突变位点的检测PPT学习教案

1、会计学1突变位点的检测突变位点的检测第1页/共25页遗传标记遗传标记DNA遗传标记遗传标记基因突变基因突变SNPSNP检测技术检测技术第2页/共25页第3页/共25页第4页/共25页第5页/共25页某个个体基因型的实验。某个个体基因型的实验。n等位位点等位位点（P66）：）：指染色体指染色体DNA同一位置上的每个同一位置上的每个碱基类型碱基类型。第6页/共25页遗传标记遗传标记DNA遗传标记遗传标记基因突变基因突变SNPSNP检测技术检测技术第7页/共25页neg. 复制型转座子）。复制型转座子）。第8页/共25页第9页/共25页遗传标记遗传标记DNA遗传标记遗传标记基因突变基因突变SNPSN

2、P检测技术检测技术第10页/共25页第11页/共25页第12页/共25页遗传标记遗传标记DNA遗传标记遗传标记基因突变基因突变SNPSNP检测技术检测技术第13页/共25页 限制性酶切片段长度多态性分析限制性酶切片段长度多态性分析-RFLP 单链构象多态性分析单链构象多态性分析-SSCP 毛细管电泳毛细管电泳 变性高效液相色谱变性高效液相色谱-DHPLC 异源双链分析异源双链分析-HA 变性梯度凝胶电泳分析变性梯度凝胶电泳分析-DGGE DNA芯片技术芯片技术-DNA chip 实时荧光实时荧光PCR分析分析 直接序列测定，直接序列测定， PCR第14页/共25页第15页/共25页突变位点的检

3、测技术突变位点的检测技术 单链构象多态性单链构象多态性（SSCP）：）： 是一种基于单链是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法。相同长度的单链构象差别的点突变检测方法。相同长度的单链DNA如果顺序不同，甚至单个碱基不同，就会形成不同的构象，在电如果顺序不同，甚至单个碱基不同，就会形成不同的构象，在电泳时泳动的速度不同。将泳时泳动的速度不同。将PCR产物经变性后，进行产物经变性后，进行单链单链DNA凝胶电泳凝胶电泳时，靶时，靶DNA中若发生单个碱基替换等改变时，就会出现泳动变位。中若发生单个碱基替换等改变时，就会出现泳动变位。 优点：简单快速，价廉，特别适合大样本的筛选；用优点：简单快速，

4、价廉，特别适合大样本的筛选；用SSCP法检测小法检测小于于200bp的的PCR产物时，检出率可达产物时，检出率可达70-95。 缺点：存在假阳性和假阴性；检测效果受凝胶交联度、电泳温度、缺点：存在假阳性和假阴性；检测效果受凝胶交联度、电泳温度、片断长度等条件影响，当片段大于片断长度等条件影响，当片段大于400bp时，检出率仅为时，检出率仅为50左右；左右；同时该法不能测定突变的准确位点，还需通过序列分析来确定。同时该法不能测定突变的准确位点，还需通过序列分析来确定。第16页/共25页第17页/共25页第18页/共25页第19页/共25页第20页/共25页思考思考 简述简述DNA遗传标记的种类？

5、遗传标记的种类？第21页/共25页第22页/共25页 变性高效液相色谱检测变性高效液相色谱检测（DHPLC） 原理：含有突变位点的原理：含有突变位点的PCR 扩增产物经变性、退火，将形成同源和扩增产物经变性、退火，将形成同源和异异源双链两种源双链两种DNA 分子。在部分变性条件下，发生错配的异源双链分子。在部分变性条件下，发生错配的异源双链DNA 更更易于解链为单链易于解链为单链DNA，与，与DNASep 柱结合力降低，比同源双链柱结合力降低，比同源双链DNA 分分子更易于被乙腈洗脱下来，从而与同源双链子更易于被乙腈洗脱下来，从而与同源双链DNA 分离。分离。 优点：分离优点：分离DNA分子快

6、速，操作自动化、简便，经济；分子快速，操作自动化、简便，经济； PCR产物无产物无须须进行纯化处理即可用于突变检测；能准确测定进行纯化处理即可用于突变检测；能准确测定DNA片段大小，基因突变片段大小，基因突变检检出率高（达出率高（达95-100%） 。 缺点：缺点： DHPLC 检测的灵敏性、特异性受检测的灵敏性、特异性受PCR引物、引物、PCR 体系及反体系及反应条件、检测温度、应条件、检测温度、DNASep柱质量以及流动相梯度等多重影响。柱质量以及流动相梯度等多重影响。第23页/共25页 蛋白截断技术蛋白截断技术（PTT） 由于基因的非缺失型突变多可能造成翻译过程的提前终止由于基因的非缺失

7、型突变多可能造成翻译过程的提前终止(突出表现突出表现为点突变形成终止密码子为点突变形成终止密码子)，其蛋白质产物为截短肽链；在，其蛋白质产物为截短肽链；在SDS-聚丙烯聚丙烯酰胺凝胶电泳，这种突变杂合子电泳显示有两条带为全长肽链和截短的酰胺凝胶电泳，这种突变杂合子电泳显示有两条带为全长肽链和截短的肽链。肽链。 优点：从蛋白水平上检测基因突变；对检测长片段缺失或插入引起的优点：从蛋白水平上检测基因突变；对检测长片段缺失或插入引起的移码突变有相当的敏感性；单次分析的基因片段可达移码突变有相当的敏感性；单次分析的基因片段可达2kb；研究报道显示；研究报道显示基因突变检出率达基因突变检出率达90以上。以上。 缺点：缺点： 主要检测由于导致主要检测由于导致ORF改变的突变；且该技术要求检测的标改变的突变；且该技术要求检测的标本来自活检组织，或抽提本来自活检组织，或抽提RNA获得目的基因的获得目的基