测定蛋白质含量测定方法的比较研究指导

1、蛋白质含量测定方法的比较研究刘晓庚(南京财经大学食品科学与工程学院 江苏 南京 210003)摘 要：索氏法。关键词：soxhlet法写作提纲0 前言。1 测定蛋白质方法分类和文献分析概况。1.1 测定蛋白质方法分类。1.2 蛋白质方法测定的文献概况及分析。2 蛋白质测定的经典方法。2.1蛋白质测定的经典方法分类。2.2蛋白质测定的经典方法研究进程或发展历史。2.3蛋白质测定的经典方法局限性及改良策略。3 蛋白质测定的现代方法。3.1蛋白质测定的现代方法分类。3.2蛋白质测定的现代方法优点。3.3蛋白质测定的现代方法研究进程或发展历史蛋白质测定的经典方法局限性及改良策略。3.4蛋白质测定的现代

2、方法的局限性及改良策略。4 结束语。5 参考文献:1 林萍,李蕾. 联立方程紫外分光光度法测定碘苯甲酸涂剂中苯甲酸、水杨酸的含量j.华西药学杂志,1999,14(4):278279蛋白质测定方法法的比较研究的写作要求是：1、内容的选取应围绕文章的中心。2、阐述一定要用自己的语言来进行表述，切忌照搬照抄。3、小标题也可以根据你的选材来自拟。4、对每种方法可以从原理、特点（含优点）、存在的不足、应用实例或应用的实际效果分析、文献来源，以及分析分析评论等方面进行归纳总结。形式可以是表格式、文字式或图文并茂式等，要不拘一格采用多种形式。如下表方式也可尝试。表2 光催化氧化剂的主要制备方法的比较 tab

3、le 2 compare of primary preparation methods of photocatalysts方法名称原理 优点/技术关键缺点适用范围实例与文献来源液相法溶胶-凝胶法制备温度低，容易控制，纯度高，成分均匀，分散性好，副反应少，操作简单，成本低廉等；在制备溶胶过程中，由于钛醇盐水解反应速度很快，所以一般需加抑制剂来减缓其水解速度，常用的抑制剂有盐酸、氨水和硝酸等效率低、生产自动化程度不高、质量控制较困难见文献29-31液相沉淀法设备简单、工艺过程容易控制、成本较低等；国伟林等32利用超声化学效应，用钛醇盐水解沉淀法得到单分散性较好的锐钛矿型纳米二氧化钛工艺流程长、废液

4、多、产物损失较大见文献33水热法粒子纯度高、分散性好、晶形好且可控制，生产成本低；通过光催化降解品红的实验证明，微波水热条件下制备的催化剂具有较高的光催化性能反应环境要求较高见文献34气相法气相沉积法沉积温度低，均匀性和重复性较好，纯度高，组分易控制，颗粒尺寸小、团聚少等；注意控制温度要求设备要求很高，温度控制要求高，成本比较高合成了氮化钼的纤维棒和中空管,同时得到了一些新的相43气相水解法纯度高，自动化程度高，粒径小，分散性好，表面活性高等；注意水蒸气浓度的影响设备要求高，工艺参数的控制要求很精确见文献35注：。5、文章的排版格式要按范文执行。特别是要注意参考文献的标注。详细内容，请参见附件

5、。有问题随时反映，我会及时告知。最后，愿你能出色地早日完成。谢谢合作！刘晓庚老师201343附文献：实验16蛋白质含量测定一、folin酚法(一)目的了解用folin酚法测定蛋白质的含量。(二)材料用具及仪器药品植物721型分光光度计、吸管、试管、试管架、容量瓶、移液管标准酪蛋白质溶液：称取结晶酪蛋白100mg，用少量0.5mol/lnaoh溶液湿润溶解，加蒸馏水定容至100ml，则配成1mg/ml的标准酪蛋白溶液。folin酚试剂的配制：试剂a：1gna2co3溶于50ml的0.1mol/lnaoh溶液，另将0.5gcuso45h2o溶于100ml的1%酒石酸钾(或酒石酸钠)溶液，实验时按前

6、者：后者=50：1的比例混合，此混合液最多只能用一天。试剂b：将100g钨酸钠(na2wo42h2o)，25g钼酸钠(na2moo42h2o)、700ml蒸馏水、再加50ml85%磷酸及100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液体溴数滴，开口煮沸15分钟，驱除过量的溴(在通风橱内进行)，冷却，用蒸馏水稀释至1000ml，过滤，滤液呈现微绿色，贮于棕色瓶中，临用前，用酚酞作指示剂，用标准naoh溶液滴定，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/l酸度，备用。(三)原理folin酚法所用的试剂是由两部分组成

7、的，试剂a相当于双缩脲试剂，可与蛋白质中的肽键起显色反应，试剂b(磷钨酸和磷钼酸混合液)在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝混合物)。在一定条件下，蓝色强度与蛋白质的量成正比。(四)方法步骤1. 绘制标准曲线用标准酪蛋白溶液配制成浓度分别为：0、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20mg/ml的系列标准溶液各10ml,将试管编号，依次向各管中加入上述蛋白质溶液0.5ml和folin酚试剂a4ml，摇匀，室温放置10分钟后，再加入folin酚试剂b0.5ml,30分钟后在分光光度计650nm波长下比色，测定od值，以蛋白质含量为横坐标，光刻度值为纵坐标作光刻

8、度一蛋白质浓度曲线。2. 样品测定：准确吸取样液0.5ml于试管内，加试剂a、b及比色等操作步骤同标准曲线操作，测出其od值。3. 计算用下式进行计算：蛋白质含量(mg/ml)=dn/v式中：d为标准曲线上查出的蛋白质含量(mg/ml)；n为稀释倍数；v为蛋白质溶液的体积(ml)。(五)实验报告计算所测材料的蛋白质含量。(六)思考题试说明folin酚法测定蛋白质含量有什么优缺点。实验19 植物组织中可溶性蛋白质含量的测定第法 考马斯亮蓝g250染色法一、原理考马斯亮蓝g250(coomassiebrilliantblue，g-250)法是利用蛋白质染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速

9、、灵敏的方法。考马斯亮蓝g-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。它和蛋白质通过范德瓦尔键结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律。此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式转变成蓝色形式，最大光吸收由465nm变成595nm，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。蛋白质和染料结合是一个很快的过程，约2min即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定1h，之后，蛋白质染料复合物发生聚合并沉淀出来。此法灵敏度高(比lowry法灵敏4倍)，易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法。其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。二、实

10、验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料植物材料。(二)试剂1.标准蛋白质溶液(100g/ml牛血清白蛋白)：称取牛血清蛋白25mg，加水溶解并定容至100ml，吸取上述溶液40ml，用蒸馏水稀释至100ml即可。2.考马斯亮蓝试剂：称取100mg考马斯亮蓝g-250，溶于50ml90%乙醇中，加入100ml 85%(w/v)的磷酸，再用蒸馏水定容到1000ml，贮于棕色瓶中。常温下可保存一个月。(三)仪器设备分光光度计，离心机，研钵，烧杯，量瓶，移液管，试管等。三、实验步骤1.标准曲线的绘制取6支试管，按表191加入试剂，摇匀，向各管中加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5min左右，以0号试

11、管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度。以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。2.样品测定(1)样品提取称取鲜样0.250.5g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000 r/min离心10min，上清液备用。(2)吸取样品提取液1.0ml(视蛋白质含量适当稀释)，放入试管中(每个样品重复2次)，加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。表19-1绘制标准曲线的各试剂加入量试剂管号012345标准蛋白质(ml)00.200.400.600.801.00蒸馏水量(ml)1.000.800.600.400.20

12、0蛋白质含量(g)020406080100四、结果计算样品中蛋白质的含量= (mg/g)式中：c查标准曲线值，g；vt提取液总体积，ml；wf样品鲜重，g；vs测定时加样量，ml。第法 lowry法(劳里法)一、原理lowry法是双缩脲法(biuret)和斐林(folin)酚法的结合与发展，其原理是：蛋白质溶液用碱性铜溶液处理后，碱性铜试剂与蛋白质中的肽键作用产生双缩脲反应，形成铜蛋白质的络合盐。再加入酚试剂后，在碱性条件下，这种被作用的蛋白质上的酚类基团极不稳定，很容易还原酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸，使之生成磷钨蓝和磷钼蓝的混合物。这种溶液蓝色的深浅与蛋白的含量成正相关，所以可以用于蛋白质含量

13、的测定。lowry法除使肽链中络氨酸、色氨酸和半胱氨酸等显色外，还使双缩脲法中肽键的显色效果更强烈，其显色效果比单独使用酚试剂强315倍，约是双缩脲法的100倍。由于肽键显色效果增强，从而减少了因蛋白质种类引起的偏差。lowry法适于微量蛋白的测定，对多个样品同时测定较为方便。但对于不溶性蛋白和膜结合蛋白必须进行预处理(如加入少量的sds)。1. 双缩脲法的原理双缩脲(nh2conhconh2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物，这一反应称为双缩脲反应。因为蛋白质中有多个肽键，也能与铜离子发生双缩脲反应，且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律，而与蛋白质的氨基酸组成及分子

14、量无关，所以可用双缩脲法测定蛋白质的含量。双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。且使用试剂价廉易得，操作简便，可测定的范围为110mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双缩脲法的缺点是灵敏度差、所需样品量大。干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如tris缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。2. 斐林(folin)酚法的原理该方法是双缩脲法的发展，包括两步反应：第一步是在碱性条件下，与铜试剂作用生成蛋白质铜络合物；第二步是此络合物将磷钼酸、磷钨酸试剂还原，生成磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色

15、混合物，颜色深浅与蛋白含量成正相关。在650nm时比色测定的灵敏度比双缩脲法高100倍。反应约在15min内有最大显色，并至少可稳定几小时。此法也适用于测定酪氨酸、色氨酸含量。此法的优点是操作简单，迅速，不需特殊仪器设备，灵敏度高。其不足之处是此反应受多种因素干扰。在测试时应排除干扰因素或做空白试验消除。二、试剂与仪器设备(一)试剂na2wo42h2o，na2moo42h2o，85%h3po4，浓hcl，li2so4h2o，溴水，酚酞指示剂，na2co3，naoh，cuso45h2o，酒石酸钾钠，牛血清白蛋白。1. 碱性铜试剂(相当于双缩脲试剂)的制备首先配制a液：4%碳酸钠(na2co3)溶

16、液与0.2 mol/l氢氧化钠(naoh)溶液等比例混合(2%na2co3，0.1molnaoh)；b液：1%硫酸铜(cuso45h2o)溶液与2%酒石酸钾钠溶液等比例混合(0.5%cuso45h2o，0.1%酒石酸钾钠)。在使用前将a液与b液按501的比例混合即成。此为folin-酚试剂甲液，此试剂只能使用1天。2. 酚试剂(相当于folin试剂)的制备称取钨酸钠(na2wo42h2o)100g，钼酸钠(na2moo42h2o)25g，加蒸馏水700ml溶解于1500ml的圆底烧瓶中。之后加入85%的h3po4 50ml，浓hcl 100ml，安上回流装置(使用磨口接头，若用软木塞或橡皮塞时

17、，就必须用锡铂纸包起来)，使其慢慢沸腾10h。冷却后加入硫酸锂(li2so4h2o)150g，水50ml，溴水23滴，不用回流装置开口煮沸15min，以逐出过量的溴。待冷却后稀释至1000ml，并过滤入棕色瓶中，密闭于冰箱中保存(冷却后溶液呈黄色，倘若仍呈绿色，须再滴加数滴液体溴，继续煮沸15min)。使用时用标准naoh溶液滴定，以酚酞作为指示剂，滴定终点由蓝变灰。滴定后算出酸的浓度。使用时大约加水1倍，使最终浓度相当于1mol/l h+酸，此为folin酚试剂乙液(folin试剂)。在测定时要注意，因为酚试剂仅在酸性条件下稳定，但此实验的反应只在ph10的情况下发生，所以当加酚试剂时，必须

18、立即混匀，以便在磷钼酸磷钨酸试剂被破坏前即能发生还原反应，否则会使显色程度减弱。3. 标准蛋白质溶液的配制称取25mg牛血清白蛋白，溶于100ml蒸馏水中，使终浓度为250 g/ml。(二)仪器设备试管，移液管，定量加样器，圆底烧瓶，冷凝管1套(带橡胶管)，微量滴定管，小烧杯，微量进样器50l 1支，分光光度计，恒温水浴器，研钵，玻棒，离心机，离心管。三、实验步骤1.标准曲线的绘制(1)取7支试管，编号后，分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml标准蛋白质溶液，用蒸馏水补足1ml，使每管含蛋白量分别为0、25、50、100、150、200、250g(必要时可做重复)。(2

19、)在每支试管中用定量加样器加入5ml甲液，混匀，于30下放置10min。(3)在每支试管中喷射加入0.5ml乙液，立即振荡混匀，在30下保温30min。(4)准确到30min后，以不加标准蛋白试管中的溶液为空白，在500nm下用1cm光径的比色杯对系列标准蛋白溶液进行比色，测定光密度值。以蛋白浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。2.样品的测定(1)样品的提取与考马斯亮蓝g-250法相同。取1.0ml(视蛋白质含量适当稀释)样液加入试管中，然后重复步骤1的(2)(4)，以标准曲线中的0管为空白，测定吸光值。(2)根据光密度值查标准曲线，求出比色液中的蛋白质含量。四、结果计算样品中蛋白质

20、的含量= (mg/g)式中：c查标准曲线值，g；vt提取液总体积，ml；wf样品鲜重，g；vs测定时加样量，ml。注意：还原物质，其他酚类物质及柠檬酸对此反应有干扰。第法 紫外吸收法一、原理由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值(a280)与其含量呈正比关系，可用作定量测定。利用紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，在蛋白质和酶的生化制备中(特别是在柱层析分离中)广泛应用。此法的缺点是：(1)对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量

21、差异较大的蛋白质，有一定的误差；(2)若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。不同的蛋白质和核酸的紫外线吸收是不相同的，即使经过校正，测定结果也还存在一定的误差。但可作为初步定量的依据。二、试剂与仪器设备(一)试剂0.1mol/l ph7.0磷酸缓冲液。蛋白质标准溶液：准确称取经微量凯氏定氮法校正的标准蛋白质，配制成浓度为1mg/ml的溶液。(二)仪器设备紫外分光光度计，离心机，刻度移液管。三、实验步骤1. 标准曲线法(1)标准曲线的绘制取8支试管，按表192分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。选用光程1cm的石英比色杯，在280nm波长处分别测定各管溶液的a280值。以a2

22、80值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标,绘制标准曲线。表192 绘制标准曲线各试剂加入量试剂管号12345678标准蛋白质溶液(ml)00.51.01.52.02.53.04.0蒸馏水(ml)4.03.53.02.52.01.51.00蛋白质浓度(mg/ml)00.1250.2500.3750.5000.6250.7501.00(2)样品测定样品提取与考马斯亮蓝g-250法相同。取待测蛋白质溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，按上述方法在280nm波长处测定光吸收并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。2. 其他方法(1)取适量的样品提取液，根据蛋白质浓度，用0.1mol/l ph7.0磷酸缓冲液适当

23、稀释后，用紫外分光光度计分别在280nm和260nm波长下读取吸光度，以ph7.0磷酸缓冲液为空白调零。3. 计算：蛋白质浓度=1.45a2800.74a260(mg/ml)式中：1.45和0.74校正值；a280蛋白质溶液在280nm处的吸光度；a260蛋白质溶液在260nm处的吸光度。此外，也可先计算出a280/a260的比值后，从表193中查出校正因子“f”值，同时可查出样品中混杂的核酸的百分含量，将“f”值代入，再由下述经验公式直接计算出该溶液的蛋白质浓度。表193 紫外吸收法测定蛋白质含量的校正因子a280/a260核酸(%)因子(f)a280/a260核酸(%)因子(f)1.750

24、.001.1160.8465.500.6561.630.251.0810.8226.000.6321.520.501.0540.8046.500.6071.400.751.0230.7847.000.5851.361.000.9940.7677.500.5651.301.250.9700.7538.000.5451.251.500.9440.7309.000.5081.162.000.8990.70510.000.4781.092.500.8520.67112.000.4221.033.000.8140.64414.000.3770.9793.500.7760.61517.000.3220.9

25、394.000.7430.59520.000.2780.8745.000.682注：一般纯蛋白质的光吸收比值(a280/a260)约为1.8，而纯核酸的比值约为0.5。蛋白质浓度(mg/ml)= fa280n式中：f校正因子；a280该溶液在280nm下测得的光吸收值；n溶液的稀释倍数。(2)对于稀蛋白质溶液，还可用215nm和225nm的吸收差来测定浓度。从吸收差(a)与蛋白质含量的标准曲线即可求出浓度。a=a215a225式中：a215、a225分别是蛋白质溶液在215nm和225nm波长下测得的光吸收值。此法在蛋白质含量达20100 g/ml的范围内，是服从beer定律的。氯化钠、硫酸铵

26、以及0.1mol/l磷酸、硼酸和三羟甲基氨基甲烷等缓冲液都无显著干扰作用。但是0.1mol/l乙酸、琥珀酸、邻苯二甲酸以及巴比妥等缓冲液在215nm波长下的吸收较大，不能应用，必须降至0.005mol/l才无显著影响。由于蛋白质的紫外吸收高峰常因ph的改变而有高低，故应用紫外吸收法时要注意溶液的ph，最好与标准曲线制订时的ph一致。(3)如果已知某一蛋白质在280nm波长处的吸收值，则取该蛋白质溶液于280nm处测定光吸收值后，便可直接求出蛋白质的浓度。思考题1. 测定植物体内可溶性蛋白质含量有什么意义和用途？试举二例说明。2. 三种测定方法各有何优缺点？在实验中如何选择合适的方法并克服其缺点

27、？3. 斐林酚试剂法测定蛋白质含量的原理是什么？测定中应注意什么问题？测定蛋白质含量之常规方法介绍一、微量凯氏(kjeldahl)定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨(消化)，氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh + 3h2so4 2co2 + 3so2 + 4h2o + nh3 (1)2nh3 + h2so4 (nh4)2so4 (2)(nh4)2so4 + 2naoh 2h2o + na2so4 + 2nh3 (3)反应(1)、(2)在凯氏瓶内完成

28、，反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6.25即得。二、双缩脲法(biuret法)(一)实验原理双缩脲(nh3conhconh3)是两个分子脲经180左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲

29、反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为110 mg蛋白质。干扰此测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。(二)试剂与器材1.试剂(1)标准蛋白质溶液用标准的结晶牛血清清蛋白(bsa)或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1 mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算

30、出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用h2o 或0.9%nacl配制，酪蛋白用0.05mol/l naoh配制。(2)双缩脲试剂称以1.50 g硫酸铜(cuso45h2o)和6.0 g酒石酸钾钠(knac4h4o64h2o)，用500ml水溶解，在搅拌下加入300ml 10% naoh溶液，用水稀释到1 l，贮存于塑料瓶中(或内壁涂以石蜡的瓶中)。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。2.器材可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。(三)操作方法1.标准曲线的测定取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml的

31、标准蛋白质溶液，用水补足到1ml，然后加入4ml双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温(2025)下放置30 min，于540 nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。2.样品的测定取23支试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度10 mg/ml。三、folin-酚试剂法(lowry法)(一)实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购)，近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是

32、加入了第二种试剂，即folin-酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。folin-酚试剂中的磷钼酸盐-磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。folin-酚试剂法最早由lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。该法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰

33、lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素(0.5%)，硫酸纳(1%)，硝酸纳(1%)，三氯乙酸(0.5%)，乙醇(5%)，乙醚(5%)，丙酮(0.5%)等溶液对显色无影响，但这些物质浓度高时，必须作校正曲线。含硫酸铵的溶液，只须加浓碳酸钠-氢氧化钠溶液，即可显色测定。若样品酸度较高，显色后会色浅，则必须提高碳酸钠-氢氧化钠溶液的浓度12倍。进行测定时，加folin-酚试剂时要特别小心，因为该试剂仅在酸性ph条件下稳定，但上述还原反应只在ph=10的情况下发生，故当folin-酚试剂加到碱性的铜-蛋白质溶液

34、中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏之前，还原反应即能发生。此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。此法可检测的最低蛋白质量达5 mg。通常测定范围是20250 mg。文献计量分析揭示我国番茄红素研究现状潘艺元,凌日云,陈全斌 (广西师范大学环境与资源学院, 广西 桂林 541004)潘艺元,凌日云,陈全斌. 文献计量分析揭示我国番茄红素研究现状j.广西轻工业.2006(5):46-47摘要 采用文献计量学的方法，对我国近30年来在学术期刊上发表的番茄红素研究文献进行统计分析，对我国番茄红素研究文献类型、年代分布及研究内容等方面进行计量分析，从而揭示我国对番茄红素研究的现状和发展趋

35、势。关键词 番茄红素；文献；计量分析番茄 (lycopersicon esculentum mill )又名西红柿、番柿、洋柿子等，原产于南美西部高原，属喜温性蔬菜。它既可作菜熟食，又可当作水果生吃，味道甜中微酸，望之生津止渴，食之沁人脾胃，是我国人民普遍喜食的蔬菜之一1-2。番茄成分很多，如番茄红素、糖、维生素a、b、c、d以及有机酸和酶等。最近几年番茄红素(lycopene )引起了人们越来越多的兴趣。番茄红素最早从番茄中提取出来，是一类非常重要的类胡萝卜素，主要存在于番茄、南瓜、西瓜、柿子、桃、芒果、葡萄、草莓、柑桔等果实中。研究发现，番茄红素具有优越的生理活性，可高效猝灭单线态氧、清除

36、自由基、防止脂质过氧化、保护机体免受损伤，其抗氧化性在类胡萝卜素物质中最强。它不仅具有抗癌防癌，预防心脑血管疾病、防止动脉硬化、抗肿瘤等功效，还可增强人体免疫力以及延缓衰老。笔者对我国近年出版的研究番茄红素的文献，就其类型、年限分布、刊物分布等方面进行计量分析。目的是通过分析番茄红素的研究文献状况，了解我国番茄红素研究的主要特点和所处现状。1 文献收集有关番茄红素的文献是在2006年2月在清华同方中国期刊全文数据库以“番茄红素”为篇名检索所得。这些文献反映了我国2005年以前番茄红素研究的主要成就，其内容包括综合论述、基础研究、提取制备研究、药理研究、分析测定、开发应用。2 文献分析2.1 番

37、茄红素研究总文献量的分析剔除非学术性论文，共收集1975年以来的中文期刊上有关番茄红素的文献284篇，年平均文献量为10.9篇，对其所涉及的学科分别进行了统计。由表1看出，基础、药理研究及制取工艺研究文献所占比例较为均衡，分别为 22.54%、18.66%、24.30%，它们在番茄红素研究中占了主要地位。基础研究的侧重点在生物学，文献量占基础研究文献量的48.4%。对番茄红素的稳定性研究的文献也较多，文献量占基础研究文献量的32.8%，为番茄红素的应用打下了良好的基础。表1 番茄红素文献在各学科中的分布研究方向各项数据基础研究药理研究制取工艺分析测定产品开发综述总计生物学稳定性其他抗氧化抗癌其

38、他植物提取人工合成分支学科文献量/篇312112201320609-文献量/篇645369261458284分支占该和48.432.819.837.724.837.786.913.1-各科占总文献%22.5418.8824.309.154.9320.42100在提取制备工艺研究中，侧重于从果实提取，多数研究有关提取效率的影响因素，如温度、溶剂用量、提取时间等。在提取方法上，酶法提取法3、超临界二氧化碳萃取法4-7、微波辐射萃取法8、超声波萃取法9等提取工艺是近几年发展起来的，从文献内容看，这几种新提取工艺已运用到番茄红素的提取中，随着技术的不断发展，预计它们将取代传统提取工艺，使提取效率达到更

39、高的水平。人工合成番茄红素的研究文献很少，仅9 篇。2.2 番茄红素研究文献的年限分布表2显示，80年代前共发表番茄红素12篇，占总文献量的4.23%，主要研究方向是基础研究；90年代共发表20篇，占总文献量的7.04%，主要研究提取制备工艺；进入21世纪后，文献量逐年增加，尤其是近3年，文献量呈直线上升趋势。仅2000-2005年就发表文献252篇，占总文献量的88.73%，为80年代的21倍多，内容侧重于药理研究与提取制备的新工艺研究。究其原因，人们对番茄红素的保健功能得到了进一步的论证，尤其是抗癌防癌作用日益被国内外所认识并开始得到广泛研究和开发。表2 番茄红素研究文献的年限分布1975

40、-1989年1990-1999年2000-2005年文献数(篇)占年代段百分比(%)文献数(篇)占年代段百分比(%)文献数(篇)占年代段百分比(%)基础研究541.67420.05722.62药理研究-15.05220.63制取工艺-525.06224.60分析测定65015.0197.55产品开发18.3315.0124.76综述-35.05019.84总文献量1220252占总文献%4.237.0488.732.3 番茄红素文献的主要期刊刊载番茄红素文献的期刊共151种，表3列出了番茄红素文献在期刊中的分布情况，表4列出了14种刊载番茄红素文献的期刊。由表3、表4看出，番茄红素文献的离散性

41、较大，刊载番茄红素文献的离散性较大，刊载番茄红素文献2篇以上的期刊有43种，占期刊总数28.48%，文献量为176，占总文献量的61.97%，这说明番茄红素文献大体集中在43种期刊中。从表 3 还可看出，番茄红素的文献主要分布在食品行业与医学保健的期刊上。分析其原因，随着社会高节奏的发展和人民生活水平的提高人类的疾病谱正在发生改变，现代文明病，亚健康状态等慢性疾病逐渐上升；与此相适应，富养生、预防、治疗、医学保健于一体的医疗模式已成为人们的主导观念，进一步影响人们的饮食观念。表3 番茄红素文献期刊的集中与离散刊载文献量(篇)12346822总计期刊总数1083265151文献量(篇)10872

42、3173284占总文献量%38.0325.3510.9225.70100.03 我国番茄红素研究的特点3.1 研究起步晚，近几年发展迅速受社会环境及技术条件的影响，我国对番茄红素的研究起步较晚，6090年代，我国番茄红素的研究文献量呈波动变化，进入21世纪，文献量直线上升。3.2 番茄红素应用价值高，研究内容广对番茄红素的研究，涉及多方面的学科，由表1看出，有物理、化学、生物、分析学等。研究内容广泛，项目繁多，含基础性、提取制备工艺、药理、分析及测定研究等内容。但从文献的内容看，基础性研究、药理研究及提取工艺研究居多，且内容还停留在浅层面上，因此往后的研究应注意扩展到其他领域，同时对各个领域进

43、行深入研究。3.3 研究领域发展不平衡，各个领域内的分支发展不协调由表4看出，提取制备工艺研究最多，其中主要是从植物体中提取，成分合成的研究较少，因此该方面的研究还可进一步发展。而对不同品种番茄及其他植物所含番茄红素的量、不同气候下生长及不同成长阶段的番茄所含的番茄红素量的研究也较少。在应用研究中，更多的内容是对前人成果的总结，实际应用番茄红素开发产品的文献很少，特别是利用其保健功能开发药品和营养补充剂，该领域有待开发。表4 番茄红素文献在主要期刊中的分布期年 刊代中国食品添加剂食品研究与开发食品与机械食品科学食品科技食品工业科技食品与发酵工业中国公共卫生国外医学卫生学卫生研究中国临床康复园艺

44、学报浙江大学学报中国蔬菜1975-1989年-12-2-121990-2000年2-1-4-2-1-2001-2005年16551561058255311总计1856156102284753334 小结和建议通过对上述番茄红素文献的计量分析可知，番茄红素研究方向偏重于提取制备研究、基础研究及药理研究。近年来番茄红素文献量逐年增加，说明对番茄红素的研究日趋重视，番茄红素的经济价值已日益得到人们的认识和关注。在研究内容上已展开和逐步深入，不少研究成果也在不同程度上得到应用，尤其是工艺上的研究成果，但各个学科领域研究的广度和深度还需加强。至今，番茄红素的基础研究，多是研究其对人类有利的一面，而尚未对

45、其潜在的危害有所认识，因此，今后在开发应用上的研究，需考虑番茄红素可能存在的负面影响。参考文献1 张发柱.菜中之果番茄j. 中国食品. 1980.7(9):112 安凤霞,李景富,许向阳.番茄耐热性研究现状j.东北农业大学学报. 2005.36(4):573 赵功玲,娄天军.酶法提取番茄红素的工艺研究j. 食品工业科技.2003.(4):60-614 朱明达,贺文智,索全伶等.超临界co2技术在天然食品添加剂领域的应用j.中国食品添加剂.2005.(4):86-875 张文成,王磊.纯天然番茄红素的超临界co2萃取研究j.安徽化工.1999.(5):28-296 孙庆杰,丁霄霖.超临界co2萃

46、取番茄红素的初步研究j.食品与发酵工业.1998.24(1):4-57 周如梅.超临界萃取技术在天然产物中的应用j.企业技术开发.2005.24(7):15-178 张卫强,邓宇.微波辐射技术在天然物活性成分萃取中的应用j.化学工业与工程技术. 2001.22(6):1-29 左爱仁, 范青生.超声波萃取番茄红素的研究j.食品工业. 2003.(5)我的大学爱情观目录：1、 大学概念2、 分析爱情健康观3、 爱情观要三思4、 大学需要对爱情要认识和理解5、 总结1、什么是大学爱情：大学是一个相对宽松，时间自由，自己支配的环境，也正因为这样，培植爱情之花最肥沃的土地。大学生恋爱一直是大学校园的热

47、门话题，恋爱和学业也就自然成为了大学生在校期间面对的两个主要问题。恋爱关系处理得好、正确，健康，可以成为学习和事业的催化剂，使人学习努力、成绩上升；恋爱关系处理的不当，不健康，可能分散精力、浪费时间、情绪波动、成绩下降。因此，大学生的恋爱观必须树立在健康之上，并且树立正确的恋爱观是十分有必要的。因此我从下面几方面谈谈自己的对大学爱情观。2、什么是健康的爱情：1) 尊重对方，不显示对爱情的占有欲，不把爱情放第一位，不痴情过分；2) 理解对方，互相关心，互相支持，互相鼓励，并以对方的幸福为自己的满足; 3) 是彼此独立的前提下结合；3、什么是不健康的爱情：1)盲目的约会，忽视了学业;2)过于痴情，一味地要求对方表露爱的情怀，这种爱情常有病态的夸张;3)缺乏体贴怜爱之心，只表现自己强烈的占有欲;4)偏重