四逆散归脾汤与温胆汤对慢性应激肝郁模型大鼠行为学的影响

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减四逆散、归脾汤与温胆汤对慢性应激肝郁模型大鼠行为学的影响（作者：单位：邮编：）【摘要】【目的】观察疏肝方四逆散、养血健脾方归脾汤和理气化痰方温胆汤对慢性应激肝郁模型大鼠行为学的影响，以进一步探讨该模型的中医证候性质。【方法】选用SD大鼠40只，按 10g/L蔗糖水摄取率分层随机分为 5组，即正常对照组、模型组、四 逆散组（剂量为5杆6g kg-1 d-1 ）、归脾汤组（剂量为 19杆6g kg-1 d-1 ）、温胆汤组（剂量为 8杆05g kg-1 d-1 ）;采 用慢性应激刺激方法复制肝郁证模型， 观察各组大鼠体质量、血清皮 质酮含量、10g/L蔗糖水摄取

2、率和强迫游泳中静止时间。【结果】模 型组大鼠血清皮质酮含量升高、蔗糖水摄取率降低、强迫游泳中静止 时间延长，与正常对照组比较差异均有显著性意义（Pv 0杆05或Pv 01）;四逆散组可降低血清皮质酮含量、升高蔗糖水摄取率，缩短 强迫游泳中静止时间，与模型组比较差异均有显著性意义 （Pv 0ff05 或Pv 0才千01）;归脾汤组、温胆汤组各检测指标均无显著性改变（ P 0杆05），各组大鼠体质量增加量比较均无显著性差异（P 0杆05）。【结论】本研究的慢性应激大鼠模型属肝郁证模型，与心脾两虚及痰热内扰证无关。【关键词】慢性应激/中药疗法；肝郁证/中药疗法；四逆散/治疗应用；归脾汤/治疗应用；温

3、胆汤/治疗应用；疾病模型，动物；大鼠Abstract: ObjectiveTo observe the effects of Si ni Powder(SP), Guipi Decoction (GD) and WendarDecoction (WD), which have the acti ons of soothi ng liver ， no urishi ng blood and strengthening spleen ，and regulating Qi and resolving phlegm respectively ， on the behavior of rat model

4、s with liver扌以Qistag nati on in duced by chronic stress , and to explore the esse nee of traditi onal Chin ese medical syn drome of this model.MethodsForty male Sprague 拟Dawley rats were exposed to an un predictable seque nee of mild stressors for 21 days while being treated by SP(5 杆6 g kg-1 d-1)，G

5、D(19杆6 g kg-1 d-1) or WD8 杆 05 g kg-1 d-1).Accordi ng to the in take rate of 10g/L sucrose solution，the rats were divided into normal controlgroup，model group，SPgroup，GDgroup and WDgroup by stratified ran domizati on .Bodyweight ， sta nding time duri ngforcedswimmi ng test and in take rate of 10g/L

6、sucrose soluti on were inv estigated duri ng the whole procedure.Serum corticoster one content was detected by en zyme拟 li nked immuno sorbe nt assay(ELISA).Results In the model group， serum corticosteronecontent was in creased， in take rate of sucrose soluti on wasreduced , and standing time during

7、 forced swimming test was prolonged （P v 0杆05 or P v 0杆01 compared with those in the normal control group）.SP counteracted the above changes in the mode group （P0 杆05 or P0 杆01）, but GD and WD had no effect on the above indexes （P0杆05）.The differenee of body weight in creasewas in sig ni fica ntbetw

8、ee n the 5 groups （P 0杆05）.Conclusion The rat model of liver 拟Qi stagnation can be induced by chronic stress , which is different from the syndromes of deficiency of both heart and spleen and the interior disturba nee of phlegm拟 heat.Key words: CHRONICSTRESS/TCDtherapy;STAGNATION OF LIVER以QI/TCD the

9、rapy;SINI POWDERtherapeutic use;GUIPI DECOCTION/therapeutic use;WENDAN DECOCTION/therapeutic use;DISEASE MODELSANIMAL;RATS证候是中医学现代研究的关键科学问题之一。由于影响证候的因素复杂、范围广泛以及伦理学等方面因素的制约，使证候发生发展机理的研究很难深入，建立证候动物模型是摆脱这一困境的重要途径。 肝郁证是临床常见的基础性证候，已有用 CCl4注射、艾叶注射或夹 尾急性激怒法、模具限制法等多种制作肝郁证动物模型的报道1，但这些造模方法均因有种种缺陷，近年已很少应用。为了更好

10、地模拟临床肝郁证，我们采用慢性应激的方法初步建立了肝郁证大鼠模型:2，并从临床发病学特点、核心症状和3种治法代表方剂的治疗效应等方面，分析了该模型的合理性，初步认为其证候性质属肝郁且与 脾虚无关3-4 。在上述工作的基础上，本研究拟比较疏肝方四逆散、 养血健脾方归脾汤和理气化痰方温胆汤对该模型大鼠的行为学效应， 以进一步探讨该模型的中医证候性质。现报道如下。1材料与方法1杆1药物、试剂及仪器按照方剂学5确定方剂的组成，其中四逆散（伤寒论）: 柴胡6g，枳实6g，生白芍6g，炙甘草6g;归脾汤（济生方）：白 术9g，茯苓9g，黄芪12g，龙眼肉12g,炒酸枣仁12g，人参6g，木 香6g，炙甘草

11、3g,当归9g，远志6g;温胆汤（三因极一病证方论）： 半夏6g，竹茹6g，枳实6g，橘皮9g，炙甘草3g，茯苓4杆5g。以上 各方用饮用水将中药免煎颗粒（首创大地药业有限公司）按成人（以 60kg计）1日用量的14倍配制成悬浊液，其中四逆散浓度为 0杆56g/mL，归脾汤浓度为1杆96g/mL，温胆汤浓度为 0千805g/mL。 蔗糖（C12H22O1,1分子量为342杆29）购自北京化学试剂公司；皮 质酮酶联免疫吸附试验（ELISA）测定试剂盒（批号：24110603）购自 美国RD公司。HWU.2调速多用振荡器购自江苏金坛金城国胜实验仪 器厂。1杆2动物、分组及给药雄性SD大鼠40只（S

12、PF级），体质量190210g，由北京维通利 华实验动物公司提供，许可证号：SCXK（京）2002拟0003;正常光照 条件，自由摄取食水，驯养1周并进行10g/L蔗糖水摄取训练。禁水24h后，于第2天清晨89时测定1h的1Og/L蔗糖水摄取量，计算 摄取率，随后采用区组随机设计的方法，按10g/L蔗糖水摄取率划分 区组，再按随机数字表法随机分为5组，每组8只。正常对照组群养， 每天灌胃饮用水10mL/kg ;慢性应激模型组（简称模型组）孤养，每 天灌胃饮用水10mL/kg，并按程序施加造模刺激；慢性应激加四逆散 组（简称四逆散组）每天灌胃剂量为 5杆6g/kg的四逆散悬浊液，并 按程序施加造

13、模刺激；慢性应激加归脾汤组（简称归脾汤组）：每天灌胃剂量为19杆6g/kg的归脾汤悬浊液，并按程序施加造模刺激；慢 性应激加温胆汤组（简称温胆汤组）：每天灌胃剂量为8杆05g/kg的 温胆汤悬浊液，并按程序施加造模刺激。普通饲料与饮用水在允许时 可自由摄取。各组处理时间均为 21d,每3d测定1次大鼠体质量， 以调整灌胃药量。1杆3造模方法:2刺激方法包括：夹尾1min，水平振荡160次/min共30min， 4C冰水游泳5min，禁水24h，禁食24h，昼夜颠倒24h，45C热环境 5min。上述刺激每天1种，每种刺激各3次，随机安排，使动物不能 预知次日的刺激。1杆4血清皮质酮测定于末次刺

14、激后次日，断头取血，4C放置3h后，4C离心15min （4000g），分离血清，-40 C保存备测。检测方法按试剂盒说明书操 作。1杆5蔗糖水摄取率测定根据文献6的方法操作。在正式实验前，先对大鼠进行蔗糖 水摄取训练，即先用1Og/L蔗糖水和饮用水同时喂养48h，然后断水 24h，于次日清晨89时再次同时给予大鼠自由饮用10g/L蔗糖水和 饮用水共1h，分别记录摄取量，根据下列公式计算蔗糖水摄取率（p 摄取），并在实验的第7、14、21天各重复测量1次。p摄取=V蔗糖水（V蔗糖水+V饮用水）X 100%1杆6强迫游泳中静止时间测定根据文献7的方法进行。于末次应激 24h后，先进行适应性 强迫

15、游泳15min，即将大鼠放入内径20cm高60cm的圆形透明玻璃 缸中，缸中加温度（25 1）C的温水，深约25cm使大鼠在水中不 能以后爪支撑身体、前爪攀附于缸壁，取出后用毛巾擦干放回笼中。 每缸水仅使用1只大鼠。24h后再同样将大鼠放入水中，累计记录5min 内大鼠在水中停止挣扎、呈漂浮状态的时间。每只大鼠仅进行1次实 验，由两人同时观察记录，取平均值作为各大鼠强迫游泳静止时间的 数据。1杆7统计学方法采用SPSS131。统计软件包进行随机区组设计的方差分析，组间 两两比较的SNKIq检验。2结果2杆1各组大鼠体质量及血清皮质酮的变化表1结果显示，各组大鼠体质量均有增加，但增加量差异无显著

16、 性意义（P0木千05）。模型组大鼠血清皮质酮含量显著升高，与正常 对照组比较差异有显著性意义（P v 0杆01）。四逆散组大鼠血清皮质酮 含量显著低于模型组（Pv 0木千05）,与正常对照组比较差异无显著性 意义（P 0杆05）。归脾汤组、温胆汤组与模型组比较差异均无显著 性意义（P 0木千05）。表1各组大鼠体质量增加量及血清皮质酮的变 化比较（略）2杆2各组大鼠蔗糖水摄取率变化表2结果显示，模型组大鼠蔗糖水摄取率显著降低， 与正常对照 组比较差异有显著性意义（Pv 0杆05）;四逆散组摄取率升高，与模 型组比较差异有显著性意义（P v 0；忏05）;归脾汤组、温胆汤组摄取 率与模型组比较

17、差异均无显著性意义（P併千05）。表2各组大鼠蔗 糖水摄取率与强迫游泳中静止时间比较（略）2杆3各组大鼠强迫游泳中静止时间的变化表2结果显示，模型组大鼠强迫游泳中静止时间延长 ，与正常对 照组比较差异有显著性意义（Pv 0杆01）;四逆散组大鼠静止时间减 少,与模型组比较差异有显著性意义（P v 0杆01），与正常对照组比较 差异无显著性意义（P 05）;归脾汤组、温胆汤组静止时间与模 型组比较差异无显著性意义（P 0杆05）。3讨论情志异常是肝郁证 的主要病因，中医七情学说与应激理论类似，情志病因的实质是不良 生活事件所形成的心理应激；同时中医认为情志与肝的关系最为密切 在对心理应激的调节过

18、程中肝起着决定性的作用。临床上与慢性心理应激相关的病证如抑郁症，在诊断系统中的核心症状表现为兴趣或愉 快的减少和抑郁情绪，辨证多属于中医“郁证”范畴，疏肝理气解郁是最基本最重要的治则。前期研究建立了肝郁证动物模型的标准3,并使用多种不同应激条件随机组合起来的慢性应激程序，模拟临床上 情志异常引发肝郁证的过程，并将lOg/L蔗糖水摄取率与强迫游泳中 静止时间两种行为学指标相结合，模拟人类肝郁证常见的抑郁、沉默 寡言、默默不欲饮食以及喜叹息等症状所反映的兴趣缺乏和“无助感” 的心理状态，结合逍遥散、四逆散和四君子汤的效应，建立并初步验 证了慢性应激肝郁证大鼠模型2, 4。本研究中的模型组大鼠1Og

19、/L 蔗糖水摄取率减少、强迫游泳中静止时间增加，疏肝方剂四逆散可有 效对抗的结果与前述的研究相同，证明这一模型具有良好的再现性。 研究表明，慢性应激状态时下丘脑一垂体一肾上腺轴（HPA）功能亢进， 肾上腺皮质激素分泌增加是其主要表现之一 8，常作为反映应激状 态的重要指标之一，皮质酮则是大鼠肾上腺皮质激素的主要形式。在本研究中，模型组大鼠血清皮质酮浓度显著高于正常组， 说明本研究 的应激方案可明显升高HPA轴活性，有明确的应激效应，也与我们以 往的研究结果相同2, 4。同时，具有疏肝作用的四逆散可以显著 抑制慢性应激引发的血清皮质酮浓度升高， 而健脾养心方剂归脾汤和 理气化痰方剂温胆汤则均无此

20、效应，提示了慢性应激引起的血清皮质 酮浓度升高与肝郁病机、疏肝治法之间的密切关系。临床上，对证候 判断的正确与否，最终要通过方剂的疗效来验证，因此以方测证是验 证动物模型中医证候性质的重要方法之一。 应用以方测证方法进行研 究，必须设立其他方剂对照，并应选择功效相对明确、争议较少、认 识相对一致的方剂进行干预实验，以增强测证的说服力9。前期研究4对比了经典的疏肝方剂四逆散、疏肝健脾方剂逍遥散和健脾 方剂四君子汤对该模型行为学变化的效应， 发现具有疏肝作用的四逆 散和逍遥散均可明显改善慢性应激引起的大鼠血清皮质酮含量升高， 并使1Og/L蔗糖水摄取率和强迫游泳中静止时间恢复至正常水平，仅有健脾而

21、无疏肝作用的四君子汤则无此效应， 说明该模型属于肝郁证 的可能性较大，而与脾虚证无关。本研究从临床治疗应激相关疾病抑 郁症较常使用的方剂中选择了归脾汤和温胆汤， 与四逆散进行效应对 比。结果显示，四逆散可明显改善慢性应激引起的大鼠血清皮质酮含 量升高、蔗糖水摄取率减少和强迫游泳中静止时间延长，而归脾汤和温胆汤均无此效应，基本上排除了该模型与心脾两虚或痰热证相关的 可能性，从另一侧面支持该模型属于肝郁的推论。在本研究中，各组 大鼠体质量增加量未见显著性差异，说明本研究中慢性应激刺激未能 影响大鼠体质量，与我们以往的研究结果相同4。在一些文献中， 慢性应激刺激对动物体质量影响的结果不一致 10-1

22、1 ，提示体质量 变化不能确定是由慢性应激引起。 在肝郁证的多个诊断标准中，也没 有体质量减少，提示体质量变化对于本模型意义不大。【参考文献】:1 任路，李浩.关于肝郁证动物模型研究现状及存在问题 的思考J.中医药学报，2006，34 (4) :44.2金光亮,南睿,郭霞珍.慢性应激肝郁证大鼠模型的建立J.北京中医药大学学报，2003，26 (2) :18.:3金光亮,王胜兰.关于建立肝郁证动物模型的思考J .山东中医药大学学报，2004，28(6) :408.4于琦，金光亮.四逆散、逍遥散与四君子汤对慢性应激 肝郁模型大鼠行为学影响的研究J.天津中医药，2007,6:509.:5段富津.方剂学M .上海：上海科学技术出版社，1995 :58, 126, 265.6 Stathis Bekris , Katerina Antoniou , Spyros Daskas, et al.Behavioural and neurochemical eff