用酶联法检测肿瘤病人红细胞免疫功能及其临床意义

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减用酶联法检测肿瘤病人红细胞免疫功能及其临床意义(作者：单位：邮编：)【摘要】介绍用酶联法检测红细胞免疫粘附 (redcellimmuneadherenceRCIA)活性及红细胞膜免疫 复合物 (ciculatingimmunecompleCIC )水平的测定方法。并测定42例正常 人和28例病症患者。结果正常对照组RCIA活性为4.56 士 0.35ngAHC/10RBC 实验组为 2.74 士 0.40 , Pv 0.001，对照组 CIC 水 平为 4.28 士 0.23ngAHG/10RBC 实验组为 3.12 士 0.22 , Pv 0.001.本

2、研究初步证实用酶联法测定肿瘤患者红细胞免疫功能，方法可靠，定量准确，适合临床推广应用。【关键词】酶联法；RCIA活性；RBC膜CIC自1981年美国学者Siegel等提出红细胞不经具有呼吸功能，而 且与白细胞一样具有免疫功能1982年郭峰等用酵母菌花环法进行红 细胞免疫功能测定，并在临床免疫上取得很大成效，完善了对红细胞 免疫功能的认识。但由于酵母菌花环法影响因素多，手工操作，要求 熟练，仅为半定量。笔者根据曹东3用ELISA法检查白血病患者红 细胞免疫功能的研究及 Miyakawa4应用放射碘标记抗人IgG抗体 法，检测了正常人42例及肿瘤病人28例的RCIA活性及RBC膜 CIC 水平变化

3、情况，现将检测方法及结果报道如下。1 材料与方法1.1 受检对象：1.1.1 正常人42例，男24例，女18例，年龄24- 45岁，均健 康献血员。1.1.2 肿瘤病人28例，其中肝癌7例，肺癌8例，膀胱癌1例， 肠癌1例，淋巴瘤3例，宫颈癌4例，鼻咽癌3例，胃癌1例。年龄 21-63岁。均为病检确诊的病例。1.2 材料:0.05MPH9.6碳酸盐缓冲液的包被液。GVB+红细胞洗涤 液。0.02MTris-Tween-20酶反应洗涤液。豚鼠混合血清。人IgG :采 用Batch技术5提取。热凝聚IgG根据林森报道的方法。羊抗人 IgG HRP武蒲生物制品研究所提供，批号 930401。1.3

4、方法：1.3.1 红细胞结合物悬液的制备：抗凝血用pH7.4的GVB+缓冲液 洗涤3次，然后调整红细胞浓度为108 /ml细胞悬液，取稀释2倍的 新鲜豚鼠混合血清 0.2ml及3.5卩g/ 100mlAHG0.2ml加红细胞悬液 0.2ml混匀置37C水浴45分钟，用GVB+液洗3次，最后用PBS-Twee20 恢复为0.2ml。1.3.2 红细胞酶联免疫，以人IgG （20卩g/ ml） 200卩l包被酶标反应板各孔，放4C过夜，然后用1%BSPBS- 0.05%Twee n20洗 涤3次，37C温育30分钟，再加倍比稀释 AHG(35-0.068卩g/ml) 作竞争抑制标准曲线，其他各孔加

5、待检查，每位两孔。一孔加入未结 合物悬液100卩l，然后37C温育2小时后洗涤3次，加底物200卩l 置37C30分钟，再加终止液50卩l，用DG322AS(南京产)酶标光 度计按波长492nm读取OD直,作竞争法标准曲线，求出待检样品RCIA 活性含量及RBC膜 CIC含量。2结果对照组与实验组的RCIA活性含量和RBC膜 CIC含量比较见附表。附表实验组与对照组红细胞免疫指标测定结果 (n gAHG/107RBC)3 讨论据已报道的大量实验研究资料表明，红细胞免疫参与肿瘤发生、 发展全过程。1981年Siegel等4采用红细胞一红细胞花结法检测 23名宫颈癌、胃癌、直肠癌病人，发现这些病人

6、红细胞免疫粘附活 性均有不同程度下降。郭峰等7创用酵母花环法检测肿瘤病人红细 胞CR1活性，发现癌症病人CR1活性降低。与本研究所测定的28例 癌症病人红细胞免疫功能下降相似。 说明肿瘤病人在疾病发生、发展 过程中与红细胞免疫活性关系密切， 并造成机体损伤和功能下降。同 时，由于红细胞对肿瘤细胞的调整及其对吞噬作用功能降低和红细胞 对CIC粘附性减弱，红细胞CR1空位减少或肿瘤红细胞CR1功能缺陷， 以导致IC清除障碍，故造成肿瘤病人 RBC膜 CIC明显低于正常人。肿瘤病人红细胞免疫功能低下原因据有关报道可能与下列因素有关：癌细胞分泌大量抗原物质如AFR CEA等，使红细胞免疫复合物增加，红

7、细胞CR1(CR1被占据8;肿瘤病人血清存在抑制因 子，抑制红细胞CR1活性9;肿瘤病人可能存在着抗 CR1的自身 抗体。但是肿瘤病人红细胞免疫粘附(RCIA)活性减少其影响因素是多 方面的，其机制有待深入探讨。红细胞免疫及红细胞免疫检测技术，国内是近几年来发展日趋活 跃的研究课题，并已建立了有效检测方法，酶联免疫法检测红细胞免 疫活性,具有灵敏度高，重复性好，定量准确，操作简便等优点，是适 宜检测红细胞免疫与疾病关系的技术方法。参考文献1 Siegelletal.Theredcellimmu neSyste n.La ncer1981；11(8246) ； 5562 郭峰、虞紫茜、赵中平。红

8、细胞免疫功能的初步研究。中华医学杂志 1982； 62( 2)； 7153 曹东，黄宗干，曹维西。白血病患者红细胞免疫功能的研究。中华内科杂志1988； 27( 10): 6344 Miyakawa Yu20.Defectiveim mun e-adhere nce(c3b)ricepter onery throcytesfrompatie ntwithsystemelupueerythematosus .Lan cet198 1； 11； 4935 龙振洲，丁桂凤主编。免疫学实验技术。北京：北京医科大 学免疫学教研室1988； 156 林森。国外有关红细胞CR1研究的几种测定方法。红细胞免疫学新探。南京大学出版社1993: 917郭峰。红细胞免疫及其调节