牛肝菌中含尼古丁成因研究报告

1、牛肝菌中含尼古丁成因研究报告 彭云霞1 马晓刚1 李云飞1 熊清1 赵永昌2 车玥泉3 刘自强 4 （1、云南出入境检验检疫局技术中心 昆明650028; 2、云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所，昆明650054； 3、云南省牛肝菌协会，昆明650032；4、中国食品土畜进出口商会食用菌分会） 摘要：在2009年野生食用菌的生产季节，研究小组通过对尼古丁外源性污染的排查和内源性成因的验证等两方面的工作得出牛肝菌等食用菌含尼古丁是内源性次生代谢产物的结论，并对影响牛肝菌尼古丁含量水平的自然因素和牛肝菌中含尼古丁的风险评估依据进行了初步的研究。 关键词：牛肝菌 尼古丁 内源性次生代谢产物 一

2、、研究方法及样本 1、检测方法 本项目组所采用的检测方法是中国正式公布的由云南ciq实验室同eurofins苏州实验室共同起草的进出口行业标准sn/t2397-2009进出口食品中尼古丁检测方法，同时近期云南ciq实验室还参加了欧盟基准实验室crl组织的国际实验室间能力验证实验，检测结果为满意结果。在11月4日-5日在德国汉堡由esa协会主办的中欧尼古丁成因研究会已确认：对尼古丁的检测eurofins方法为筛选检测方法，云南ciq方法为确证方法。 2、样本采集 2.1实验样本数量 2.1.1各类牛肝菌样本：700份，其中鲜样：100份、速冻样品73份，盐渍加工样品59份；干片468份； 2.1

3、.2其它食用菌干片样本96份； 2.1.3云南主产区及四川、东北的食用菌生长周边环境样本55份进行尼古丁含量的检测：其中根系土壤样品30个，水样品 10个，大气样品15份； 2.1.4 实验室培养的人工菌丝体四种: 本研究在实验室内人工培育了羊肚菌（morchellaesculenta）、暗褐色网柄牛肝(phlebopus portentosus)、黑曲霉（aspergillus niger ）、青霉菌（penicillum sp.）等四种菌丝体。 2.2样本来源 2.2.1云南食用菌主产区的样本由项目组到产地直接采集后在实验室进行加工，其采集加工过程严格控制，保证样本不受任何外界环境的污染。

4、 2.2.2 欧洲区的牛肝菌干片样本是在欧盟市埸上购买 2.2.3中国其它产区的实验样本由云南省牛肝菌协会会员在当地收购后提供给项目研究小组。 2.2.4大气样本委托云南省楚雄、思茅、丽江环境监测站对当地大气环境按相关技术规范进行采集。 2.2.5 真菌菌丝体由云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所提供，其菌菌丝体培养条件： 试验菌株在ypda（0.2%酵母膏，0.2&蛋白胨，2%葡萄糖，1.2%琼脂粉）斜面上25培养7-8天，培养的菌丝接入ypd液体培养基（500ml的三角瓶装入200ml的培养基），接种后摇床振荡培养（250c,150rm）10天，每个菌株设三个重复，培养好后采用离心收集

5、法收集菌丝体，8000rpm离心20分钟菌丝体培养液，弃上清收集沉淀即为培养所需的菌丝体，于40度下储存备用。同时使用不接入菌丝的培养基同上述操作条件同步培养进行空白实验。 3、 实验结果的第三方验证 为保证实验结论的科学准确，本项目研究组专门送了9份比对样本到eurofins苏州实验室进行检测，同期也收集了由中国出口商送至欧洲第三方实验室检测结果的数据进行分析研究。 二、 试验结果数据 1、项目研究组的检测结果数据 表1人工培育的菌丝体中的尼古丁 样本名称样本数量尼古丁检出值（pg） morchella esculenta 羊肚菌菌丝体315.8-77 phlebopus portentos

6、us暗褐色网柄牛肝315.2-35.2 aspergillus niger 黑曲霉318.3-24.8 penicillum sp.青霉菌320.8-27.6 空白培养基3阴性 表2 云南产区鲜牛肝菌子实体样本的检测结果 样本样本数量取样地尼古丁含量（ug/kg）平均含量（ug/kg） 1期牛肝菌 10楚雄33-7157 10丽江41-6452 10思茅28-8863 10大理42-9265 10文山38-7961 2期牛肝菌 10楚雄19-4835 10丽江24-5838 10思茅27-4941 10大理26-4539 10文山23-5336 备注：1期牛肝菌比2期生长期长 表3云南产区牛肝

7、菌干片尼古丁的检测结果 样本名称数量产区尼古丁含量（ug/kg）平均含量（ug/kg） 牛肝菌干片a级（热风和土炉烤制） 15大理228-2060756 15丽江391-27891343 20楚雄189-30451089 15文山110-2031897 15思茅562-29911213 牛肝菌干片b级（热风和土炉烤制） 15大理455-54521798 15丽江678-35121431 20楚雄441-38811888 15文山567-30781982 15思茅334-36772011 牛肝菌干片c级（热风和土炉烤制） 15大理1797-44982458 15丽江1899-56722321 20楚雄2016-51222678 15文山1688-45672201 15思茅1908-69852532 牛肝菌干片d级（热风和土炉烤制） 15大理988-112343679 15丽江2061-221344012 20楚雄2455-341225618 15文山2299-178994234 15