羟基磷灰石的使用方法

1、羟基磷灰石填料纯化蛋白、多肽、核酸 别离机理： 羟基磷灰石具有独特的别离机理， 是唯一直接用于蛋白质和核酸纯化的无 机层析填料， 高度耐碱， 生物平安性最高。 其中磷酸离子与带正电的蛋白质以离子 键结合，具有离子交换特性，可由 NaCl 浓度梯度或磷酸钠浓度梯度洗脱，其中的 Ca2+离子与带负电蛋白质的自由羧基以 金属螯合方式结合，该结合方式对 NaCl 不敏感，可由磷酸钠浓度梯度洗脱。因此 该填料既可以用磷酸钠单梯度洗脱，也可 以采用 NaCl 梯度洗脱后以低浓度磷酸钠 缓冲液平衡，再以磷酸钠浓度梯度洗脱的 双梯度洗脱模型，以到达更高的分辨率。 羟基磷灰石类型选择：羟基磷灰石因陶瓷 化工艺不

2、同分为 2 种类型： I 型和 II 型， I 型对蛋白质具有更大的保存，对普通蛋白 质具有更大的动态载量，主要纯化大局部 蛋白质分子量一般在100kd 下；II型由于孔径较 I 型大，因而对抗体和局部 重组疫苗等大分子量蛋白质的动态载量 更高，而对HSA几乎无保存，因而更适合 于抗体的纯化，同时 II 型对核酸具有更大 的保存，能够分辩单、双链、超螺旋等各 种高级结构的 DNA,因而也适合纯化核 酸。高动态载量、高流速、高产率 更好的化学稳定性和机械强度，更长的 寿命刚性结构，保证了其在 PH范围内使 用，可用 NaOH 清洗良好的批次重现性，容易放大化 可随意选用阳离子和金属螯合两个模 式

3、别离纯化蛋白或其他分子 能用于层析系统、重力流柱、 AcroPrep 多孔板等应用碱性蛋白的纯化免疫球蛋白抗体纯化酸性蛋白白蛋白去除 DNA 和内毒素 纯化磷多肽别离纯化复杂的蛋白混合物纯化质粒流动相： 平衡液：5mM的磷酸钠缓冲液，PH= 洗脱液：的磷酸钠缓冲液，或2M的氯化钠缓冲液，PH=使用步骤： 建议使用干法填柱淸洗hffilHt7Step 1:setup take a cell lysate and draw it into the syringe through the tubing tipDraw any residual sample into syringeAttach sy

4、ringe and tubing tip to a pre-equilibratedBio-canal column步骤 1：平衡安装首先用至少 5 倍柱体积的平衡液预平衡 柱子，将细胞裂解吸入注射器，并安装在 柱头上。Step 2:binding sampleSlowly load the lysate onto the columnThe proteins will bind to the resin and non-proteins will flow through the column步骤 2：上样 将细胞裂解液慢慢注入柱子中，蛋白会 结合在柱子中的填料中，非蛋白将会流出 柱子Ste

5、p 3:washing columnAfter loading the column,add a syringe with wash bufferWash any remaining non-specifically bound proteins off the column with wash buffer(collect fraction3 if needed) 步骤 3：淋洗柱子 上样后，用淋洗液(一般为平衡液)将 所有的非蛋白清洗别离出柱子。如果上样量超出柱子的载样量，如果需要，可以考 虑收集。Step 4:elutionAttach a syringe with elution bufferSlowly elute your protein with elution bufferThis will allow you to capture90% of your protein in the first elution fraction步骤 4：洗脱选择适宜的洗脱液，用注射器将目标蛋 白洗脱并收集，如果需要，可以自行配制 不同浓度梯度的洗脱液进行必要的梯度 洗脱。保存：长时间应保存在 1MN