细胞工程实验期末考试题及答案.doc

1、外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体等接种：把经过严格的表面灭菌处理的植物材料经无菌操作手续接种到无菌培养基上的全部操作过程。原生质体：是指除去细胞壁后被原生质所包围的“裸露细胞”。脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。10、玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。3、平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄

2、层在培养基底上的培养方法。4、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。1. a.简述无菌操作的技术要点。答：接种室消毒（接种前紫外灯照射20min,以上，平时或使用前酒精等喷雾灭菌。）用品消毒（所用刀，剪，镊子随时用75%酒精浸泡灭菌，接种材料前在酒精灯灼烧灭菌）人员消毒（进入实验前用肥皂洗手，穿上灭菌的实验服，操作前操作中常用酒精棉擦手，燥作时不要讲话。）材料消毒（外植体）2. a.简述高压灭菌锅的使用方法。答：首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅加入与三脚架齐平的水。 放回灭菌桶，并装入灭菌物品。加盖，并将盖上的排气软管插入内层桶的排气槽内，在以两两对称的方式同时旋紧相对

3、的两个螺栓，螺栓松紧一致，勿漏气。打开电源加热，待压力上升到0.5mp时打开气阀，排净锅内冷空气后，待压力降到0mpa时关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力而逐渐上升，当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。灭菌所需时间到后，切断电源，让锅内温度自然下降，当压力下降到零时，打开排气阀，旋松螺木栓，打开锅盖，取出物品。3. a.简述大蒜脱毒的方法及原理。答：原理： 热处理：在一定范围内，用高于常温处理可部分或完全钝化植物组织中的某些病毒，而不伤害植物本身 茎尖培养：由于病毒在植物内分布不均匀，存在于茎尖，茎尖部分病毒含量极低或无病毒，以茎尖组织作为外植体，能获得脱毒植株，供繁殖，

4、生产使用。方法：茎尖培养结合热处理 将适宜的母株或由块茎萌发的带芽块茎于适当的高温3038处理数周后，切取顶芽或侧芽作为茎尖剥离材料于无菌条件下剥离茎尖接种与适宜的培养基上，诱导茎尖分化成苗，扩繁育种。4. a.简述植物快繁的技术路线. 消毒 切割茎断答：芽段芽萌发芽生根炼苗移栽 5. a.简述大蒜脱毒的工艺流程答：选择品种和母株获取茎段茎段消毒剥离茎尖接种分化成苗保存无菌试管苗扩繁6. b.组培中外植体污染原因及预防措施。答：污染途径：1、外植体带菌 2、培养基及接种器具灭菌不彻底 3、接种操作不规范 4.环境不清洁预防措施：1，防止外植体带菌：选择好外植体采摘时期和采摘部位。 ：室外或无菌

5、条件下进行预培养。 ：外植体严格灭菌。 2，保证培养基及接种器具彻底灭菌。 3，操作人员严格遵守无菌操作规程。 4，保证接种与培养环境清洁。三、1、简述培养基的配制、分装、包扎和灭菌。答：（1）确定培养基的配方。（2）贮备液（或母液）的配制与保存 配一些浓溶液，用时稀释，这种浓溶液叫贮备液或母液。按药品种类和性质分别配制，单项、单独保存或几种混合保存。一般应按配方顺序依次称量，分别溶解在少量蒸馏水中，最后再依次加到一起，并定容到规定体积。贮备液配好后贴上标签，保存在冰箱中。（3）配制培养基先在洁净的不锈钢锅理放入约750ml蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖，最好能在水浴锅理将琼脂溶化，如直接加热应

6、不停地搅拌，防止在锅底烧焦或沸腾溢出。按需要加入相应量的母液。按需要加入相应量的植物激素和其它物质。加蒸馏水定容， 充分混合好后，用1nkoh（或naoh）调整ph值到所需值。（4）分装：按容器的大小和培养要求，趁热将适量培养基分注到三角瓶或试管中，并即刻用封口膜封住瓶口。（5）灭菌：压力108kpa，温度121度，时间1530分钟。2、什么叫接种？简述无菌操作注意事项。答：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的全部操作过程叫接种。无菌操作注意事项好下：（1）进无菌室之前，操作人员需着经灭菌的白色工作服，戴口罩。操作人员双手必顺进行灭菌。（2）操作期间经常用

7、70%的酒精擦拭双手和台面。（3）在打开培养瓶、三角瓶或试管时，最大的污染危险是管口边沿的微生物落入管内。（4）工具用后及时灭菌，避免交叉污染。（5）工作人员的呼吸也是污染的主要途径。（6）由于空气中有灰尘，因此在操作时，仍要注意避免灰尘的落入。3、植物组织培养室的核心是无菌室（又叫接种室），怎样进行无菌室的灭菌 ？ 答：（1）常规灭菌法 用70%酒精（或0.1%新洁尔灭）朝天花板、四周墙壁方向喷洒； 待整个室喷洒完毕后依次用70%酒精将台子揩一遍； 用湿拖把（70%酒精打湿），把地板拖一次； 然后将无菌室的门关闭，开紫外灯，照射530分钟； 0.52小时后进入室内操作，待工作完毕后，将室门打

8、开换气。以后每用一次灭菌一次。（2）无菌室发现霉斑（墙上）时的灭菌 用70%酒精擦一遍（里里外外）； 用新配70%酒精重复再擦一遍； 甲醛蒸：方法是每立方米空间用2ml甲醛（福尔马林）加0.2克高锰酸钾的比例，蒸房间24小时（门窗密闭），然后开启房门，放走甲醛气体。 常规灭菌法再灭菌一次。待用。4、什么叫污染？污染的原因有哪些？简述预防污染的措施？答：污染是指在组培过程中，由于真菌、细菌等微生物的浸染，在培养器内滋生大量的菌斑，使培养材料不能正常生长和发育的现象。污染原因有以下几种： 培养基及各种使用器具消毒不彻底； 外植体灭菌时不彻底，菌残存在细胞组织中； 操作时人为因素带入； 环境不清洁；

9、超净工作区域污染。预防污染的措施：做好器具灭菌、外植体灭菌，做好无菌操作技术，搞好组培室环境条件，正确使用和维护好超净工作台。减轻褐化现象的途径有以下：外植体和培养材料进行2040天的遮光培养或暗培养；选择适宜的培养基，调整激素用量；控制温度和光照，在不影响正常生长和分化的前提下，尽量降低温度，减少光照；冬春季节选择年龄适宜的外植体材料进行组培，并加大接种数量；在培养基中加入抗氧化剂和其他抑制剂，如抗坏血酸、硫代硫酸钠、有机酸、半光氨酸及其盐酸盐、亚硫酸氢钠、氨基酸等，可以有效地抑制褐化；加快继代传瓶的速度，添加活性炭等吸附剂（0.5%2.5%），是生产上常用的有效方法。五、操作题（45分）制

10、作配方为ms+6-ba0.5mg/ l的培养基2l (大量元素母液为10，微量元素母液、铁盐母液、有机物母液均为100，激素母液浓度为1mg/ml)(1)按配方移取各母液：大量元素母液为200ml，微量元素母液、铁盐母液、有机物母液均为20ml，6-ba激素母液为1ml。(2)定容：用蒸馏水定容至2l。(3)称量蔗糖和琼脂：蔗糖5060g，琼脂1416g。(4)培养基熬制：加入蔗糖和琼脂后进行培养液熬制，直至琼脂全部融化。 (5) 调ph值：先用ph计或ph试纸测量后再用0.1mnaoh或hcl调ph值为5.86.0。(6)二次定容：当培养基熬制后总体积少于2l时要定容至2l。(7)分装并扎瓶

11、口：趁热分装，100ml的三角瓶约装入3040ml, 35瓶/l。(8)高压灭菌：及时灭菌，121-123条件下保持2030分钟。(9)冷却：待接种。7. a.简述配方1/2ms+ba2.0+naa0.05+蔗糖3%+琼脂0.7%+ph5.4的含义及配1l的制备方法。答：采用1/2ms作为基本培养基，降低了无机盐的浓度，从而使整个培养基的渗透压降低，提高水势，促进芽吸水，从而促进生根。根据细胞分裂素和生长素的相互调节器官的概念为促进根的分化可选用生长素对细胞分裂素比率高的配方，此培养基是生根培养基ba是细胞分离素，naa是细胞生长素，除去细胞分离素只有细胞生长素，以达到促进生根的目的。(1)配

12、母液：msi 20x msii-msv 200x贮备 naa ba 0.1mg/ml贮备（2）配培养基：1、取约750ml蒸馏水，琼脂7g煮沸溶解，加入30g蔗糖2、取母液msi 50ml，msii-v 5ml，ba20ml，naa2ml于小烧杯，混匀3、将2倒入1中，蒸馏水定容1l6、调ph值(ph=5.8)7、分装试管，封口8、高压灭菌121，20min9、存放。5、在离体叶培养中，6-ba和kt利于芽 的形成；2,4-d利于愈伤组织 的形成8. b.简述配500mlms+ba0.5+naa0.2+蔗糖3%+琼脂0.7%+ph5.6的过程。答：(1)配母液：msi 20x msii-msv

13、 200x贮备 naa ba 0.1mg/ml贮备（2）配培养基： 1、取约350ml蒸馏水，琼脂3.5g煮沸溶解，加入15g蔗糖2、取母液msi25ml，msii-v2.5ml，ba10ml，naa1ml于小烧杯，混匀3、将2倒入1中，蒸馏水定容500ml6、调ph值(ph=5.8)7、分装试管，封口8、高压灭菌121，20min9、存放9. a.菊花快繁实验中，在进行生根培养时，为什么要选择1/2ms作为基本培养基？答：选择1/2ms作为基本培养基，降低了无机盐的浓度，从而使整个培养基的渗透压降低，提高水势，促进芽吸水，从而促进生根。1）生长素生长素由茎尖合成，沿植物体向下运输，常用的生长

14、素有吲哚乙酸（iaa）、吲哚丁酸（iba）、萘乙酸（naa）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-d）和萘氧乙酸（noa）等。iaa和iba见光易分解，故应置于棕色瓶中，iaa在高温灭菌时会受到破坏，最好采用过滤除菌方法。在植物组织培养中，生长素的主要作用有：诱导愈伤组织的产生，促进细胞脱分化；促进细胞的伸长；促进生根；2，4-d会诱导某些植物不定胚的形成。 （2）细胞分裂素细胞分裂素由根尖合成，沿植物体向上运输。细胞分裂素是腺嘌呤的衍生物。常用的细胞分裂素有6-苄氨基嘌呤（6-ba）、激动素（kt）、玉米素（zt）、2-异戊烯腺嘌呤（2-ip）、噻苯隆（tdz）、氯苯脲（cppu）等。在植物组织培

15、养中，细胞分裂素的主要作用有：促进细胞分裂和扩大，使茎增粗，而抑制茎伸长；诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长；减少叶绿素的分解，抑制顶端优势，延缓离体组织或器官的衰老，有保鲜的效果；对根的生长一般起抑制作用。在植物组织培养时，细胞分裂素/生长素的比值控制器官发育模式，若增加生长素浓度，有利于根的形成；增加细胞分裂素浓度则促进芽的分化。 （3）赤霉素（ga）和脱落酸（aba）ga3是20多种赤霉素中最常用的，ga3能促进低密度培养细胞的生长，增加愈伤组织生长，诱导矮化或发育迟缓的植物伸长生长。ga3最好现配现用，过滤灭菌后加入到培养基中。根据植物种类不同，脱落酸在培养基中刺激或抑制愈伤组织生长。据报道，脱落酸有利于胚胎培养。脱落酸还有抑制生长、促进休眠的作用，在植物种质资源超低温冷冻保存时，可以用来促使