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文档简介

1、total dna extraction from eukaryotic tissue型表面活性剂，能溶型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使dna得得以游离出来）。以游离出来）。再加入苯酚和再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸相，因核酸(dna(dna、rna)rna)水溶性很强，经离心后即可水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入异丙醇或乙醇使中加入异丙醇或乙醇使dnadna沉淀，

2、沉淀沉淀，沉淀dnadna溶于双蒸溶于双蒸水或水或tete溶液中，即得植物总溶液中，即得植物总dnadna溶液。之后可加入溶液。之后可加入rnarna酶降解其中的酶降解其中的rnarna，再用氯仿除去，再用氯仿除去rnarna酶，得到酶，得到较纯的较纯的dnadna制剂。制剂。n提取缓冲液：提取缓冲液：100 mmol/l triscl (ph8.0), 20mmol/l edta, 500 mmol/l nacl, 1.5% sdsn24：1的氯仿：异戊醇的氯仿：异戊醇n预冷无水乙醇预冷无水乙醇成成分分 母母液液浓浓度度 体体积积 终终浓浓度度 tris-hcl (ph7.5) 1m 200

3、ml 200mm edta(ph8.0) 0.5m 50ml 25mm nacl 5m 50ml(15g) 250mm sds. 20% 15ml(5g) 0.5% 1.叶叶片片0.5g左右左右, 剪碎剪碎, 置研钵中，加入置研钵中，加入1ml提取缓冲液，提取缓冲液， 研磨成浆；研磨成浆；吸入吸入10ml ep管中，剧烈摇动混匀；管中，剧烈摇动混匀；2.60水浴保温水浴保温30-60min，不时不时颠倒混匀；颠倒混匀； 3.室温下室温下3000rpm离心离心10min；4.小心吸上清于新的离心管中，加入等体积氯仿小心吸上清于新的离心管中，加入等体积氯仿：异戊醇：异戊醇，剧烈震动；，剧烈震动；5.室温下室温下3000rpm离心离心10min； 6.小心小心将中间层将中间层吸入新的离心管中；吸入新的离心管中； 7.加入加入1倍体积倍体积预冷预冷95%乙醇乙醇，室温下放置片刻即出现絮状，室温下放置片刻即出现絮状dna沉淀。沉淀。 8.8000rpm离心离心5min ，弃掉上清；，弃掉上清；9.75酒精洗一次，酒精洗一次，晾干沉淀；晾干沉淀；10.加入加入5l rnas

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