生物制药技术基因构建

1、1教学内容理论课学时 绪论1 基因与工程细胞的构建3 工程细胞的发酵培养与蛋白表达2 重组蛋白的分离纯化2 生物制药的制剂研究1 生物制药的质量研究与分析技术4 生物制药的中试研究2 生物制药的稳定性研究1 生物制药的主要药效学研究1 生物制药的药代动力学研究1教学内容理论课学时小课讨论学时 生物制药的安全性评价3 第一次PBL生物制药立项 2 抗体药物3 基因治疗与基因药物2 肿瘤的细胞免疫治疗3 第二次PBL肿瘤的治疗 2 个体化医学诊疗2 生物制药的知识产权问题1 生物制药的药品注册2 第三次PBL生物制药申报 2生物制药研发的基本流程23456组建表达载体条件l强启动子l两侧的调控序列

2、l选择标记l正确的读码框架l合适的核糖体结合位点（SD序列）lSD序列与起始密码子ATG之间合适的距离l被翻译的蛋白性质与稳定性l合适的宿主细胞SD序列（Shine-Dalgarno sequence）：mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列。SD序列在细菌mRNA起始密码子AUG上游7-12个核苷酸处，有一段富含嘌呤的碱基序列，能与细菌16S rRNA3端识别，帮助从起始AUG处开始翻译789101112调控调控DNA RNA Protein13Primary Structure The sequence of amino acids on the polypeptide chainSeco

3、ndary Structure Conformation of the polypeptide chain (3D structure)Tertiary Structure Three Dimensional Structure (Folding) of the proteinQuaternary Structure Complexation with other proteins (Similar or dissimilar structures)14151617Soluble Inclusion BodySecreting18192021遗传标记编码产物筛选药物作用机理APH-氨基糖苷磷酸

4、转移酶G418APH灭活G418DHFR二氢叶酸还原酶氨甲喋呤DHFR变体抗氨甲喋呤HPH-潮霉素B磷酸转移酶潮霉素BHPH灭活潮霉素BTK-胸腺嘧啶核苷激酶氨甲喋呤TK合成TMPXGPRT-黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶霉酚酸XGPRT合成GMPADA-腺嘌呤核苷脱氨酶腺嘌呤木酮糖苷ADA灭活Xyl-A2223 一般真核mRNA的翻译都需要5帽子来介导核糖体结合，但真核生物和病毒中还存在一些例外情况，例如一些基因5端具有一段较短的RNA序列（约150-250bp），这类RNA序列能折叠成类似于起始tRNA的结构，从而介导核糖体与RNA结合，起始蛋白质翻译，这段非翻译RNA被称为内部核糖体进入位点

5、序列（Internal ribosome entry site, IRES）242526272829tPArPA31载体：pET-44a宿主菌：BL21酶切位点：PshA/Hind 32333435教学内容理论课学时 绪论1 基因与工程细胞的构建3 工程细胞的发酵培养与蛋白表达2 重组蛋白的分离纯化2 生物制药的制剂研究1 生物制药的质量研究与分析技术4 生物制药的中试研究2 生物制药的稳定性研究1 生物制药的主要药效学研究1 生物制药的药代动力学研究1教学内容理论课学时小课讨论学时 生物制药的安全性评价3 第一次PBL生物制药立项 2 抗体药物3 基因治疗与基因药物2 肿瘤的细胞免疫治疗3 第二次PBL肿瘤的治疗 2 个体化医学诊疗2 生物制药的知识产权问题1 生物制药的药品注册2 第三次PBL生物制药申报 236373839遗传标记编码产物筛选药物作用机理APH-氨基糖苷磷酸转移酶G418APH灭活G418DHFR二氢叶酸还原酶氨甲喋呤DHFR变体抗氨甲喋呤HPH-潮霉素B磷酸转移酶潮霉素BHPH灭活潮霉