土鳖虫提取液对人胃低分化腺癌细胞BGC(一).doc

1、土鳖虫提取液对人胃低分化腺癌细胞BGC(一)作者：邹玺，刘宝瑞，钱晓萍，禹立霞【关键词】土鳖虫； ,BGC摘要：目的研究土鳖虫体外对人胃低分化腺癌BGC823细胞抗肿瘤活性。方法采用MTT 法测定了土鳖虫水提物和醇提物对人胃低分化腺癌BGC823细胞增殖的抑制作用，采用生长曲线测定法检测土鳖虫醇提物对体外培养肿瘤细胞的细胞毒作用。结果土鳖虫水提物不能抑制体外培养的肿瘤细胞，而醇提物能显著抑制人胃低分化腺癌BGC823细胞增殖,药物作用 48h 时抑制率最高，并有较好的剂量依赖关系。结论体外土鳖虫水提物没有抗肿瘤活性，醇提物有较强的抗肿瘤作用，值得进一步研究其抑制机理。关键词：土鳖虫； BGC8

2、23细胞株；抗肿瘤活性TheSuppressionEffectofExtractofEupolyphagaonHumanGastricLow-differentiationAdenocarcinomaCellLineBGC-823invitroAbstract：ObjectiveToinvestigateantineoplasmicactivityofextractofeupolyphagaonhumangastriclowdifferentiationadenocarcinomacelllineBGC823invitro.MethodsTheMTTassayhasbeendevelopedf

3、orquantitativeevaluationoftheproliferationofBGC823ofwaterextractandethanolextractofeupolyphaga.ThecytotoxiceffectofethanolextractofeupolyphagawasalsoassessedbyMTTassay.ResultsWaterextractofeupolyphagahasnocytotoxiceffectonhumangastriclowdifferentiationadenocarcinomacelllineBGC823invitro,butethanolex

4、tractofeupolyphagahassignificanteffect.Thecytotoxiceffectisthemaximumat48hoursandhaveadosedependentrelation.ConclusionEthanolextractofeupolyphagahascytotoxiceffectinvitro,whilewaterextracthasnt.Itisvaluabletoinvestigatethemechanismofcytotoxiceffect.Keywords：Eupolyphaga；BGC823；Antineoplasmicactivity中

5、国药典收载土鳖虫正品药材为鳖蠊科昆虫地鳖EupolyphagasinensisWalker或冀地鳖Steleophageplancyi(Boleny)的雌虫干燥体，性寒，味咸，有小毒。目前治疗消化道肿瘤的中医处方中土鳖虫的应用非常广泛，大多入中药复方煎取，认为其有抗肿瘤活性。然而，土鳖虫的抗肿瘤作用及其抗肿瘤成分未见有明确的实验室研究报道。笔者对此进行了研究。1 材料与方法1.1 材料来源实验细胞株：人胃低分化腺癌BGC823细胞株为本实验室常规培养，生长于含 10%新生牛血清的 RPMI1640完全培养液中， 37恒温，5%CO2，饱和湿度培养箱中生长。 取对数生长期细胞用于实验。土鳖虫：购

6、自六安市国泰药业有限责任公司，批号：20041201 试剂：RPMI1640培养液 (GIBCO公司产品 )；MTT(sigma公司产品，以超纯水配制成 5mg/ml 浓度 )；二甲基亚砜（DMSO，上海凌峰公司产品，分析纯）。1.2 药物制备1.2.1 水提物的制备称取药材100g，以水为溶媒提取两次。 第 1 次加 10倍量水，加热提取1h，滤过；药渣加8 倍量水，加热提取1h，滤过。合并两次滤液，浓缩至1g/ml （相当于生药），定容。 0.22 m微孔滤膜过滤，备用。1.2.2 醇提物的制备称取药材 300g，以 95%乙醇为溶媒提取两次。第 1 次加 8 倍量溶媒，加热提取 1h，滤

7、过；药渣加 8 倍量溶媒，加热提取1h，滤过。合并两次滤液， 浓缩至 1g/ml（相当于生药），定容。0.22 m微孔滤膜过滤，备用。1.2.3 配药将上药用完全培养液稀释后得4 种终浓度： 10，5，2.5，1.25mg/ml 供实验用。将醇提液原液以完全培养液稀释为8，7.5，6，5，4，3，2，1mg/ml 供实验用。以上药物均实验前新鲜配用。1.3 方法与步骤1.3.1 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法 1，2在含 10%胎牛血清的1640 培养液中培养细胞，在细胞达到指数增长期时用于实验。记数细胞浓度为 2.5 104/ml，接种于无菌的 96 孔培养板中。每孔加入肿瘤细胞悬液 200l，培养 24h 后吸去原有的培养液，分别加入各200l的 4种不同浓度土鳖虫醇提液和6 种不同浓度水提液，设空白对照孔加完全培养液，实验对照孔加肿瘤细胞， 每组均为 5 复孔。混匀后置于 37、5%CO2 培养箱中继续培养24h。于结束前4h 每孔加入20l浓度为5mg/mlMTT ，继续培养4h 后吸去全部上清液，每孔加入二甲基亚砜200l溶解液，微型混合器振荡1015min，充分溶解，用酶联免疫检测仪于 490/