仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价

1、仿制药杂质检查方法建立和仿制药杂质检查方法建立和 方法学研究与评价方法学研究与评价 主讲人：许真玉主讲人：许真玉 讲习组成员：霍秀敏、高杨讲习组成员：霍秀敏、高杨 药品审评中心药品审评中心 2008年年7月月 2 一、概述一、概述 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 三、杂质检查方法学验证的要求三、杂质检查方法学验证的要求 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析 五、几个小问题的计论五、几个小问题的计论 六、小结六、小结 主要内容主要内容 3 l杂质杂质：任何影响药物纯度的物质统称为杂质。：任何影响药物纯度的物质统称为杂质。 药品中的杂质按其理化

2、性质一般分为三类：有药品中的杂质按其理化性质一般分为三类：有 机杂质、无机杂质及残留溶剂。机杂质、无机杂质及残留溶剂。 有关物质有关物质：有机杂质包括工艺中引入的杂质和：有机杂质包括工艺中引入的杂质和 降解产物等，可能是已知的或未知的、挥发性降解产物等，可能是已知的或未知的、挥发性 的或不挥发性的。由于这类杂质的化学结构一的或不挥发性的。由于这类杂质的化学结构一 般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又可般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又可 称之为有关物质。称之为有关物质。 有关物质包括已知杂质和未知杂质。有关物质包括已知杂质和未知杂质。 主要内容主要内容 4 1、杂质检查方法和方法学验证对

3、仿制药的重要、杂质检查方法和方法学验证对仿制药的重要 意义意义 （1）安全性的重要保证）安全性的重要保证 -关注毒性杂质关注毒性杂质 （2）评价仿制药质量是否一致的关健指标之一）评价仿制药质量是否一致的关健指标之一 -仿制药与被仿制药的质量一致仿制药与被仿制药的质量一致 -杂质的种类和数量不高于被仿制药杂质的种类和数量不高于被仿制药 （3）杂质研究的基础）杂质研究的基础 -杂质检查方法不合适或方法学验证不完善，杂质检查方法不合适或方法学验证不完善， 杂质检查不可靠，无法准确评价药品质量杂质检查不可靠，无法准确评价药品质量 一、概述一、概述 5 仿制药与被仿制药一致性要求仿制药与被仿制药一致性要

4、求 药学方面一致（含量、结构、杂质、其它检查项等）药学方面一致（含量、结构、杂质、其它检查项等） 杂质的数量和种类低于被仿制药，否则需要分析杂质杂质的数量和种类低于被仿制药，否则需要分析杂质 的安全性并提供有关数据，必要时应进行相关的安全的安全性并提供有关数据，必要时应进行相关的安全 性试验性试验 建立杂质适宜的杂质检查方法用于判断一致性建立杂质适宜的杂质检查方法用于判断一致性 用于工艺优化、去除杂质、考察稳定性、控制药物质量用于工艺优化、去除杂质、考察稳定性、控制药物质量 一、概述一、概述 6 2、目前国内仿制药研究中杂质检查面临的困难、目前国内仿制药研究中杂质检查面临的困难 -杂质来源不清

5、杂质来源不清 被仿制药和仿制药杂质的种类和数量不清，包括杂被仿制药和仿制药杂质的种类和数量不清，包括杂 质产生或引入过程、降解途径质产生或引入过程、降解途径 -杂质检查方法缺乏针对性杂质检查方法缺乏针对性 不知控制何种杂质以及为何控制，缺乏安全性数据不知控制何种杂质以及为何控制，缺乏安全性数据 的支持的支持 -杂质对照品制备困难（受限于工艺困难），方法杂质对照品制备困难（受限于工艺困难），方法 验证不充分验证不充分 -杂质检查结果难于评价杂质检查结果难于评价 研究基础薄弱，需要提高杂质研究水平，包括杂质研究基础薄弱，需要提高杂质研究水平，包括杂质 检查方法和验证水平，以提高仿制药研制水平检查方

6、法和验证水平，以提高仿制药研制水平 一、概述一、概述 7 例盐酸曲美他嗪片例盐酸曲美他嗪片 进口标准釆用梯度洗脱，对进口标准釆用梯度洗脱，对3种已知杂质、单种已知杂质、单 个未知杂质及总杂质分别进行控制个未知杂质及总杂质分别进行控制 国内仿制釆用等度洗脱，仅对未知杂质（单个国内仿制釆用等度洗脱，仅对未知杂质（单个 杂质和杂质和/或总杂质）进行控制或总杂质）进行控制 国内同品种标准对有关物质的规定：总杂质不国内同品种标准对有关物质的规定：总杂质不 得过得过1.0%。 一、概述一、概述 8 例例BP收载的核黄素磷酸钠杂质检验收载的核黄素磷酸钠杂质检验 -HPLC法法 -已知杂质核黄素：对照品法已知

7、杂质核黄素：对照品法 -其它杂质：相对保留时间加上自身对照的方法其它杂质：相对保留时间加上自身对照的方法 5-单磷酸核黄素的保留时间为单磷酸核黄素的保留时间为20分钟分钟 3，4-二磷酸核黄素大约二磷酸核黄素大约0.2 3，5-二磷酸核黄素大约二磷酸核黄素大约0.3 4，5-二磷酸核黄素大约二磷酸核黄素大约0.5 3-单磷酸核黄素大约单磷酸核黄素大约0.7 4-单磷酸核黄素大约单磷酸核黄素大约0.9 核黄素大约核黄素大约2 -4-单单磷酸核黄素峰与单单磷酸核黄素峰与5-单磷酸核黄素峰的分离度应不小于单磷酸核黄素峰的分离度应不小于1.5 一、概述一、概述 9 3、本讲所依托的主要技术指导原则和技

8、术要求、本讲所依托的主要技术指导原则和技术要求 化学药物杂质研究的技术指导原则化学药物杂质研究的技术指导原则 已有国家标准化学药品研究技术指导原则已有国家标准化学药品研究技术指导原则 过渡期品种集中审评（化学药品）技术要求过渡期品种集中审评（化学药品）技术要求 FDA、ICH的相关指导原则的相关指导原则 -Guidance for Industry,ANDAs:Impurities in Drug Substances,Chemistry,Manufacturing,and Controls Information -ANDAs:Impurities in Drug Products -Q3A

9、(R) -Q3B(R) 一、概述一、概述 10 4、本讲杂质的范围、本讲杂质的范围 有机杂质有机杂质-包括工艺中引入的杂质和降解产物，包括工艺中引入的杂质和降解产物， 化学结构与活性成分的分子式类似或具渊源关化学结构与活性成分的分子式类似或具渊源关 系，通常称为有关物质系，通常称为有关物质 无机杂质无机杂质-产生的无机物产生的无机物 残留溶剂残留溶剂-生产过程中使用的有机溶剂生产过程中使用的有机溶剂 来源来源-工艺杂质、降解产物、从反应物及试剂工艺杂质、降解产物、从反应物及试剂 中混入的杂质（外源性杂质）等中混入的杂质（外源性杂质）等 结构杂质结构杂质-几何异构体、光学异构体、聚合物、几何异构

10、体、光学异构体、聚合物、 其它甾体、其它氨基酸其它甾体、其它氨基酸 一、概述一、概述 11 目的目的 -1、建立杂质检查方法是质控的要求、建立杂质检查方法是质控的要求 包括具体的分析操作方法，以及计算方法，包括具体的分析操作方法，以及计算方法， 限度要求限度要求 -2、用于分析杂质谱、用于分析杂质谱 考察与被仿制药一致性，进而优化制备工艺考察与被仿制药一致性，进而优化制备工艺 及稳定性考察及稳定性考察 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 12 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 13 1、杂质检查方法建立的前提、杂质检查方法建立的前提 -（1）被仿制药杂质谱如何？）被仿制药

11、杂质谱如何？ 参考公开信息：质量标准、说明书、有关文献参考公开信息：质量标准、说明书、有关文献 和专利和专利 -（2）自身杂质谱如何？）自身杂质谱如何？ 理论综合分析、直接测试理论综合分析、直接测试 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 14 英国药典头孢克洛中收载的杂质谱英国药典头孢克洛中收载的杂质谱 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 15 杂质谱分析的一些方法（供参考）杂质谱分析的一些方法（供参考） -分析起始原料中可能存在的杂质分析起始原料中可能存在的杂质 例：盐酸曲美他嗪的合成中哌嗪的控制例：盐酸曲美他嗪的合成中哌嗪的控制 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建

12、立 16 -分析中间体杂质分析中间体杂质 -分析副反应及副反应产物分析副反应及副反应产物 制剂工艺中可能的制剂工艺中可能的Millard反应反应 杂质产生的来源？结构？工艺条件（灭菌温度、杂质产生的来源？结构？工艺条件（灭菌温度、 灭菌时间）的影响？灭菌时间）的影响？ 例：氨甲环酸与葡萄糖例：氨甲环酸与葡萄糖 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 17 -推测降解产物推测降解产物 举例：甘氨酰谷酰胺举例：甘氨酰谷酰胺 降解杂质：环降解杂质：环-（甘氨酰（甘氨酰-谷氨酰胺）和焦谷氨酰胺）和焦 谷氨酸谷氨酸 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 18 研究头孢菌素的降解途径研究，为

13、杂质谱提供研究头孢菌素的降解途径研究，为杂质谱提供 基础基础 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 19 -UV法（法（HPLC-PAD） 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 20 -LC-MS/GC-MS或或CE-MS法法 -HPLC峰保留时间对比法峰保留时间对比法 用于未知杂质或未定性杂质的用于未知杂质或未定性杂质的“标记标记” -其他方法其他方法 杂质研究实例杂质研究实例.DOC 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 21 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 （1）参考被仿制药的方法）参考被仿制药的方法 被仿制药杂质检查方

14、法和限度如何？标准中控制了哪被仿制药杂质检查方法和限度如何？标准中控制了哪 些杂质？些杂质？ 重要参考，为方法建立提供重要的信息，全面考察重要参考，为方法建立提供重要的信息，全面考察 不可简单套不可简单套 -工艺或处方的不同，二者的杂质谱可能不同，被仿制工艺或处方的不同，二者的杂质谱可能不同，被仿制 药杂质检查方法可能不适用药杂质检查方法可能不适用 -被仿制药标闪较低，无杂质检查项或控制较为简单被仿制药标闪较低，无杂质检查项或控制较为简单 -被仿制药的杂质检查方法无法获得被仿制药的杂质检查方法无法获得 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 22 （2）结合杂质理化特点）结合杂质理化特点

15、 根据杂质谱，考虑杂质结构、理化性质根据杂质谱，考虑杂质结构、理化性质 例如：例如： 阿司匹林阿司匹林 比色法比色法游离水杨酸（游离水杨酸（CP2005） 葡萄糖葡萄糖UV法法5-羟甲基糠醛（羟甲基糠醛（CP2005） 氨基酸原料药氨基酸原料药 TLC法法其他氨基酸其他氨基酸 （CP2005） 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 23 （3）结合杂质的毒性特点）结合杂质的毒性特点 安全性控制的需要安全性控制的需要 被仿制药和自身杂质的毒性如何？重视药理毒理及临床安全性被仿制药和自身杂质的毒性如何？重视药理毒理及临床安全性 研究的结果的作用研究的结果的作用 对于有些分子通过以下化学反应

16、可能产生潜在的遗传毒性作用对于有些分子通过以下化学反应可能产生潜在的遗传毒性作用 -烷基化烷基化 -交联交联 -脱嘌呤脱嘌呤 可参考遗传毒性结构库可参考遗传毒性结构库 遗传毒性杂质或具有可能引起遗传毒性的结构（遗传毒性杂质或具有可能引起遗传毒性的结构（alerting stucture）的杂质需要建立灵敏的试验方法）的杂质需要建立灵敏的试验方法 -EMEA遗传毒性杂质限度指导原则遗传毒性杂质限度指导原则：毒理学阈值（：毒理学阈值（TTC） 1.5ug/人人/日日 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 24 (4)考虑不同检查方法的特点考虑不同检查方法的特点 主要是灵敏度和专属性能否符合

17、要求主要是灵敏度和专属性能否符合要求 痕量杂质和遗传毒性杂质的严格控制，对方法痕量杂质和遗传毒性杂质的严格控制，对方法 的要求较高的要求较高 -化学法化学法vsTLC法法vsHPLC法法 -HPLC/MS，HPLC/荧光荧光 CE法可用于微量样品法可用于微量样品 GC适用于挥发性杂质检查适用于挥发性杂质检查 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 25 （5）注意多种方法联用）注意多种方法联用 由杂质多样性复杂性和方法局限性所决定由杂质多样性复杂性和方法局限性所决定 单一方法不能满足多个杂质的检测时，可釆用单一方法不能满足多个杂质的检测时，可釆用 两种或两种以上的方法互为补充，控制杂质两

18、种或两种以上的方法互为补充，控制杂质 -化学法、色谱法、光谱法、生物检定法化学法、色谱法、光谱法、生物检定法 -同一方法釆用不同的测试条件同一方法釆用不同的测试条件 如正相如正相HPLC、反相、反相HPLC、不同流动相的反相、不同流动相的反相HPLC 等等 -分离技术与检测手段联用，较为有效，如分离技术与检测手段联用，较为有效，如HPLC、GC、 LC-MS、HPLC-PDA、CE等等 例：肝素钠中多硫酸软骨素的例：肝素钠中多硫酸软骨素的NMR检查方法检查方法 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 26 （6）综合药学其他研究结果）综合药学其他研究结果 杂质检查与药物外观色泽、含量等项

19、目间存在杂质检查与药物外观色泽、含量等项目间存在 密切联系，如果这些项目发生明显变化，而杂密切联系，如果这些项目发生明显变化，而杂 质基本不变时，应分析原因，关注杂质检查方质基本不变时，应分析原因，关注杂质检查方 法的可行性法的可行性 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 27 例：例：5-羟甲基糠醛的检查方法的综合分析羟甲基糠醛的检查方法的综合分析 -溶液颜色法、紫外法、溶液颜色法、紫外法、HPLC法法 葡萄糖注射液颜色深浅与葡萄糖注射液颜色深浅与5-HMF产生的量有关，产生的量有关， 非葡萄糖注射液变色唯一因素，专属性、准确非葡萄糖注射液变色唯一因素，专属性、准确 性差性差 5-H

20、MF的最大吸收波长为的最大吸收波长为284nm，干扰较少，干扰较少 如果制剂中的主药或辅料在如果制剂中的主药或辅料在284nm有明显的明有明显的明 收，会干扰收，会干扰5-HMF的检查，可釆用的检查，可釆用HPLC法代法代 替替 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 28 3、杂质检查常见方法介绍、杂质检查常见方法介绍 HPLC法法 -考虑被仿制药的色谱条件考虑被仿制药的色谱条件 -参考同类物质质量标准中的杂质检查方法参考同类物质质量标准中的杂质检查方法 -一般选择多种色谱条件一般选择多种色谱条件 反相和正相反相和正相 -方法包括方法包括 固定相、流动相、洗脱方式、波长、测试样品固定相

21、、流动相、洗脱方式、波长、测试样品 的处理、具体操作、计算方法的处理、具体操作、计算方法 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 29 （1）固定相的选择）固定相的选择 -根据待研究的药物的特性选择合适填料的柱子，常根据待研究的药物的特性选择合适填料的柱子，常 用用RP-HPLC，色谱柱多选用，色谱柱多选用C18柱，柱，C8柱、苯基柱、柱、苯基柱、 氨基柱也有使用氨基柱也有使用 -C18柱时，流动相有机溶剂柱时，流动相有机溶剂%通常通常5% -流动相流动相PH值值2-8 PH8，溶解硅胶载体，宜选用耐碱填充剂：包覆聚，溶解硅胶载体，宜选用耐碱填充剂：包覆聚 合物、高纯硅胶为载体并具有高表

22、面覆盖度的键合硅合物、高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅 胶、非硅胶或有机胶、非硅胶或有机-无机杂化填充剂无机杂化填充剂 -PH2，键合相水解脱落，宜选用耐酸填充剂：有，键合相水解脱落，宜选用耐酸填充剂：有 机机-无机杂质填充剂、具有大体积侧链的二异丙基或无机杂质填充剂、具有大体积侧链的二异丙基或 二异丁基取代基取代二异丁基取代基取代C18键合硅胶等键合硅胶等 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 30 l注意不同品牌柱子在耐用性方面的研究：注意不同品牌柱子在耐用性方面的研究： -当杂质峰与主峰的分离情况不十分完美当杂质峰与主峰的分离情况不十分完美 -确定辅料峰的相对保留时间（用

23、于定位扣除确定辅料峰的相对保留时间（用于定位扣除 辅料峰的干扰）辅料峰的干扰） -确定特定杂质的相对保留时间确定特定杂质的相对保留时间 -确定有关物质出峰完毕的保留时间确定有关物质出峰完毕的保留时间 当不同品牌而引起以上各因素不固定时，应当不同品牌而引起以上各因素不固定时，应 在标准中注明品牌。在标准中注明品牌。 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 31 （2）流动相的选择）流动相的选择 l尝试多种流动相尝试多种流动相 l结合杂质的性质结合杂质的性质 -手性杂质手性杂质 -无紫外吸收杂质无紫外吸收杂质 -一般杂质一般杂质 （3）洗脱方式的选择）洗脱方式的选择 等度洗脱等度洗脱 梯度洗

24、脱：极性大的化合物可能被掩盖，极性小梯度洗脱：极性大的化合物可能被掩盖，极性小 的化合物难以被洗脱，甚至保留在柱上，可适用梯度的化合物难以被洗脱，甚至保留在柱上，可适用梯度 洗脱。洗脱。 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 32 梯度洗脱与等度洗脱条件下有关物质的分离情况梯度洗脱与等度洗脱条件下有关物质的分离情况 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 33 （4）波长的选择）波长的选择 -选择的原则是大部分主要杂质与主成分均在此选择的原则是大部分主要杂质与主成分均在此 波长下有吸收波长下有吸收 l二极管阵列方法二极管阵列方法 -无紫外吸收或检测波长处吸收相差较大的多种无紫外吸

25、收或检测波长处吸收相差较大的多种 化合物，有时在单一检测波长处不能检出化合物，有时在单一检测波长处不能检出 -兼顾各杂质吸收情况；特定波长检测特定杂质兼顾各杂质吸收情况；特定波长检测特定杂质 -必要时，改用其他类型检测器必要时，改用其他类型检测器 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 34 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 35 （5）样品的处理和配制）样品的处理和配制 -预处理样品的考虑预处理样品的考虑 l乳膏乳膏 l提取可能导致的杂质漏检和失真提取可能导致的杂质漏检和失真 l衍生化处理导致的杂质丢失衍生化处理导致的杂质丢失 -样品浓度的影响样品浓度的影响 l浓度

26、高利于杂质的检出，但防超载浓度高利于杂质的检出，但防超载 l低浓度样品杂质的检查难题？低浓度样品杂质的检查难题？ 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 36 （6）杂质的定量计算方法）杂质的定量计算方法 -杂质对照品法杂质对照品法 l定量准确，已知杂质，需用杂质对照品定量准确，已知杂质，需用杂质对照品 -校正因子的主成分自身对照法校正因子的主成分自身对照法 l定量准确，已知杂质，无需长期提供对照品定量准确，已知杂质，无需长期提供对照品 -不加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法 l前提是假定杂质与主成分的响应因子基本相同前提是假定杂质与主成分的响应因子基本相同 l有

27、一定误差，可用于未知杂质有一定误差，可用于未知杂质 l已知杂质对主成分的响应因子在已知杂质对主成分的响应因子在0.91.1之间之间 -峰面积归一法峰面积归一法 l简便简便 l因杂质与主成分响应因子不同、线性范围不同、仪器对它们因杂质与主成分响应因子不同、线性范围不同、仪器对它们 的积分精度及准确度不同等因素，有一定的局限性的积分精度及准确度不同等因素，有一定的局限性 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 37 目前定量方法中存在的主要问题目前定量方法中存在的主要问题 -杂质对照品法较少使用杂质对照品法较少使用 -主成分自身对照法较少采用校正因子计算主成分自身对照法较少采用校正因子计算

28、l杂质无法进行归属或杂质对照品无法得到杂质无法进行归属或杂质对照品无法得到 l校正因子无法计算校正因子无法计算 -常见的是对未知杂质，不加校正因子的主成分常见的是对未知杂质，不加校正因子的主成分 自身对照或面积归一化法自身对照或面积归一化法 l无法准确定量无法准确定量 l无法有效检测杂质无法有效检测杂质 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 38 TLC法法 -设备和操作简便，一些特定杂质的检查设备和操作简便，一些特定杂质的检查 -灵敏度较差、定量不够精确，分离度欠佳，有灵敏度较差、定量不够精确，分离度欠佳，有 时无法满足需要时无法满足需要 -仅限于限度检查（半定量），结合不同原理的仅

29、限于限度检查（半定量），结合不同原理的 检视技术能使各杂质斑点均可显示，弥补检视技术能使各杂质斑点均可显示，弥补HPLC 的不足的不足 -需做好系统适用性试验需做好系统适用性试验 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 39 -定量方法定量方法 l限度检查（半定量）限度检查（半定量） l对照品比较法对照品比较法已知杂质，对照品已知杂质，对照品 l自身对照法自身对照法已知杂质、未知杂质，色调一已知杂质、未知杂质，色调一 致致 l检视技术检视技术显色、荧光、自身颜色等显色、荧光、自身颜色等 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 40 lLC-MS/GC-MS/GC-IR/CE-MS法

30、法 -分离技术和鉴别技术联用，为解析化合物的分离技术和鉴别技术联用，为解析化合物的 结构提供直接证据结构提供直接证据 -有助于杂质谱的分析和定性有助于杂质谱的分析和定性 二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立 41 l方法验证的目的方法验证的目的 -考察分析方法是否适用于杂质的检测和定量考察分析方法是否适用于杂质的检测和定量 l方法验证中面临的困难方法验证中面临的困难 -杂质谱不清杂质谱不清 -杂质对照品无法获得杂质对照品无法获得 l验证的具体要求验证的具体要求 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 42 1、专属性、专属性 l指在可能的共存组分存在时，对被分析物准确测定

31、的指在可能的共存组分存在时，对被分析物准确测定的 能力。能力。 l分离度分离度 -专属性指标专属性指标 -杂质谱的明确是基础杂质谱的明确是基础 l杂质可得杂质可得最难分离物质对的分离试验、粗品中间体最难分离物质对的分离试验、粗品中间体 分离试验、辅料与杂质及主成他的分离试验分离试验、辅料与杂质及主成他的分离试验 l杂质不可得杂质不可得强制降解试验、与另一成熟方法比对强制降解试验、与另一成熟方法比对 l峰纯度峰纯度-二极管阵列、质谱；改变流动相比例二极管阵列、质谱；改变流动相比例 l方法不够专属时，应多个方法予以补充方法不够专属时，应多个方法予以补充 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验

32、证的要求 43 降解试验的注意点降解试验的注意点 -降解程度降解程度 -当降解产物、中间体、副产物吸收波长不同当降解产物、中间体、副产物吸收波长不同 时的处理时的处理 -制剂降解破坏制剂降解破坏 -消除辅料的干扰，当无法避开辅料的干扰时消除辅料的干扰，当无法避开辅料的干扰时 应对辅料进行定位予以扣除应对辅料进行定位予以扣除 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 44 l破坏性试验破坏性试验 -酸降解一般釆用酸降解一般釆用0.1mol/L-1mol/L盐酸或硫酸盐酸或硫酸 -碱降解釆用碱降解釆用0.1mol/L-1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 -氧化降解釆用合适的过不去氧化

33、氢溶液氧化降解釆用合适的过不去氧化氢溶液 -必要时可以加热或提高浓度必要时可以加热或提高浓度 -高温试验通常温度高于加速试验温度的高温试验通常温度高于加速试验温度的10，50、 60等等 -对于原料药有时需考虑水溶液或混悬液的降解对于原料药有时需考虑水溶液或混悬液的降解 -考虑在不同考虑在不同PH值条件下的降解值条件下的降解 -光照试验条件可釆用光照试验条件可釆用4500LX 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 45 存在的主要问题：存在的主要问题： -（1）主药完全降解，无法对降解产物进行有）主药完全降解，无法对降解产物进行有 效检测效检测 -（2）由于选择的降解条件强度不

34、够，使药物）由于选择的降解条件强度不够，使药物 未能降解，而误认为药物稳定未能降解，而误认为药物稳定 -（3）不能选择合适测定方法测定降解产物，）不能选择合适测定方法测定降解产物， 使主成分降解后测定的回收量偏低使主成分降解后测定的回收量偏低 -（4）未考虑破坏性试验时产生的聚合物）未考虑破坏性试验时产生的聚合物 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 46 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 47 2、灵敏度、灵敏度 -试样中能被检测（或定量）的最低量。试样中能被检测（或定量）的最低量。 -通常用检测限及定量限表征，可根据直观评通常用检测限及定量限表征，可根据

35、直观评 价、信噪比、响应值的标准差和斜率获得。价、信噪比、响应值的标准差和斜率获得。 -应满足质控需要应满足质控需要 -信噪比的方法信噪比的方法 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 48 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 49 3、精密度、精密度 -在规定的测试条件下，同一个均匀样品经多在规定的测试条件下，同一个均匀样品经多 次取样测定所得结果之间的接近程度次取样测定所得结果之间的接近程度 -重复性、中间精密度、重现性重复性、中间精密度、重现性 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 50 4、准确度、准确度 -测定结果与真实值或参考值接近程

36、度测定结果与真实值或参考值接近程度 -已知杂质：回收率（根据精密度、专属性、已知杂质：回收率（根据精密度、专属性、 线性）推断线性）推断 -未知杂质：与另一成熟方法比对、根据质量未知杂质：与另一成熟方法比对、根据质量 平衡原理结合含量等结果进行粗略判定，必要平衡原理结合含量等结果进行粗略判定，必要 时研究几种不同色谱条件甚至不同测定原理的时研究几种不同色谱条件甚至不同测定原理的 方法进行比较选用方法进行比较选用 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 51 5、线性、线性 -在设计范围内，检测响应值与待测物质量之在设计范围内，检测响应值与待测物质量之 间成正比关系的程度。间成正比

37、关系的程度。 6、 -检测方法能达到一定精密度、准确度和线性检测方法能达到一定精密度、准确度和线性 的高、低浓度或量的区间的高、低浓度或量的区间 -范围应在规定限度的范围应在规定限度的20%间或定量限至限间或定量限至限 度的度的20%间，若含量测定和杂质检查同用一间，若含量测定和杂质检查同用一 套色谱系统，则线性范围应为杂质限度的套色谱系统，则线性范围应为杂质限度的- 20%至含量限度（上限）的至含量限度（上限）的+20%间间 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 52 7、耐用性、耐用性 -指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的

38、承 受程度受程度 -HPLC：流动相的组成比例及：流动相的组成比例及PH值、不同产家或批值、不同产家或批 号的色谱柱、柱效、柱温、流速等及被测溶液的稳定号的色谱柱、柱效、柱温、流速等及被测溶液的稳定 性、样品提取的次数和时间等性、样品提取的次数和时间等 l建议固定上述测定条件的参数，如柱长、填料的粒度、建议固定上述测定条件的参数，如柱长、填料的粒度、 温度、流速，甚至品牌温度、流速，甚至品牌 -TLC：适当改变展开剂比例及：适当改变展开剂比例及PH值，考察耐用性。值，考察耐用性。 如对色谱条件要求苛刻时，规定最难分离物质对试验如对色谱条件要求苛刻时，规定最难分离物质对试验 -较容易忽略较容易忽

39、略 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 53 8、溶液的稳定性考察、溶液的稳定性考察 -一般在常温、常光情况下进行，对同份样品一般在常温、常光情况下进行，对同份样品 溶液进行时间的测定，以杂质量的变化进行考溶液进行时间的测定，以杂质量的变化进行考 查。查。 -光或温度引起，应在标准中说明避光或实验光或温度引起，应在标准中说明避光或实验 温度温度 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 54 9、系统适用性、系统适用性 -理论板数理论板数 -柱拖尾因子柱拖尾因子 -难分离物质对的分离度难分离物质对的分离度 -对照品溶液得复进样的偏差对照品溶液得复进样的偏差 否则，

40、应对色谱系统作必要的调整或更换色谱否则，应对色谱系统作必要的调整或更换色谱 柱柱 杂质检查方法验证实例杂质检查方法验证实例.doc 三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求 55 1、简单套用被仿制药的检查方法，未建立针对、简单套用被仿制药的检查方法，未建立针对 性的方法性的方法 盐酸伪麻黄碱，分别釆用人工合成与植物提取盐酸伪麻黄碱，分别釆用人工合成与植物提取 工艺，有机溶剂残留量、有关物质均不同工艺，有机溶剂残留量、有关物质均不同 2、方法学验证不充分、方法学验证不充分 -如强制降解条件过于剧烈，无法判断主峰与如强制降解条件过于剧烈，无法判断主峰与 降解产物的分离度情况降解产物的

41、分离度情况 -样品经碱解、氧化破坏后主药被完全破坏，样品经碱解、氧化破坏后主药被完全破坏， 无法说明其降解物与主峰的分离情况无法说明其降解物与主峰的分离情况 -调整降解条件的剧烈程度调整降解条件的剧烈程度 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析 56 3、检查方法对杂质的控制不全面，尤其是对毒、检查方法对杂质的控制不全面，尤其是对毒 性杂质性杂质 某药间位和对位异构体的检查某药间位和对位异构体的检查 脂质体溶血磷脂的检查脂质体溶血磷脂的检查 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析 57 案例间位和对位异构体的控制案例间

42、位和对位异构体的控制 合成工艺简介合成工艺简介 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析 58 合成原料中的异构体杂质合成原料中的异构体杂质 产生的杂质产生的杂质 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析 59 以杂质对照品验证以杂质对照品验证HPLC方法的检测能力方法的检测能力 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析 60 建议的质量保证策略建议的质量保证策略 过程控制：控制合成原料的纯度过程控制：控制合成原料的纯度 终产品控制：检查终产品残留的结构异构体终产品控制：检查终产品残留的

43、结构异构体 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析 61 脂质体溶血磷脂的检查脂质体溶血磷脂的检查 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析 62 4、方法灵敏度不够、方法灵敏度不够 -有关物质检查法的定量限为有关物质检查法的定量限为0.75ng，标准规，标准规 定杂质限度不得过定杂质限度不得过1.0%，折算为，折算为0.5ng，表明，表明 此方法不能有效检测产品杂质，需重新建立有此方法不能有效检测产品杂质，需重新建立有 效的杂质检测方法效的杂质检测方法 5、方法缺乏互补性、方法缺乏互补性 -合成中重要中间体检测波长处无

44、吸收，建立合成中重要中间体检测波长处无吸收，建立 的有关物质检查方法无法检测该物质的有关物质检查方法无法检测该物质 -建立该中间体适宜的要检测方法建立该中间体适宜的要检测方法 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析 63 6、积分时间不充分，不能有效检出杂质、积分时间不充分，不能有效检出杂质 -氧化破坏试验中，主峰保留时间的氧化破坏试验中，主峰保留时间的3倍处，仍倍处，仍 有降解物峰出现，色谱图记录至有降解物峰出现，色谱图记录至2倍，不能有倍，不能有 效检出有关物质效检出有关物质 -改进改进 7、检测波长缺乏针对性、检测波长缺乏针对性 -220nm附近的吸收强度远高于附近的吸收强度远高于278nm波长处波长处 -提供检测波长选择依据提供检测波长选择依据 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方