光果莸多酚物质的抗氧化作用研究

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减光果莸多酚物质的抗氧化作用研究（作者：单位：邮编：）【摘要】目的建立光果莸不同部位中多酚的含量测定方法，研究其对羟自由基的清除作用。方法采用索氏提取法以95%乙醇为溶剂提取光果莸不同部位的多酚物质，用紫外分光光度法测定各部位 多酚含量及对羟自由基（0H ）的清除作用，以IC50值为参考指标评 价了多酚物质的抗氧化作用。结果光果莸花、叶、茎多酚含量分别为：1.44%，2.08%，0.49%。在试验浓度范围内（0.050.2 mg/ml）,光果莸不同部位多酚对羟自由基（OH ）均有不同程度的清除作用，在浓度为0.2 mg/ml时，光果莸叶多酚的清除率达93.8%

2、，与阳性对照Vit C的清除率98.0%相当，其IC50值为0.07 mg/ml，小于Vit C的IC50值0.08 mg/ml。结论光果莸叶多酚抗氧化活性最强，是一种天然有 效的自由基清除剂。【关键词】 光果莸多酚； 抗氧化；清除自由基； 半数抑制率浓 度Chi naAbstract : ObjectiveTo establish the determ in ati on methodsof polyphe nolfrom differe nt part of Caryopteris tan guticaMaxim,and to study the scavenging activity o

3、n hydroxyl free radical.MethodsThe different parts of polyphenol compositions were extracted by soxhlet extraction with ethano 1(95%),andpolyphe nol content and OH scave nging capacity were detem inedby ultraviolet spectropHotometer. The an tioxida nive activities of the extrcuts were evaluated by I

4、C50.ResultsFlowers, leaves, stems polyphenol of Caryopteris tangutica Maxim were 1.44%, 2.08% ,0.49%. Polyphenol from different parts of Caryopteris tangutica Maxim had various degree scave nging activity aga inst OH at theconcen trati on from 0.05mg/ml to 0.2mg/ml.At the concen trati on of0.2 mg /

5、ml, clearanee rate Caryopteris tangutica Maxim leaves polyphenol reached to 93.8 %, and was close to that of positive control Vc. IC50 was 0.07mg/ml,less than that of Vc 0.08 mg/ml.C on clusi on Leavespolyphe nolof Caryopteris tan guticaMaxim has the most an tioxida ntive activity and would be a eff

6、ective n atural free radical scave nger.Key words : Caryopteris tangutica Maxim. polyphenol;An tioxida nt; Free radical scave ngin g; IC50多酚类化合物是高等植物中普遍存在的次级代谢产物，具有广泛的生物活性，多酚具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等方面的生理活性。多酚的这些生理活性与其具有的清除自由基和抗氧化性能密切 相关1 。研究表明，多酚的抗氧化能力很强， 它在阻止血脂升高 的同时，还可以增加高密度脂蛋白的含量2。因此，多酚可用在保 健食品中，起到强身健体的功效，

7、也可用于食品中，以延长食品的货 架期。光果莸Caryopteris tangutica Maxim.为马鞭草科莸属植物，在秦巴山区资源丰富3，可用于治疗因酗酒过量所致的酒疮和 湿疹等4。本实验对光果莸多酚进行了测定，并对其清除自由基活 性进行研究，为其资源合理的开发利用及质量控制提供理论依据。1器材1.1材料光果莸于200710初采自陕西省太白县，经陕西师范大学生命 科学学院田先华教授鉴定为马鞭草科莸属植物光果莸Caryopteristangutica Maxim.。1.2试剂没食子酸，陕西省药检所提供；VitC，福林酚，Sigma公司产品；硫酸亚铁，双氧水，水杨酸，95%乙醇，均为国产分析纯

8、。1.3仪器FZ102微型植物粉碎机，黄骅市中兴有限责任公司产品；索氏提取器；HH8B数显恒温水浴锅，国华电器有限公司产品；旋转蒸 发仪-R II，瑞士步琪有限公司产品；SHB皿循环水式真空泵，郑州长城科工贸有限公司产品；101型电热恒温鼓风干燥箱，上海跃进医疗 器械厂；SL202N型药物电子天平，上海明桥精密科学仪器有限公司 产品；UVJ1600紫外-可见分光光度计，北京北分天普仪器技术有 限公司产品。2方法2.1光果莸不同部位多酚的提取精密称取一定量的光果莸花、叶、茎粉末用石油醚作为溶剂于索氏抽提器中回流8 h除去脂类，然后再用95 %乙醇回流提取3次，合并提取液,减压浓缩后并定容至 25

9、0 ml容量瓶中备用。2.2没食子酸对照品的配制精密称取没食子酸对照品10.0 mg,用95%的乙醇溶解后定容至100 ml的容量瓶中，得终浓度为100卩 g/ml的标准品溶液5。2.3标准曲线的绘制精密吸取浓度为100血/ml没食子酸对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml于10 ml的容量瓶中，并分 别补充适当95%乙醇至1.0 ml。再分别加入0.5ml FRC溶液（0.25 ml FRC溶液+0.25 ml的蒸馏水），3 min后，再分别加入1.5 ml的 Na2CO3（0.2 g/ml）溶液，然后各补充7.0 ml蒸馏水，振荡混匀后静 置2 h，以95%乙醇作为

10、空白，调零，于760 nm处测定其吸光值6。 绘制标准曲线，得回归方程为：Y=21.829X+0.046 9 , R2 = 0.998 7 。 其中Y为吸光度,X为没食子酸对照品溶液浓度（mg/ml）。结果表明， 没食子酸在0.0010.006 mg/ml的范围内呈良好的线性关系。2.4方法学考察精密吸取100血/ml对照品溶液，其他实验步 骤同2.3”项下，同一样品做6个重复，得RSD=0.967 3%，所得数 据的重现性较好；同一样品溶液反复测 6次吸光值，得RSD=0.396 2%，表明仪器精密度良好7;在8 h内对同一样品溶液每隔30 min 测1次吸光值，RSD=1.775 6%，表

11、明该实验体系在8 h内基本稳定 :8。2.5样品溶液的制备将“2.1 ”项下所得光果莸各部位乙醇提取液 浓缩至浸膏状，50 C干燥至恒重。精密称取干燥后的花、叶和茎的乙 醇提取物各25 mg于10 ml容量瓶中，用95%乙醇溶解并定容，得 终浓度为2.5 mg/ml的样品溶液。2.6待测样品溶液多酚含量测定采用 Folin酚法9，精密吸 取待测样品溶液各1ml,按照2.3”项方法对样品进行含量测定，每组 实验重复3次。在标准曲线中查找质量浓度，计算光果莸多酚含量。2.7光果莸不同部位多酚对羟自由基（0H）的清除作用取7支 具塞试管，分别向各试管中加入2.0 mmol/L FeSO43.0 ml

12、，1.0mmol/L H2O2 3.0 ml,振荡，摇匀。再分别加入 6.0 mmol/L水杨酸 3.0 ml，摇匀，于37 C水浴加热15 min。加热完毕后，以蒸馏水调 零，应用紫外分光光度计于510 nm处测定吸光度Ai，然后分别向7 支试管中加入样品溶液 0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 ml,用蒸 馏水补充各试管溶液至1.0 ml，继续水浴15 min，待加热完毕再次 测定其吸光值Aj,其样品溶液自身颜色的吸光值为 Ablank。抑制率按 如下公式计算：抑制率（%） =（Ai-Aj+Ablank）/ Ai X100%2.8半数抑制率的计算IC50为半数抑制率浓度

13、，也就是指自由基清除率为50%时的自由基清除剂的浓度，根据不同浓度抗氧化剂 的清除率作曲线求出10 。IC50值是评价自由基清除剂效果的常用 指标，其值越小，表示达到50%自由基清除率时，所用的自由基清 除剂的浓度剂量越小，其自由基清除效果也就越好。3结果3.1 OH 体系的生成根据Fenton反应体系模型，二价铁离子在 过氧化氢存在的条件下，能够迅速产生0H，反应生成的0H 存活时间短，若在该反应体系中加入水杨酸，它将能有效地被水杨酸捕捉并 同时生成有色物质，该有色物质在510 nm处有一强吸收峰,但若在该 体系中加入具有清除0H 的样品溶液，则会与水杨酸竞争性的与OH 结合，而使水杨酸与0

14、H 作用下生成的紫色物质减少，最终导致 反应体系的颜色变浅，吸光度减小11，12 。3.2没食子酸标准曲线的绘制见图1。3.3光果莸不同部位多酚的含量实验结果表明，光果莸叶中多 酚含量最高，花次之，茎中含量最低。各个部位的含量见表1。表1光 果莸不同部位多酚的含量（略）3.4光果莸不同部位多酚对 0H 自由基的清除率分别在反应 体系中加入浓度为2.5 mg/ml的样品多酚提取液0.2 ,0.3,0.4 ,0.5， 0.6，0.7，0.8 ml，测定不同体积样品溶液在该体系下对 OH 自由基 的清除活性。实验结果表明，光果莸花、叶和茎多酚提取物对OH 自由基均有不同程度的清除作用，其中清除作用最

15、强的是叶，花次之， 茎最差，这和它们提取物中多酚含量百分比是一致的，其中光果莸叶多酚提取物在加入体积0.8 ml时，其清除羟自由基的活性与 Vite不 相上下，达到93.8%以上，由此说明，高浓度的光果莸叶多酚具有很 强的抗氧化活性。其实验结果见图 2。3.5不同部位光果莸多酚对 0H 自由基清除作用的IC50值不 同部位光果莸多酚对 0H 自由基清除作用的IC50值见表2。从表2 中可以看出叶多酚提取物的IC50小于花、茎多酚的IC50值，具有 较好的抗氧化活性，但与 Vite的IC50比较，还存在很大的差距，有 待于提取并纯化光果莸多酚，进一步分离出有效的单体成分。表2不 同部位光果莸多酚

16、对0H 自由基清除作用的IC50值（略）4讨论植物多酚因具有很强的抗氧化作用而备受人们的重视。植 物多酚的抗氧化能力使它能够有效地清除人体内的过剩自由基，减缓人体组织器官的衰老。此外，植物多酚还具有明显的抑菌、抗癌和抑 制胆固醇上升等功效13，14 。本实验发现样品多酚测定的稳定性较好，含量以光果莸叶 多酚含量较高，达2.08%.采用体外产生活性自由基系统，通过对自由 基的清除作用实验证实，光果莸多酚在试验质量浓度范围内对羟自由 基均有一定的清除作用，尤以光果莸叶多酚的清除作用最强，达到 93.8%，与Vite的清除作用相当。由此表明光果莸叶多酚是一种较好 的天然抗氧化物质，有较好的开发和应用

17、前景。【参考文献】1 宋立江,狄莹.植物多酚的研究与利用的意义及发展趋势:J.化学进展,2004,5( 2) :162.:2李雪莹，王文杰.植物单宁的生理作用及经济价值J.内蒙古林业科技，2004 , 4(4):22.:3西北植物研究所.秦岭植物志M 北京：科学出版 社，1983.:4 钟国跃，秦松云，钟延渝，等.羌族民间药用莸属植物的生药学鉴定J.中国中药杂志，1993，18(7):392.5 W Zhe ng,S. Y.Wan g.A ntioxida nt activity and phe no liecompoundsin selected herbs J .J Agrie FoodC

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