大鼠肾间质纤维化过程中血流变学改变与氧化应激(一).doc

1、大鼠肾间质纤维化过程中血流变学改变与氧化应激(一)作者：陈蓉王顺蓉万英林燕邹平李着华【摘要】目的探讨在单侧输尿管梗阻致大鼠肾间质纤维化进程中血流变学的改变与氧化应激反应的关系。方法成年SD大鼠 36 只,随机分为假手术组和模型组：模型组采用左侧输尿管结扎术，各组分别于实验的第 7、14、21 天处死动物 6 只。腹主动脉取血测血流变学指标； HE 染色和免疫组化观察大鼠肾间质 -SMA 变化；测定梗阻侧肾组织匀浆中 T-SOD和 MDA 的含量。结果随梗阻时间增加，肾组织中 MDA 含量增加，T-SOD活性降低，血液粘滞度增加，肾间质纤维化程度加重。结论氧化应激反应增加使血液流变学改变，参与单

2、侧输尿管梗阻致肾间质纤维化的形成。【关键词】肾间质纤维化氧化应激血流变【Abstract】ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetweenHemorheologychangesandtheoxidativestressintheprogressionofunilateralureteralobstruction(UUO)ratswithrenalinterstitialfibrosis.Methods:36SDratswererandomlydividedintosham-operatedandUUOgroup RatsinUUOgroupunderwe

3、ntleftunilateralureteralligation.Theratsweresacrificedatday7，14and21.Renalfibrosiswereassessedbythedeterminationoftissuemalondialdehyde(MDA)andsuperoxidedismutase(SOD)contentHemorheologyweredetected.Immunohistochemistrystudywasperformedonrenaltissuefor -smoothmuscleactin( -SMA).Results:Timeincreases

4、withtheobstructionandkidneytissueMDAcontentincreased,T-SODactivitydecreased,bloodstagnationincreases,increasedrenalinterstitialfibrosis.Conclusion:Oxidativestressincreasedthebloodrheologychanges,causedbyunilateralureteralobstructioninrenalinterstitialfibrosis.【Keywords】RenalfibrosisOxidativestressHe

5、morheology肾间质纤维化是各种终末期肾脏疾病的主要病理过程，目前其发病机制尚未完全阐明。现有研究证明，氧化应激损伤在肾间质纤维化发病过程中起重要作用，抗氧化能有效延缓肾纤维化进程 1。本实验采用经典的单侧输尿管梗阻（ unilateralureteralobstruction,UUO ）致大鼠肾间质纤维化模型，动态观察大鼠血液粘度改变、 超氧化物歧化酶（SOD）、丙 二醛 （ MDA ）的 改 变 ， 以 及 对 肾间 质 - 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 ( -smoothmuscleactin，-SMA)的表达，探讨血液流变学改变情况和肾脏氧化应激反应对大鼠肾间质纤维化形成的影响。材

6、料和方法1 材料试剂和仪器丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（ SOD）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）；全自动血流变快测仪 (FASCO-3010，重庆大学维多生物工程研究部 )；AX70荧光显微镜（ Olympus）；722 型分光光度计（厦门分析仪器厂）。2 方法2.1 动物模型的建立及分组雄性 SD大鼠 36 只，体重 200g 左右 ,清洁级动物，由重庆腾鑫生物技术有限公司提供。动物随机分为2 组：假手术组 18 只，单侧输尿管梗阻手术（模型组 /UUO 组）18 只。大鼠腹腔注射 1戊巴比妥钠 (3mlkg)麻醉，常规消毒，沿腹白线开腹，暴露并分离左侧输尿管，模型组在左输尿管中

7、、上 l3 处两次结扎，连续缝合关闭腹腔， 间断缝合皮肤。术后连续 5 天腹腔注射青霉素4u/ 天/ 只，假手术组不结扎输尿管，其余操作过程均相同。2.2 指标检测两组分别于术后7 天、 14 天、 21 天麻醉（同前） 6 只动物，腹主动脉取血 5ml 抗凝， 37恒温保持， 4 小时内检测全血高、中、低切粘度，血浆粘度和全血还原粘度。处死动物，立即取左侧肾脏，对剖取一半用 10%中性甲醛固定， 72 小时后石蜡包埋切片， HE 染色和 -SMA 免疫组化染色；另一半 -20冻存，按试剂盒说明，羟胺法测 SOD，硫代巴比妥酸法测 MDA。2.3 数据分析数据采用 SPSS13.0软件包进行统

8、计分析 ,结果以均数 标准差（ x- S）表示，组间比较采用单因素方差分析，全血还原粘度与肾组织T-SOD、MDA 关系采用 Pearson相关分析。结果1 肾脏形态假手术组大鼠双侧肾脏颜色红润，中等大小，包膜完整压力不高；模型组大鼠梗阻侧肾（左肾）体积随梗阻时间的延迟而逐渐增大，呈囊状，压力高，包膜不光滑，外有脂肪组织包裹，皮质较薄，色暗红；右肾无明显差异。假手术组各时点的肾组织 HE染色未见异常。 模型组 7 天，肾小管扩张明显，部分近端小管变性坏死，管腔内可见脱落的上皮细胞，肾间质内大量炎细胞浸润。模型组 14 天，部分肾小管扩张，部分萎缩，肾间质内炎细胞浸润更明显，纤维细胞增殖明显。模

9、型组 21 天，肾小管萎缩明显，部分已经消失，纤维细胞增殖更多， 肾间质内见明显纤维化。 -SMA 免疫组化染色显示各时点假手术组无明显差异，模型组随梗阻时间增加，肾间质胶原纤维沉积越多。2 血液流变学指标比较模型组较假手术组全血粘度、 血浆粘度及全血还原粘度均增高 （* ：P0.05，#：P0.01）。见表 1。Tab1aThechangofpropertyofhemorheologyineachgroupat7d(x-） S,n=6GroupH b(mpPa.s)M b(mpPa.s)L b(mpPa.s) p(mpPa.s) re(mpPa.s)Sham5.10 0.327.05 0.2

10、815.06 1.561.34 0.129.42 0.47UUO6.63 0.49*8.31 0.60*17.34 0.98*1.56 0.19*11.63 0.63#Tab1bThechangofpropertyofhemorheologyineachgroupat14d(x-） S,n=6GroupH b(mpPa.s)M b(mpPa.s)L b(mpPa.s) p(mpPa.s) re(mpPa.s)Sham5.21 0.477.23 0.3015.02 1.281.42 0.0810.06 0.53UUO7.34 1.35#9.14 1.63#18.46 2.52#1.68 0.15#13.08 0.81#Tab1cThechangofpropertyofhemorheologyineachgroupat21d(x-） S,n=6GroupH b(mpPa.s)M b(mpPa.s)