内脏敏感增高型功能性消化不良脾虚证动物模型的建立_刘艳阳_李重点

1、使心输出量增加；另一方面，CAMP还能扩张外周血 管，降低心脏前后负荷， 降低射血阻抗，使心排出量增加，改善心功能。有关研究发现，细胞内CAMP含 量降低与心血管疾病的发生密切相关，补充外源性抗血小 板聚集物质或环磷酸腺 苷能够提高细胞内cAMP含量，从而减少血小板聚集,减轻心脏负荷。外 源性cAMP进入体内后能够间接地激活蛋白激酶增加磷酸化酶作用，可在缺氧条件下促使糖原分解以供能，使呼吸链氧化酶活性增强，使心肌缺氧得以改善9 - 10。本实验通过冠状动脉结扎联合左旋硝基精氨酸灌服建立大鼠冠心病心气虚证病证结合模型，并采用盐酸地尔硫卓和益气活血方低、中、高剂量灌服进行干预 治疗。结果显示益气活

2、血方能够降低模型大鼠血浆cAMP含量，作用比盐酸地尔硫卓明显，尤其中药高剂量组最为显著。说明益气活血方能够一定程度上降低模 型大鼠血浆cAMP值,其改善模型大鼠心功能的作收稿日期：2015 04 - 30基金项目：国家重点基础研究发展计划(973计划资助项目(2013CB531703作者简介：刘艳阳(1988-,男，湖北利川人，硕士研究生，研究方向：中医病证 结合规律研究。通讯作者：李峰(1966-,男,山西大同人,教授,博士研究生导师,博士 ,研究 方向：中医病证结合规律的研究。用可能在于其在一定程度上降低 CHD心气虚证 大鼠血浆cAMP浓度，减轻或避免了蛋白激酶的过度激活，减轻磷酸化酶的

3、作用， 维持心肌兴奋收缩耦联的正常，降低心肌细胞耗氧量，改善心功能。参考文献1 李贻奎，宁可永，梁嵘,等大鼠冠状动脉结扎心肌缺血模型方法的改进J .中国新药杂志,2005,14(4 ：427- 428.2 高连如，赵云涛，石湘云，等.左旋硝基精氨酸诱导大鼠持续性高 血压J .基础医学与临床,2000, 15(3 :50- 53.3 丁春梅，施俊晶，王寅，等地尔硫卓治疗老年重症高血压的疗效 分析J .西部医学,2013, 25(4 :536- 537.4 许丽梅，赖仁奎.心气虚证与神经内分泌免疫调节关系探析J .中华中医药学刊,2007, 25(1 :146- 148.5 周光珍.人参治疗气虚欲

4、脱证功效研究简况J .实用中医内科杂 志,2014, 28(2 :177- 178.6 张蔷，高文远，满淑丽.黄芪中有效成分药理活性的研究进展J .中国中药杂志,2012, 31(21 :3203 3205.7 王德序.丹参对高血压心室重构患者的影响研究J .实用心脑肺血管病杂志,2012, 20(5 :85一 854.8 徐彤彤，莫碧文，阳耀忠，等.川芎素对冠心病血浆脂质过氧化物 及血流动 力学影响J .华夏医学,2001, 14(6 :775- 776.9 王茜，林焕冰，徐江平，等.CAMP信号分子在缺血后适应心肌保护 机制中 的作用J .中国病理生理杂志，2011,27(8 :1496-

5、 1501. 10彭应心,单江，薛浩， 等.儿茶酚胺一B受体一CAMP系统在高血 压左室重构中的生物学作用J .中 国病理生理杂志，2003, 19 (5 :699- 701.DOI?10. 13192/j. issn. 1000-1719. 2015. 11. 065内脏敏感增高型功能性消化不良脾虚证动物模型的建立刘艳阳，李峰,刘晶,马捷,吴凤芝,杨茜,刘燕(北京中医药大学，北京100029摘要:目的：探讨内脏敏感增高型功能性消化不良脾虚证动物模型的建立方法 并进行模型的评价。方法：运用2%蔗糖溶液灌胃并复合小平台站立法制作内脏敏感增高型功能性消化不良脾虚证动物模型，通过观察大鼠的一般情 况

6、，运用ELISA试剂盒检测血清乳酸脱氢酶、血清D -木糖排泄率、血清胃动素的含量,对此模 型进行评价。结果：与正常组相比，模型组大鼠的食少、纳呆、腹胀、毛发疏 松不泽、神疲乏力等脾虚症状都较其他组重，且持久。在行为学上，碘乙酰胺复 合小平台组大鼠的糖水消耗均低于对照组。在指标检测上，模型组大鼠血清D -木糖排泄率、胃动素含量均低于对照组，而乳酸值明显高于对照组（P V 0. 05或P V 0. 01 o结论：通过对模型组大鼠的一般情况和生物学指标的辨证分析，认为内脏敏感增高型功能性消化不良脾虚证动物模型制作成功，此模型达到了 病证结合”的要求。关键词：内脏敏感增高型；功能性消化不良；脾虚证；动

7、物模型；建立中图分类号:R 332文献标志码:A文章编号：1000-1719（2015 11-2218-03目前功能性消化不良的诊断标准主要是依据罗马川标准，其病起源于胃及十二指肠的区域，一般认为功 能性消化不良（functional dyspepsia , FD系指除外器质 性疾病而见有持续性或反复发作性上腹部疼痛、食后饱胀、腹部胀气、暧气、早饱、厌食、恶心等上腹部不适症状的一组临床证候群1,且慢性的期限在3 个月以上（也有将病程定为1个月以上，经胃镜、上胃肠钡 餐造影、腹部B超检 查无异常者称为功能性消化不良。脾虚证是指脾气不足，失其健运所表现的证 候。其临床表现主要是纳少、脘腹胀满、食后

8、尤甚，大便溏薄，神倦乏力，少气 懒言，舌淡苔白，脉缓弱。中医学认 为，脾主运化”是脾最重要的生理功能。脾主运化”脾气的正常是脾运”及脾化”正常生理功能的保 证。脾气虚损 （脾虚证是导致脾不运”与不化”的病理根本，功能性消化不良是与以脾虚证 的脾不运”相对应的。可分为上腹不适综合征和上腹痛综合征两个亚型。在中医学理论体系中，功能性消化不良疾病 没有明确的病名，一般依据本病的临床表 现可把其归8122辽宁中医杂志2015年第42卷第11期类于痞满”吐酸”嘈杂”。从文献资料来看，中医对功能性消化不良的研究 更多集中在临床，以方药研究 及治疗方法为多，实验研究较少，特别是与中医脾虚证相结合的实验研究。

9、功能 性消化不良中医证型有脾虚证、脾肾气虚证、肝郁脾 虚证、脾虚湿困证、寒 热错杂证、脾阳虚证。其中以脾 虚证最多，功能性消化不良所涉及的脏腑则以脾 为主，肾、肝次之。根据炎症致内脏敏感性增高”及劳倦伤脾”的理论，本 实验采取碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃2复合小平台站立法3制作内脏敏感增高功能 性消化不良脾虚证动物模型，为功能性消化不良脾虚证动物模型 的基础研究及新 药开发提供动物模型。1材料1. 1动物健康雄性Wistar大鼠180只，清洁级，出生6d大鼠，由斯贝福（北京 实验动物科技有限公司 提供,许可证号：SCXK （京2013- 0005。1.2饲料 基础配方饲料成分为酪蛋白18%、淀粉58.

10、 8%、蔗糖10%、玉米油 5%、纤维素3%、维生素1%、无机盐4%、DL蛋氨酸0. 2%。由北京科澳协力 饲料有限公司提供。1.3试剂乳酸脱氢酶试剂盒、D -木糖试剂盒、胃动素试剂盒，购于南京建 成生物工程研究所，生产批号 分别为20140611、20140601、20140512。1.4器材自制小平台站立箱：在一方形水槽中（112cm ? 62cm ? 41cn设 置了 15个小平台（平台直径8cm ,高10cm ,平台周边注满水,水深1.5cm ,水温维 持在（22?2 ?。高速冷冻离心机,电子天平,酶标仪。2实验方案2. 1适应性饲养 出生6d大鼠。每笼10只,带1只母鼠,适应性饲养4

11、d2. 2造模出生10d大鼠，对照组90只，2%蔗糖溶液灌胃，0. 2mL /只。模型组90只，0. 1%碘乙酰胺蔗 糖溶液灌胃,0. 2mL /只。每至大鼠3周龄时断奶，分 笼，3 4只大鼠/笼天一次，连续造模6d。正常饲养。2. 3随机分组对照组随机分 组分为：正常组（n = 45、小平台组（n =45 ;模型组随机分组：碘乙酰胺组（n =45、 碘乙酰胺复合小平台组（n =45 ;大鼠6 8周龄,模型复合,同时观察大鼠的一般指 标，体重，进食量及饮水量；小平台组及碘乙酰胺复合小平台组大鼠每天7:00-17:00进行小平台站立,连续造模14d。 3观察指标及统计方法3. 1运用量表动态观察

12、大鼠的一般情况 进食量、饮水量、体重、活动状 态、背毛颜色光泽度、粪便情况等，在造模期间进行糖水实验及抓握力时间测定 , 造模结束后，腹主动脉取血，高速离心取血清，运用ELISA试剂盒进行血清乳酸 脱氢酶、血清胃动素、血清D -木糖排泄率的测定。3. 2统计学方法 数据采用SPSS 17. 0软件进行统 计学处理，正态分布的资料釆 用单因素方差分析，定量数据以均数？标准差（珋x ?s表示,组间比较采用t检验,P V0. 05为差异有统计学意义。4结果4. 1 一般状态观察 造模期间，正常组大鼠背毛光 泽、活泼好动、体重增长较 快，而模型组大鼠则出现神 疲乏力、嗜睡懒动、毛发不泽、便软等一系列脾

13、虚 证的相关症状。模型组大鼠的体重明显低于正常组，与正常组比较P V0. 05或P V 0. 01,体重变化图见表1。表1大鼠小平台站立期间体重增长情况（g ,珋x ?s组别n 0周第1周第2周 碘乙酰胺组45183. 80?5. 41236. 40?4. 33 284. 00?5. 45 碘乙酰胺复合小平台组45176. 23?6. 62198. 96?3. 22 221.45? 64 小平台组 45208. 33?3. 21213. 45?4. 50 247. 60?. 43正常组 45202. 64?3. 23250. 74?4. 34295. 34? 6. 44 注：与正常组比较 P

14、V0. 05, V0. 01。4. 2行为学测定 试验中模型组大鼠较正常组大鼠糖水消耗量低，碘乙酰胺复合小平台组差异显著，糖水实验结果图见表2。试验中模型组大鼠的抓握力时间明 显低于正常组，碘乙酰胺复合小平台组差异显著，结果见图1All rights? 1994-2015China Academic Journal ElectronicPublishing House, reserved.A http?Aki,nct100号a h注：与正常组比较, P V 0. 05, P V 0. 01图1行为学测定结果表2大鼠小平台站立期间抓握力时间情况(s ,珋x ? s组别n 0周第1周第2周 碘乙酰

15、胺组453. 66?0. 413. 56?0. 31 3. 38?. 45 碘乙酰胺复合小平台组452. 90?0. 623. 11?0. 12 3. 12?. 14 小平台组 453. 00?0. 213. 35?0.31 3. 2670. 43 正常组 454. 06?0. 233. 87?0. 243. 65?0. 44 注：与正常组比较 P V 0. 05, V 0. 01。4. 3ELISA测定在指标检测上，模型组的血清D 木糖排泄率、胃动素含量 均低于对照组，而乳酸值明显高于对照组。与正常组相比P V0. 05,有统计学意 义。血清乳酸值、血清胃动素、血清D -木糖排泄率的含量 对

16、比，见表3表5。表3各组大鼠血清乳酸含量比较（g ,珋x ? s组别n血清乳酸含量碘乙酰胺组4568. 33?2. 30 碘乙酰胺复合小平台组 4567. 07710. 29 小平台组4558. 94? 8. 13正常组 4559. 0079. 83注：与正常组比较， Pc 0. 05。9122辽宁中医杂志2015年第42卷第11期表4各组大鼠血清胃动素含量比较（g ,珋x ?s组别n血清胃动素含量碘乙酰胺组45387. 00755. 35碘乙酰胺复合小平台组 45409. 92768. 20 小平台组 45364. 34750. 46正常组 45439. 47? 33. 42注：与正常组比较

17、， FC 0. 05。表5各组大鼠血清D 木糖排泄率比较（g ,珋x 7 s组别n血清D 木糖排泄率 碘乙酰胺组45387. 007 55. 35碘乙酰胺复合小平台组 45409. 92?68. 20。小平台组45364. 34?50. 46正常组 45439. 47? 33. 42注：与正常组比较， Pc 0. 05。5讨论5. 1病因病机目前研究认为，功能性消化不良的病 因及发病机制主要是动力障 碍、内脏敏感增高、胃酸刺激，根据发病原因及发病机制制作动物模型，是目前 功能性消化不良模型制作的方法所在。本实验所采用的 是0. 1%碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃，依据西医炎症致胃 肠敏感性增高这一理论，

18、符合西医疾病造模方法。中 医学认为，导致脾虚证的常见病因为情志抑郁、饮食不节、劳倦过度等，张介宾 云：脾胃之伤于外者，唯劳倦最能伤脾，脾伤则表里相通，而胃受其困者为甚”， 故劳倦过度是导致脾虚证的重要病因。本实验采用的小平台站立法主要是依据劳 倦过度所致脾虚这一经典理 论，小鼠在平台上可以自由活动，一旦动物进入睡眠状 态就会因为肌肉舒张、松弛而落入水中，大鼠不得休 息，造成大鼠劳倦过度，符合 中医劳倦伤脾的病因4。故而碘乙酰胺复合小平台站立法动物模型符合内脏敏感性增高功能性消化不良脾虚证的病因。5. 2 一般状态分析脾虚证是指脾气不足，失其健运所表现的证候。多因饮食 不节，劳累过度，久病耗伤所

19、致。其临床表现主要是纳少、脘腹胀满、食后尤 甚，大便溏薄，神倦乏力，少气懒言，面色白光白或萎黄，或见浮肿或消瘦，舌淡 苔白，脉缓弱。脾虚证是脾不运”和脾不化”的病理根本，本实验研究的功能 性消化不良主要见于以消化不良为主要表现的脾不运”其临床 表现主要是胸脘满闷，纳呆，恶心呕吐，心下痞满，腹胀，倦怠乏力，大便糖稀，舌淡，苔薄白，脉沉 细等。本实验造模期间，模型组大鼠体重增长缓慢，进食量减低，与正常组相比 具有统计学意义（P V 0. 05 ,同时经过量表分析，结果显示模型组大鼠背毛颜色无 光泽，嗜睡懒动，大便质软，特别是碘乙酰胺复合小平台组差异显著。5. 3ELISA指标检测分析倦怠乏力、嗜睡

20、懒动是脾虚证最为常见的临床症状 现代医学研究认为血乳酸 的堆积对诊断脾虚证有重大意义，对评估脾虚证 体倦 乏力”有重要意义5。 D 木糖为戊糖,与细胞膜表 面的Na + K + ATP酶密 切相关,脾虚时，Na + K +ATP酶活性是降低的，从而导致D 木糖的排泄率 降低6,胃动素是由22 个氨基残基组成的活性支链多 肽7,胃肠激素水平紊乱在功能性消化不良发病机 制中起一作用。胃动素是肠内分泌细胞分泌的多肽类胃肠激素，为消化间期激素通过内分泌和神经途径激发 胃肠的MMCHI期收缩。目前研究认为，功能性消化 不良患者存在胃排空下降、胃电节律功能紊乱、胃窦无力和排空功能减慢、胃 窦幽门一十二指肠

21、协调功能 失常、MMCIII期持续时间缩短或缺如，其与血浆 胃动素含量降低有关。在本实验中，我们得出D -木糖排泄率、血清胃动素降 低，血清乳酸值升高这一结论(P V 0. 05或P V 0. 01 ,可能是我们运用碘乙酰胺蔗 糖溶液灌胃致胃肠敏感性增高及小平台站立法致脾虚的作用结果。6总结综上所述，通过对动物模型的症状观察及生物学指标的检测，我们认为大鼠内脏敏感增高型功能性消化不良脾虚证模型成功建立。该模型既符合现代医学疾病 的发病机理，也符合中医脾虚证相关证候特征，可靠性及重复性较好。同时本实 验借助现代医学的先进 技术，对动物模型进行ELISA生物学指标检测，在一定程 度上也是对证候的物质基础和变化实质的深入阐释。该模型的建立成功对病证结合”相关理论的阐 释和中药新药的开发具有积极作用，也有利于指导临 床实 践。参考文献1陆再英，钟南山内科学M 北京：人民卫生出版社，2008:484. 2陈小 野，皱世洁大鼠长期脾虚和热证造模的初步病理观察 J 成都中医药大学学报 1997, 31(4 :49.3Liu LS , Winston JH , she noy