糖发酵实验报告

1、糖发酵试验一、目的1 了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。2 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。二、原理多糖?单糖?丙酮酸?酸性产物 （或产酸产气 ）?ph 下降?指示剂呈酸性变色 （若产气者有气 泡出现 ） 。不同的细菌可根据分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是 否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂（通常为溴甲酚紫，即 b.c.p ，其 ph 在 5.2 以下 呈黄色， ph 在 6.8 以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气可在发 酵培养基中放入倒置小倒管观察。不同的微生物具有发酵不同糖（醇）的酶类，所以发酵途径及发酵产物各不相同。例

2、 如：大肠杆菌能使乳糖发酵，产酸产气，而伤寒杆菌则不能；大肠杆菌能使葡萄糖发酵，产酸 产气，而伤寒杆菌则只产酸、不产气。糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数 细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细 菌能分解某种糖产生有机酸 （ 如乳酸、醋酸、丙酸等 ） 和气体 （ 如氢气、甲烷、二氧化碳等 ） ； 有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖 产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。发酵培养基 含有蛋白胨，指示剂 （ 溴甲酚紫 ） ，倒置的德

3、汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚 紫指示剂可由紫色 （ph6.8） 变为黄色 （ph5.2） 。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气 泡来证明。三、器材1 菌种 大肠杆菌 , 普通变形杆菌斜面各一支。2 培养基 葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3 支（ 内装有倒置的德汉氏小管） 。 3 仪器或其他用具 试管架，接种环等。四、操作步骤1 用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培养基名称和所接种的细菌菌名。2 取葡萄糖发酵培养基试管 3 支，分别接入大肠杆菌，普通变形杆菌，第三支不接种， 作为对照。另取乳糖发酵培养基试管 3 支，同样分别接人大肠杆菌，普通变形杆菌，第三支 不接种

4、，作为对照。在接种后，轻缓摇动试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡。3将接种过和作为对照的 6支试管均置37 C培养2448h。4 观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡。篇二：发酵实习实验报告 第一部分、实验部分 实验一、酸乳的制作一、实验目的1 、 掌握酸乳的制作方法、基本原理；2 、 了解发酵剂制备过程中的操作要点；3 、 对最终产品进行感官评定及理化检测，并进行品质比较。二、基本原理 酸乳也成为酸牛奶，是人们喜欢的饮用发酵乳。所谓发酵乳、鲜乳或乳制品等主要原料添加乳酸菌，发酵以后形成的具有特殊风味的乳制品。乳经过发酵制成发酵乳以后营养价值提 高，发酵乳中的蛋白质、钙盐容易消化吸收，

5、具有消化、抑制肠道内异常的发酵和杀死肠道中 的有害菌的作用。酸奶是以牛奶为原料经过均质、消毒、发酵等过程加工而成的。酸乳的品种很多，根据 发酵工艺的不同，可以分为凝固型酸乳和搅拌型酸乳两大类。凝固型酸乳在接种发酵菌株后， 立即进行包装，并在包装容器内发酵、成熟。搅拌型酸乳先在发酵罐中接种、发酵，发酵结束 后在进行无菌灌装并后熟。其基本原理就是通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，乳酸使牛 奶中酪蛋白（约占全乳的 2.9% ，占乳蛋白的 85%）变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。同 时，通过发酵还可以形成酸奶特有的香味和风味，本实验主要学习凝固型酸奶的制作方法。三、实验材料1、材料：纯牛奶、白糖、酸

6、牛奶2、仪器：电炉、水浴锅、电子天平、恒温培养箱、相关玻璃器皿四、实验步骤1、取 2000ml 纯牛奶放入锅中加热；2、当达到一定温度后，按照 8%的比例加入 160g 白糖，搅拌溶解3、将牛奶加热到90 C ；4、小组分装，每个三角瓶中加入 50ml 的牛奶，5、将分装好的牛奶放到 95 C的水浴锅中，火菌 5min ;6、冷却到45 C，在酒精灯下，接种适量的酸牛奶（一勺），并搅拌均匀，封好口;7、在37 C的温箱中保温培养 2-4h，8、转入 0-4 C 冰箱中冷藏保存;9、品质鉴定五、实验结果品质鉴定： 1. 色泽：色泽均匀一致，呈乳白色。2. 气味：具有与种子酸奶同样的香味，无酒精发

7、酵味，无霉味或其他不良 味道。3. 状态：凝块均匀，无气泡，没有乳清析出。4. 口感：口感就好，与种子酸奶味道一致，清香，顺滑，没有颗粒状物质。 总结：本 次实验所制作的酸乳，质量品质和外观色泽均非常好。六、思考题1 、牛乳的杀菌工艺有哪几种？ 牛乳的杀菌工艺中最经典的就是巴氏杀菌法和超高温灭菌法，还有煮沸杀菌法。2 、 乳酸菌在乳中发酵的原理是什么？牛乳为什么是凝固的？ 基本原理就是通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，乳酸使牛奶中酪蛋白（约占全乳 的 2.9% ，占乳蛋白的 85% ）变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。实验二、甜酒酿的制作一、实验目的1 、 学习甜酒酿的发酵工艺；2 、 明确发

8、酵的原理。二、实验原理 甜酒酿是以糯米为主要原料，通过微生物的发酵酿制而成的。由于酵母不能直接利用淀 粉，因此必须先用糖化菌如根霉、毛霉等把淀粉分解成单糖或双糖。因此，甜酒酿是在糖化菌 和酵母菌共同作用下酿制而成的，甜酒酿的制作过程包括糖化和酒化两个过程。糖化过程是在 糖化菌如根霉分泌糖化酶的作用下，将淀粉水解成葡萄糖；酒化的过程是酵母菌利用葡萄糖经 过 emp 途径生成丙酮酸，然后进入无氧呼吸将丙酮酸转化为乙醇。三、实验材料1 、 材料：糯米、酒药2 、 器材：烧杯、锡箔纸、吸管、电子天平、电磁炉、不锈钢匙、玻璃棒等四、实验步骤1 、 选择原料；选择粒大饱满、无蛀虫、无杂物、色泽鲜亮、质量好

9、的新糯米共 1100g ，每小组大约有 275g 左右；2 、 淘洗浸泡；将米在水中浸泡 12-24 小时，后用自来水冲洗，浸米的目的是使米中 的淀粉粒子吸水膨胀，便于蒸煮糊化；将浸泡好的米用自来水冲洗干净，并沥干。3 、 蒸煮米饭；将洗净沥干的米在高压锅中隔水蒸煮 10-20 分钟，常压 30-40 分钟。 要求达到熟而不糊，外硬内软，内无白心，疏松易散，透而不烂，均匀一致。4 、 淋饭降温；用冷开水淋洗糯米饭，以达到降温增水的目的，并使熟饭表面光滑，易 于拌入酒药，利于糖化发酵菌的繁殖；淋饭时要边拌边淋，使米饭快速降温至35 C左右，避免因缓慢冷却导致微生物污染。5、 接入酒曲；将冷却至

10、30 C左右的米饭，按糯米量 1% （约11g ）接入酒药，将大米 平均分成4 份，拌匀装入烧杯，并在中央用玻璃棒打一孔道，搭成喇叭型凹窝（中间低，周边 高），表面再撒上少许酒药，用封口膜封口。6、保温发酵；30 C培养48小时，待喇叭型凹窝内有许多液体渗出，即可食用，但此 时酒味淡泊，略有酸味，若要品尝酒香浓郁的酒酿，可适当延长发酵的时间。7、后熟发酵；在8-10 C下培养2-3天。8 、 质量评估；酒香浓郁，液体清澈透明，酒液充沛。五、结果思考题 结果分析：在保温发酵 48 小时后，将烧杯移除后，看到在烧杯的底部出现少量的清澈 的液体，在喇叭口的大米的表层出现了白色的霉菌。在后发酵过程中，

11、烧杯底部的清澈的液体 的量不断增加。此时出现淡淡的酒精味，略有酸味。品鉴时，烧杯的底部出现了2cm 厚的清澈的液体，酒精味浓郁，有一股淡淡的清香。1 、 甜酒酿制作过程中应注意问题有哪些？ 在甜酒酿的制作过程中应注意在挑选糯米的时候选取粒大饱满的新糯米，在蒸煮的时候，注意不要将米饭蒸糊，在淋饭降温的时候用冷开水快速降温，避免因为缓慢降温冷却导致 其他微生物的污染。在接种酒曲之后要搅拌均匀，接入适量的酒药，表面撒上少许酒药，注意 用a4纸封口。保温发酵的温度为30 C，培养的时间为48小时。在进行质量报告时，当发现米饭上层的霉菌出现黑色或者黄色时，不要食用。在进行品尝鉴评的时候，将上层的霉菌除

12、去。2 、说明甜酒酿制作的发酵原理？ 甜酒酿是在糖化菌和酵母菌共同作用下酿制而成的，甜酒酿的制作过程包括糖化和酒化两个过程。糖化过程是在糖化菌如根霉分泌糖化酶的作用下，将淀粉水解成葡萄糖；酒化的过 程是酵母菌利用葡萄糖经过 emp 途径生成丙酮酸，然后进入无氧呼吸将丙酮酸转化为乙醇。实验三、槐耳粗多糖的提取一、实验目的1 、掌握发酵产物的精制过程；2 、明确提取、浓缩、醇沉和干燥的原理。二、实验原理 温度升高能使细胞壁通透性增加并促进膨胀，增加了可溶性成分的溶解和扩散速度，所以浸取温度越高，浸出速度越快。但温度升高后，某些目的产物不稳定发生分解变质，同时使 挥发性目的产物挥发散失。因此，要把浸

13、取温度控制在适当的范围。在目的产物浸出过程中， 溶剂的 ph 值对浸出速度有影响。某些目的产物可溶解于酸性溶剂，则要使用酸性溶剂浸提； 有些目的产物易溶解于碱性溶液，因而要选择碱性溶剂提取。根据目的产物的酸碱性质可确定 提取过程中溶剂 ph 值的范围。分级沉淀法是指在混合组分的溶液中加入与该溶液能互溶的溶剂，通过改变溶剂的极性 而改变混合组分溶液中某些成分的溶解度，使其从溶液中析出。如在含有糖类或蛋白质的水溶 液中，分次加入乙醇（乙醇：中强极性，能与水以任何比例相混，乙醇浓度越高溶液极性越 低。各种目的产物在乙醇中的溶解度随乙醇浓度的变化而变化），使醇含量逐步增高，逐级沉 淀出分子量由大到小的

14、蛋白质、多糖、多肽。浓缩的方法有蒸发浓缩、冷冻浓缩和吸收浓缩等，其中的蒸发浓缩是将溶液加热沸腾， 使溶剂汽化除去，从而提高溶液中溶质的浓度，可以分为常压蒸发浓缩和真空蒸发浓缩两类。 干燥时，发酵产品提取过程中的最后一个环节，是将潮湿的固体中的水除去的过程，与蒸发相 比，水分是不在沸腾的状态下汽化，而是在其本身温度低于沸点的条件下进行，很多因素如物 料的性质和形状、物料本身的温度、干燥介质的温度、湿度和流动情况等影响着干燥的速度。 方法有空气加热干燥法、杰出加热法和冷冻升华干燥法。三、实验器材1 、 材料：槐耳2 、 器材：分液漏斗、电炉四、实验步骤1 、 浸泡2 、 ：250g 槐耳，粉碎后加

15、入 8 倍蒸馏水浸泡 24h ；3、热浸提：ph自然，100 C ,不时搅拌，2h ;4 、 过滤，残渣加入适量的水，重复抽提一次，合并两次提取所得滤液；5 、 浓缩，采用蒸发浓缩法，加热至小于 150ml 左右体积；6 、 去蛋白，连续 2-3 次加入氯仿：正丁醇 =4:1 溶液去除蛋白（ sevag 法），至不显 示蛋白反应为止，离心收集上清液。（注： sevag 法：加入 0.2 倍多糖体积的氯仿和乙醇的混合液，震荡分离 15min 左 右，直到氯仿和水的界面没有沉淀为止，且重复处理 2-3 次才能有效去除多糖中的蛋白 质。）7 、 本次实验经浓缩和抽提之后获得 80g 的粗多糖提取液。

16、将所得的多糖的粗提取液平 均分成4 份，依据每份的质量体积按照 70%、 75%、 80%、 85%的乙醇浓度加入乙醇，室温下静止 24h ；8 、 离心（滤纸过滤，切记不要震荡）； 3600rpm, 离心 10min9、 收集沉淀，采用对流加热干燥方法，60 C加热干燥至恒重；10、称重，按照下表记录数据。六、思考题1 、 沉淀多糖最适乙醇用量是什么？沉淀多糖最适的乙醇用量是 75%浓度，大约是粗多糖浓缩液的4 倍体积乙醇。2 、 粗多糖的提取率是多少？以最适乙醇的浓度 75%为标准，粗多糖的提取率 =1.02g/（250g/4）x100%=1.632% 篇 三：发酵实验报告发酵工程原理综合

17、实验小型发酵罐的使用与发酵过程监测与分析学院名称：食品学院年级专业： 09 级生物工程实验日期 2011.11.23-25摘 发酵罐是用于培养微生物或细胞的封闭容器或生物反应装置。可用于研究、分析 或生产。有多种在材料、大小和形状上各异的产品。最常用的为全搅拌罐式反应器。发酵罐广泛应用于乳制品、饮料、生物工程、制药、精细化工等行业，罐体设有夹层、保温层、可加热、冷却、保温。罐体与上下填充头（或雏形）均采用旋压 r 角加工，罐内壁经镜面抛光处 理，无卫生死角，而全封闭设计确保物料始终处一无污染的状态下混合、发酵，设备配备空气 呼吸孔， cip 清洗喷头，人孔等装置。本实验通过控制合适的培养条件，

18、使大肠杆菌迅速持续生长，在发酵过程中定时取 样测定不同时期发酵液的细菌浊度及残留还原糖的变化了解发酵过程中菌体生长及对培 养基的利用情况。关键词：大肠杆菌 液体发酵 最大比生长速率 平均细胞得率系数 目录、八前 31. 材料与设备 1.1.材料 41.1.1.菌种 41.1.2.培养 基 41.1.3.其他材 料 41.2. . . . . . . . . . . . . . . .设备. 42. 实验方 法 42.1.流程 42.2.菌种准 备 4 52.2.1. 配制培养基 52.2.2.接种与培养 2.3. 5上罐前的准备 2.4. 5实罐灭菌 2.5. 6发酵操作 2.5.1.6 .

19、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 取样2.5.2.接种 . 62.5.3.电脑监控 . 72.5.4. 7发酵管理 2.6. 7发酵过程中各项生理指标的测定 72.6.1.od 值测定 2.6.2. 7葡萄糖测定 2.7. 7放罐清洗 3.结果与分析 93.1.菌体浓度与吸光值关系标准曲 线 93.2.发酵过程各参数变化规律 93.3.1 干菌体浓度 93.2.2 葡萄糖浓度 103.2.3 ph 值、 do 值和其他一些参数 103.4. 各参数整理与分析 113.5. 最大比生长速率 133.6. 平均细

20、胞得率系数 154. 6 实验操作对实验结果的影响 153.6.1 菌种活化与一级菌种、二级菌种的制 备 153.6.2 摇床 153.6.3 上罐前管理 153.6.4 实罐灭菌 163.6.5 接种时管理 163.6.6发酵时管理 .3.6.7 od值测16定 .3.6.8还原糖测17定 .173.6.9试验中遇到的问题及猜想 .丿4、17参考文献 .18、八前言发酵罐是进行液体发酵的专用设备。实验室使用的小型发酵罐，其体积可从 1l 至数百 升。一般 5l 以下是用耐压玻璃制作罐体， 10l 以上用不锈钢板或钢板制作罐体。发酵罐配备 控制系统，它主要是对发酵过程中的各种参数如温度、ph

21、、溶解氧、搅拌速度、空气流量、补料、泡沫水平等进行设定、显示、记录以及对这些参数进行反馈调节控制。大肠杆菌（ e.coli ）是遗传工程研究过程中常用的受体菌，对大肠杆菌的遗传背景和生 理特性研究已相当彻底，已有很多不同抗药性、不同营养依赖型和不同校正突变型的菌种供选择应用，可以根据不同的载体而选择不同的菌种。大肠杆菌在营养条件充足时，2030min即可繁殖一代，而且大规模发酵成本低，具有巨大的生产潜力为了解发酵过程中菌体的生长及对培养基的利用情况，需在发酵过程中定时地取样测 定。包括对菌体进行镜检、测定不同时期发酵液的细菌浊度及残留还原糖（rg ）的变化等。1. 材料与设备1.1. 材料1.

22、1.1. 菌种大肠杆菌（ e.coli ）A A1.1.2. 培养基种子培养基：葡萄糖 10g ，蛋白胨 10g ，牛肉膏 10g ，酵母膏 5g ，氯化钠 5g ，水 1000ml 。 ph7.0 。发酵培养基：葡萄糖 20g ，蛋白胨 10g ，牛肉膏 10g ，酵母膏 10g ，氯化钠 5g ，氯 化铵 5g，水 1000ml。ph7.0。全部用自来水配制培养基。1.1.3. 其他材料泡敌、斐林试剂、 0.1% 标准葡萄糖溶液、 40%氢氧化钠等。1.2. 设备biotech-7bgz 发酵罐 1 套（配套蠕动泵、 ph 电极、溶氧 （do） 电极、空压机及所有连 接管）、分光光度计、旋

23、转式摇床、离心机、恒温培养箱等。2. 实验方法2.1. 流程菌种斜面一级种子37 C （250ml 摇瓶）37 C培养 10h 二级种子 （500ml 摇罐取分析测定 发酵罐管路准备罐灭菌酵图 1 发酵过程流程2.2. 菌种准备2.2.1. 配制培养基配制种子固体培养基 100ml ,分装试管，0.1mpa （121 C ）灭菌20min，摆成斜面。 配制种子培养液 600ml ，分别分装 50ml 于两个 250ml 三角瓶中（作一级种子瓶），余下 550ml 平均分装于三个 500ml 三角瓶中（作二级种子用），同上灭菌备用。2.2.2. 接种与培养2.2.2.1. 菌种活化上罐前两天，从

24、冰箱中取出菌种转接斜面，37 C培养24h。2.2.2.2. 接一级种上罐前一天，由斜面菌种转接一级种子瓶，37 C振荡（125r/min ）培养12h。分别测接种前和培养结束时的 od 值，计算出净增 od ，并作记录。2.2.2.3. 接二级种将一级种转接二级种子，接种量 5%。之后，37 C振荡（125r/min）培养10h。2.3. 上罐前的准备 洗净发酵罐及各联接胶管。配制发酵培养基 5000ml ，置发酵罐内，加入几滴泡敌。校正 ph 电极和溶氧 （do） 电极。 安装好发酵罐，把电极插口、取样管、补料口、消泡剂料瓶等固定、密封好后，开夹套 出、进水阀v2、w1，使夹套充满水。篇四

25、：微生物实验报告脓汁和粪便标本中病原菌的检测专业： 学号： 姓名：一、实验目的 探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观 察，细菌生化反应鉴定等技巧。从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴 趣。二、实验材料器材 打火机、油性笔、酒精灯、接种环、接种针、污物盘、普通冰柜、隔水式电热恒温培养 箱、奥林巴斯 cx21 型生物显微镜、电炉、试管（带棉塞）、称量纸、药勺、牛皮纸、硫酸 纸、橡皮筋、尺子、锥形瓶、高压蒸汽灭菌器、镊子、玻片、吸水纸、拭镜纸试剂药品 普通营养琼

26、脂培养基、蒸馏水、脓汁标本、粪便标本、石蜡油、生理盐水、结晶紫、卢 戈碘液、 95%乙醇、稀释复红、葡萄糖微量发酵管（2 支）、乳糖微量发酵管（ 2 支）、青霉素抗菌素纸片、链霉素抗菌素纸片、庆大霉素抗菌素纸片、血浆、福氏志贺菌诊断血清三、方法与步骤干粉培养基-蒸馏水-加热溶化-分装-集中放在试管筐里-罩上硫酸纸、牛皮纸 t用橡皮 筋扎好-放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内-送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）-灭菌T（1 ）平板培养基：倾注平板10ml-琼脂完全凝固后，平板倒放 -4C冰箱保存备用。（2 ）斜面培养基：培养基趁热斜放-琼脂凝固以后，4C冰箱保存备用。-贴上标签后灭菌使用。空气的细菌学检查每

27、组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点）-将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边 平板暴露于空气中15mim 平板倒扣盖上-作标记37C温箱培养 24h观察结果。人体体表的细菌学检查 甲乙常规洗手，丙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁共用 1 个平板 按规定在普通平板上接种手指上的细菌。第 1 格为洗手前，第 2 格为洗手后，第 3 格为 消毒后，第 4 格空白对照。接种环烧灼灭菌-分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两 份， -烧掉接种环上多余的标本 -冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂 平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）-接种环

28、烧灼灭菌 T将平板倒置37 C培养1824h-观察结果 。接种环烧灼灭菌-挑选平板上典型的四种单菌落（白色、黄色、紫黑色、粉红色）进行斜 面接种纯培养-做好标记接种环烧灼火菌-斜面培养基置于37 C培养过夜保存备用革兰氏染色： 取洁净载玻片-用灭菌操作后的接种环取生理盐水 1-2 环于玻片上-挑取细菌培养物少许 与盐水轻轻抹匀-寺涂片干燥后在酒精灯火焰外侧快速来回2-3回合-吉晶紫初染1min-水洗卢戈碘液媒染1min 水洗 95%乙醇脱色约20s水洗稀释品红复染1min水洗及干，镜 检。肉汤接种法 :接种环烧灼灭菌-分别在斜面培养物中挑取菌苔少许 -立即移入肉汤培养基管中 -在接近 液面的管

29、壁上轻轻研磨 -沾取少量肉汤调和 -混匀-试管口通过火焰 2-3 次灭菌-塞好棉塞 35C 培养 46h接种环烧灼灭菌-分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布 -接种环烧灼灭 菌- 标记:青、链、庆 -镊子火焰消毒-贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片 - 按压-镊子消毒- 倒置37 C培养1824h 观察结果取干净玻片一张-在左右两边分别滴加兔血浆 1-2 滴，生理盐水 1 滴-接种环烧灼灭菌- 冷却-分别用接种环取之前实验所得到的白色和黄色菌苔 （2 3 个菌落的菌量 ）与血浆研磨混 合-边混匀边观察结果-接种环烧灼灭菌-稍等片刻，观察结果接种针烧灼灭菌-用灭菌接种针分别刮取实验所得到

30、的紫黑色和粉红色菌苔 -分别接种在 葡萄糖发酵微量管中和乳糖发酵微量管内 接种环烧灼灭菌 将微量管平放在平板内 37C培 养过夜后-观察结果。接种针烧灼灭菌-分别用接种针在紫黑色和粉红色的斜面取菌 -从半固体培养基中心垂直 刺入，可刺达近底管处，但不要到达管底 -循原来的路线退出接种针 -试管口迅速通过火焰 2- 3次灭菌塞好棉塞烧灼灭菌接种针 37C培养24h观察结果取洁净的载玻片一张 将磨面近端设为对照区 -滴加生理盐水15ul 远端设为试验区 滴 加福氏志贺菌诊断血清 15ul 接种环烧灼灭菌 用接种环分别取粉红色菌苔 研磨于盐水或血 清内，混合均匀-接种环烧灼灭菌-载玻片来回倾侧-观察

31、结果四、结果与讨论 对脓汁中细菌的分析讨论1、用普通平板，从脓汁标本中分离出金黄色和白色两种菌落。2、 在显微镜下观察时，这两种细菌均为g+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的 葡萄球菌。3、结合菌落的颜色，可以初步断定，这是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。4、通过血浆凝固酶试验，观察到黄色菌落的细菌能使血浆产生颗粒性物质，说明为凝固 酶阳性；白色菌落则没有凝集反应，说明其为凝固酶阴性。5 、最后进行的是药敏试验，从培养基上可以观察到，不同的抗生素所形成的抑菌圈不 同。其中青霉素对金黄色葡萄球菌最敏感。对粪便中细菌的分析讨论1 、用伊红美蓝平板分离菌落时，可以从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光

32、泽的菌落和 粉红色半透明菌落。2 、在显微镜下观察时，这两种菌均为g- 杆菌，排列不规则，从形态上不能鉴别是什么细菌。3 、经糖发酵试验，可以观察到，紫黑色的细菌能使葡萄糖和乳糖的试管变色和产生气 体；粉红色的细菌只能使葡萄糖的试管变色。4 、经半固体动力试验，观察到紫黑色的细菌使半固体培养基成浑浊状态，粉红色的细菌 只在接种针插入的方向聚集。5 、综上所述，紫黑色的细菌为大肠埃希菌，粉红色的细菌为志贺菌。6 、最后进行药敏试验时，发现大肠埃希菌对青霉素不敏感，对庆大霉素和链霉素都敏 感。综上所述，脓汁标本中分离得黄色菌落为金黄色葡萄球菌，白色菌落为白色葡萄球菌， 致病菌为金黄色葡萄球菌；粪便

33、标本中分离得紫黑色菌落为大肠埃希菌，粉红菌落为福氏志贺 菌，致病菌为福氏志贺菌。篇五：发酵实验报告发酵工艺及设备实验报告学院：化学化工学院专业：生物工程班级：1201学号： 2学生姓名：程迅日期2014年 11 月实验一摇瓶发酵法制备糖化酶一、实验目的（ 1 ）掌握摇床发酵法制备糖化酶的工艺流程及操作方法（ 2 ）了解利用黑曲霉菌菌种发酵时的生长条件及注意事项（3 ）熟练掌握实验过程中的无菌操作和培养条件的选择二、实验仪器及试剂菌种：黑曲霉仪器：锥形瓶（ 500ml） 、移液管、恒温水浴锅、秒表、 50ml 比色管、牛皮纸、纱布 （ 8 层）、 ph 计。药品：三水乙酸钠、冰醋酸、硫代硫酸钠、

34、碘、氢氧化钠、硫酸、可溶性淀粉、玉米 粉、豆饼粉、麸皮三、实验原理 摇瓶发酵是实验室常用的通风发酵方法，通过将装有液体发酵培养基的摇瓶放在摇床上 振荡培养，以满足微生物生长、繁殖及产生许多代谢产物对氧的需求。它是实验室筛选好气性 菌种，以及摸索种子培养工艺与发酵工艺的常用方法。葡萄糖淀粉酶（ec3.2.1.3）系统名为淀粉 a-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶，俗称糖化酶，是国内产量最大的酶品种。糖化酶对淀粉分子的作用是从非还原末端切开a-1,4 键，也能切开a-1,3 键和a-1,6 键，产生葡萄糖。糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原末端开始，分解a-1,4- 葡萄糖苷键生成葡萄糖。葡

35、萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸钠氧化，过量的次碘酸钠酸化后析出碘， 再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算酶活力。四、实验步骤1. 培养步骤1. 1 种子培养基制备及灭菌将新鲜土豆去皮切块，称取 200300 g 土豆块放入 500 ml 烧杯中，加入一定量水， 在电炉上煮沸至土豆块熟透，用 120 目纱布过滤，滤渣反复用一定量水清洗、过滤 2 次，合并各次滤液且定容至 1000 ml 即得土豆汁。取一定体积的土豆汁，在其中加入5%的蔗糖，溶解摇匀并调 ph 至 5.5 ，即得种子培养基。将适量种子培养基倒入锥形瓶（ 250ml ），用纱布塞塞住管口，并用牛皮纸包扎，置灭菌锅中，于121 C下灭菌3

36、0min。待灭菌完毕，冷却取出。1. 2 发酵培养基制备及灭菌取6 只 500ml 摇瓶，分别按装液量 100、200、300ml 配制培养基（玉米粉 6%、豆饼 粉 2%、麸皮 1%），加水后稍微摇动，使原料湿润，浸入水中。用8 层纱布包扎瓶口，再加牛皮纸包扎。置灭菌锅中，于 121 C下灭菌30min 。1. 3 发酵培养基接种：将已生长好的菌种，在无菌条件下，按照10%的接 量（8%-12% ）接种到发酵培养基上。1. 4发酵培养基发酵：将摇瓶固定在摇床上，培养温度为31 C，转速为120r/min ，培养时间 96h 。显微镜观察菌丝形态，用试纸测发酵液 ph ，测定酶活 力。摇瓶培养

37、时观察各种摇瓶机的结构。2. 糖化酶活力测定3. 1 待测酶液的制备：精确吸取液体酶 1.00ml ，先用少量的乙酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，将上清液小 心倾入容量瓶中。沉渣部分再加入少量缓冲液，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度 （估计酶活力在 100250u/ml 范围内），摇匀。通过 4 层纱布过滤，滤液供测定用。4. 2 酶活力测定：于甲、乙两支 50ml 比色管中，分别加入可溶性淀粉溶液 25ml 及缓冲液 5ml ，摇匀 后，于40 C恒温水浴中预热5min。在甲管（样品）中加入待测酶液2ml，立刻摇匀，在此温度下准确反应 30min ，立刻各加入氢氧化钠溶液 0.2ml

38、，摇匀，将两管取出迅速冷却，并 于乙管（空白）中补加待测酶液 2ml 。吸取上述反应液与空白液各 5ml ，分别置于碘量瓶中， 准确加入碘溶液 10ml ，再加氢氧化钠溶液 15ml ，摇匀塞紧，于暗处反应 15min 。取出，加 硫酸溶液 2ml ，立即用硫代硫酸钠标准液滴定，直至蓝色刚好消失为其终点。5. 3 酶活力计算：样品酶活力（u/g或u/ml ） =579.9 x （a-b）c Xn 式中：a与b分别为空白、样品消耗 硫代硫酸钠标准溶液的体积，ml ； c 为硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/l ； n 为稀释倍数。五、数据分析比较不同装液量下的菌体形态特征、酶活力，将结果填入下表：装液量 /ml指标酶活力ph菌体特征 100 420u/ml 4.2 200 510u/ml 4.1 300 570u/ml 3.8出现球状的白色的菌丝团，瓶壁上出现黑丝的孢子和菌丝六