阻的大分子：完全排阻的大分子：Ve=V0， Kd=0; 完全进入凝胶珠的小分子：完全进入凝胶珠的小分子： Ve=V0+Vi，Kd=1; 其他的：其他的：Kd在在0和和1之间之间; Kd

15、大于大于1：凝胶对组分有吸附：凝胶对组分有吸附 第15页/共34页 几个要说明的问题 V0 VtV0 Vt Kd：组分分子大小的函数；：组分分子大小的函数； 完全排阻的大分子：完全排阻的大分子：Ve=V0， Kd=0; 完全进入凝胶珠的小分子：完全进入凝胶珠的小分子： Ve=V0+Vi，Kd=1; 其他的：其他的：Kd在在0和和1之间之间; Kd大于大于1：凝胶对组分有吸附：凝胶对组分有吸附 测得几种标准蛋白质的洗脱测得几种标准蛋白质的洗脱 体积体积 Ve 以相对分子质量对以相对分子质量对 数数 (logM) 对对 Ve 作图，得标作图，得标 准曲线，再测出未知样品洗准曲线，再测出未知样品洗

16、脱体积脱体积Ve，从标准曲线上，从标准曲线上 可查出样品蛋白质的相对分可查出样品蛋白质的相对分 子质量子质量. 第16页/共34页 (三)盐溶和盐析 盐溶：一般在低盐浓度的情况下，蛋白质的溶解度随盐盐溶：一般在低盐浓度的情况下，蛋白质的溶解度随盐 浓度的升高而增加，这种现象称为浓度的升高而增加，这种现象称为盐溶盐溶； 盐析盐析: :当盐浓度升高到一定程度后，蛋白质的溶解度又当盐浓度升高到一定程度后，蛋白质的溶解度又 随着盐浓度的升高而降低，结果使蛋白质沉淀析出，这随着盐浓度的升高而降低，结果使蛋白质沉淀析出，这 种现象称为种现象称为盐析盐析; ; 同一浓度盐溶液中，不同蛋白质的溶解度不同，借此

17、可同一浓度盐溶液中，不同蛋白质的溶解度不同，借此可 达到彼此分离的目的。达到彼此分离的目的。 盐溶原理盐溶原理: :蛋白质吸附某种盐离子后彼此排斥。蛋白质吸附某种盐离子后彼此排斥。 盐析原理：盐浓度增高到一定数值后，水活性降低，水盐析原理：盐浓度增高到一定数值后，水活性降低，水 化膜相继被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚积并从化膜相继被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚积并从 溶液中析出溶液中析出 第17页/共34页 (四)有机溶剂分级分离法 降低水溶液的介电常数，破坏大分子周围水膜，使溶质降低水溶液的介电常数，破坏大分子周围水膜，使溶质 溶解度降低溶解度降低; 利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶

18、剂中的溶解度不同利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度不同 而使蛋白质分离的方法，有机溶剂沉淀法。经常使用的而使蛋白质分离的方法，有机溶剂沉淀法。经常使用的 有机溶剂是乙醇和丙酮；有机溶剂是乙醇和丙酮； 易使蛋白质和酶变性，操作必须在低温条件下进行易使蛋白质和酶变性，操作必须在低温条件下进行. 第18页/共34页 电泳：在外电场的作用下电泳：在外电场的作用下,带电颗粒带电颗粒,例如带电的蛋白质分子例如带电的蛋白质分子,将将 向着与其电荷符号相反的电极移动向着与其电荷符号相反的电极移动,这种现象称为这种现象称为电泳电泳 (electrophoresis)或离子泳或离子泳(ionophore

19、sis)。 (五)凝胶电泳和等电聚焦 Sample Well Direction of migration 第19页/共34页 带电颗粒在电场中泳动时带电颗粒在电场中泳动时,受到两种方向相反的作用力受到两种方向相反的作用力: q： 颗粒所带电量；颗粒所带电量；E：电场强度：电场强度U/d ；U：两电极间的电势差：两电极间的电势差 (V)；d ：两电极间距离：两电极间距离(cm)；f 摩擦系数；摩擦系数； v ：泳动速度：泳动速度(cm /s)； 当颗粒以恒稳速度移动时当颗粒以恒稳速度移动时, 则则FFf = 0 在一定介质中对某一蛋白质来说，在一定介质中对某一蛋白质来说， q/f 是一定值，因

20、而是一定值，因而 v/E 也是也是 定值，它被称为定值，它被称为电泳迁移率或泳动度电泳迁移率或泳动度: = v/E d U qqEF)(电场力 fvFf)(摩擦力 f q E v 电泳原理：电泳原理： 第20页/共34页 A stable pH gradient is established in the gel after application of an electric field. Protein solution is added and electric field is reapplied. After staining, proteins are shown to be di

21、stributed along pH gradient according to their pI values. 等电聚焦等电聚焦 (IEF) pH梯度制作：利用两性电解质梯度制作：利用两性电解质(商品名商品名: Ampholine)，多氨基多多氨基多 羧酸系列两性化合物羧酸系列两性化合物同系物同系物的复杂混合物的复杂混合物，它们有相近但不同的，它们有相近但不同的 pH和和pI值，在电场作用下，自然形成值，在电场作用下，自然形成pH梯度梯度. 第21页/共34页 First dimension Isoelectric focusing Isoelectric focusing gel is

22、placed on SDS polyacrylamide gel. Second dimension SDS polyacrylamide gel electrophoresis 双向电泳双向电泳(Two-dimensional electrophoresis) 第22页/共34页 利用蛋白质分子对其配体利用蛋白质分子对其配体(或称或称 为配基为配基)分子特有的识别能力建分子特有的识别能力建 立起来的纯化方法立起来的纯化方法. 将特异配体共价地连接到像琼将特异配体共价地连接到像琼 脂糖凝胶这类载体表面的官能脂糖凝胶这类载体表面的官能 团团(如如-OH)上，配体和多糖载体上，配体和多糖载体 之间

23、插人一段长度适当的连接之间插人一段长度适当的连接 臂臂 (如如-氨基己酸氨基己酸)，使配体与，使配体与 凝胶之间保持足够的距离，不凝胶之间保持足够的距离，不 致因载体表面的位阻妨碍待分致因载体表面的位阻妨碍待分 离的分子与配体结合离的分子与配体结合. 这类载体在其他性能方面允许这类载体在其他性能方面允许 蛋白质能自由通过蛋白质能自由通过. (七)亲和层析(affinity chromatography) 洗涤除去 琼脂糖凝胶珠 配体分子 杂蛋白分子(不被吸附) 连接臂 被吸附的蛋白质分子 亲和洗脱 亲和层析的原理 第23页/共34页 是离子交换层析、凝胶过滤是离子交换层析、凝胶过滤 、吸附层析

24、和分配层析等技、吸附层析和分配层析等技 术的新发展术的新发展. . 对柱层析来说对柱层析来说, ,固相载体的颗固相载体的颗 粒愈小、分辨率愈高粒愈小、分辨率愈高, , 但是但是 洗脱液的流速也愈慢。采取洗脱液的流速也愈慢。采取 高压和机械性能强、化学性高压和机械性能强、化学性 能稳定、颗粒度细小而均匀能稳定、颗粒度细小而均匀 的载体和其他设备自动完成的载体和其他设备自动完成 分离纯化分离纯化. . HPLCHPLC可用于蛋白质、氨基酸可用于蛋白质、氨基酸 及其他生物分子的分析和制及其他生物分子的分析和制 备。备。 (八) 高效液相层析 (high performance liquid chro

25、matography, HPLC) 溶剂过滤器 溶剂储存器 泵 检测仪 记录仪 收集器 恒温装置 层析柱 进样室 第24页/共34页 一、蛋白质的酸碱性质一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 三、蛋白质分离纯化的一般原则三、蛋白质分离纯化的一般原则 四、蛋白质的分离纯化方法四、蛋白质的分离纯化方法 五、蛋白质相对分子质量的测定五、蛋白质相对分子质量的测定 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 教学内容教学内容 第25页/共34页 五、蛋白质相对分子质量的测定 (一一) 凝胶过滤法测定相对分子质量凝胶过滤法测定相对分子

26、质量 (二二) SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量 (三三) 沉降速度法测定相对分子质量沉降速度法测定相对分子质量 第26页/共34页 蛋白质过凝胶柱速度直接取决于它蛋白质过凝胶柱速度直接取决于它 的斯托克半径。如某种蛋白质与一的斯托克半径。如某种蛋白质与一 理想的非水化球体具相同过柱速度理想的非水化球体具相同过柱速度 即相同的洗脱体积，则这种蛋白质即相同的洗脱体积，则这种蛋白质 具与此球体相同的半径，称具与此球体相同的半径，称斯托克斯托克 半径。半径。 标准蛋白质标准蛋白质(已知已知Mr和斯托克半径和斯托克半径) 和待测蛋白质须有相同分子形状和待

27、测蛋白质须有相同分子形状(接接 近球体近球体),否则不能得到比较准确的否则不能得到比较准确的 Mr. 一般用交联葡聚糖一般用交联葡聚糖（Sephadex）, Sephadex G-75(分级分离的分级分离的Mr范围范围3 00080 000)或或G-100(M,范围范围4000 150 000). (一)凝胶过滤法测定相对分子质量 1966, Andrews提出个经验公式提出个经验公式: er bVaMlg 第27页/共34页 （二）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量 SDS破坏蛋白氢键和疏水相互作用破坏蛋白氢键和疏水相互作用, 巯基乙醇能打开二硫巯基乙醇能打开二硫 键键, SDS和巯

28、基乙醇存在下和巯基乙醇存在下,单体蛋白或亚基单体蛋白或亚基(寡聚蛋白质寡聚蛋白质 解离成亚基解离成亚基) 处展开状态处展开状态. SDS 烃链与蛋白质侧链通过疏水相互作用形成复合体烃链与蛋白质侧链通过疏水相互作用形成复合体. 在一定条件下在一定条件下, SDS与大多数蛋白质的结合比与大多数蛋白质的结合比: 1.4g SDS / 1 g蛋白质蛋白质,相当于每两分子氨基酸残基结合一分子相当于每两分子氨基酸残基结合一分子SDS. SDS 与蛋白质结合后与蛋白质结合后: 第一第一, SDS 阴离子使多肽链覆盖上阴离子使多肽链覆盖上 相同密度的负电荷相同密度的负电荷, 远超过蛋白质原有电荷量远超过蛋白质

29、原有电荷量, 掩盖了不掩盖了不 同蛋白质间原有的电荷差别同蛋白质间原有的电荷差别; 第二第二, 改变蛋白质的天然构改变蛋白质的天然构 象象, 使大多数蛋白质采取类似的形状使大多数蛋白质采取类似的形状. 因此在因此在 SDS 存在下存在下 的电泳几乎是完全基于相对分子质量分离蛋白质的的电泳几乎是完全基于相对分子质量分离蛋白质的. 第28页/共34页 （二）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量 SDS-PAGE，迁移率不受，迁移率不受 蛋白质原有的电荷、分子蛋白质原有的电荷、分子 形状等因素影响形状等因素影响, 但凝胶具但凝胶具 分子筛效应分子筛效应. 因此，迁移率因此，迁移率 与相对分子质

30、量与相对分子质量(Mr)之关之关 系系: rr baMlg 常数常数相对迁移率：样品迁移距离相对迁移率：样品迁移距离/ /前沿前沿( (染料染料) ) 第29页/共34页 （三）沉降速度法测定相对分子质量 直接测定蛋白质直接测定蛋白质Mr的方法：渗透压法、光散射法、沉降速度法的方法：渗透压法、光散射法、沉降速度法 、沉降平衡法和黏度法等，沉降速度法是经典的常用方法、沉降平衡法和黏度法等，沉降速度法是经典的常用方法. 超速离心机最大转速超速离心机最大转速: 6000080 000r/min, 相当于位于距转相当于位于距转 轴中心轴中心10 cm处、单位质量处、单位质量(1g)分子所受到的离心力分

31、子所受到的离心力(离心场离心场 强度强度)为为400 000 g700 000 g. 沉降速度与蛋白质分子大小、密度和形状有关沉降速度与蛋白质分子大小、密度和形状有关,且与溶剂密且与溶剂密 度和黏度有关度和黏度有关. 单位离心场强度的沉降速度称为单位离心场强度的沉降速度称为沉降系数沉降系数, 用用s(小写小写)表示表示: x dtdx s 2 / 从轴心到沉降界面的径向距离从轴心到沉降界面的径向距离(cm) 时间时间 离心角速度离心角速度(rad/s): 转速转速(r/min) 2/ 60 第30页/共34页 （三）沉降速度法测定相对分子质量 蛋白质、核酸、核糖体和病毒等的沉降系数：蛋白质、核酸、核糖体和病毒等的沉降系数：1 10-13200 10- 13秒范围 秒范围. 把把l0-13s 作为一个单位作为一个单位, 斯维得贝格单位斯维得贝格单位(Svedberg unit)或