实验常用试剂、缓冲液的配制方法

1、实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、 1M Tris-HCl组份浓度 1 M Tris-HCl（pH7.4，7.6， 8.0） 配制量 1L配置方法 1. 称量 121.1gTris 置于 1L 烧杯中。2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH 值。pH 值浓 HCl7.4约 70mL7.6约 60mL8.0约 42mL4. 将溶解定容至 1L。5. 高温高压灭菌后， 室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03 个单位。2、 1.5 M T

2、ris-HCl 组份浓度 1.5 M Tris-HCl（pH8.8）配制量 1L配置方法 1.称取 181.7gTris 置于 1L 烧杯中。2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调 pH 值至 8.8。4. 将溶液定容至 1L 。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH值随温度的变化差异很大，温度每升高 1C,溶液的pH值大约 降低 0.03 个单位。3、 10XTE Buffer组份浓度 100 mM Tris-HCI , 10 mM EDTA （pH 7.4， 7.6， 8.0） 配制量 1L配置

3、方法 1. 量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。1 M Tris-HCI Buffer （pH7.4， 7.6， 8.0） 100mL 500 mM EDTA （pH8.0） 20mL2. 向烧杯中加入约 800mL 的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定至 1L 后，高温高压灭菌。4. 室温保存。4、3 M 醋酸钠 组份浓度 3 M 醋酸钠（pH5.2）配制量 100mL配置方法 1.称取40.8gNaOAc?3H2O置于100200mL烧杯 中，加入约 40mL 的去离子水搅拌溶解。2. 加入冰乙酸调节 pH 值至 5.2。3. 加入去离子水将溶液定容至 100mL 。4. 高温高压灭菌后，室

4、温保存。5、 PBS Buffer组份浓度 137 mM NaCI，2.7mM KCI，10 mMNa2HPO4 ， 2 mM KH2PO4配制量 1L配置方法 1. 称量下列试剂，置于 1L 烧杯中。NaCI8 gKCI0.2gNa2HPO4 1.42 g KH2PO40.27g2. 向烧杯中加入约 800 mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加 HCI 将 pH 值调节至 7.4，然后加入去离子水将溶液定 容至 1L 。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子， 如需要， 可在配方中 补充 1mM CaCl2 和 0.5 mM MgCI2。6、

5、10 M醋酸铵组份浓度10 M醋酸铵配制量 100mL配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100200 mL烧杯中，加 入约 30 mL 的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至 100mL 。3. 使用0.22滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、Tris- HCl 平衡苯酚 配置方法1. 使用原料： 大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。 但有些液化苯酚呈粉红色或黄色， 应避 免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160C对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物， 这些氧化产物可引起磷酸二酯 键的断

6、裂或导致 RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、 RNA 的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物 学实验。2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时 应戴手套及防护镜等。 所有操作均应在通风橱中进行， 与苯酚接触 过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因为在酸性 pH 条件下 DNA 分配于有机相，因 此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH 值达到 7.8以上，苯酚 平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20C，此时的苯酚呈现结晶状态。从 冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在 68C 水浴中使苯酚充分溶

7、解。 加入羟基喹啉（ 8-Quinolinol ）至终浓度 0.1。该化合物 是一种还原剂、 RNA 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂， 同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 加入等体积的1M Tris-HCI ( pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌 15 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。 加入等体积的 0.1M Tris-HCI (pH8.0) ,使用磁力搅拌器 搅拌 15 分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。 重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用 pH 试纸确认有机相的 pH 值大于 7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中 4C避光保存。8、苯酚 /氯仿 /

8、异戊醇 配置方法1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿 /异戊醇( 25：24：1 ) 。氯仿可使蛋白( 25 ：24 ：1) 质变性并有 助于液相与有机相的分离， 而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现 的气泡。2. 配置方法：将 Tris-HCI 平衡苯酚与等体积的氯仿 /异戊醇(24: 1)均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4C保存。9、10( W/V ) SDS 组份浓度 10( W/V ) SDS配制量 100mL配置方法1称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中， 加入约80mL的去离子水，68 C加热溶解。2. 滴加数滴浓盐酸调节 pH 值至 7.2。3. 将溶

9、液定容至 100mL 后，室温保存。10、 2 N NaOH组份浓度 2N NaOH配制量 100mL配置方法1.量取80mL去离子水置于100200mL塑料烧杯中(NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取 8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待 NaOH 完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至 100mL。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。11、 2.5 N HCl组份浓度 2.5 N HCI配制量 100mL配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入 21.6mL的浓盐酸 (11.6N)，均匀混合。2. 室温保存。12、 5 M NaC

10、l组份浓度 5 M NaCI配制量 1L配置方法1.称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约 800mL 的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至 1L 后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4 C保存。13、20 ( W/V) Glucose 组份浓度 20( W/V ) Glucose配制量 100mL配置方法 1.称取20g Glucose置于100 200mL烧杯中，加入约 80mL 的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至 100mL。3. 高温高压灭菌后，4C保存。14、 Solution I组份浓度 25 mM Tris-HCl (pH8.0)，

11、10mM EDTA ， 50mM Glucose质粒提取用)配制量 1L配置方法 1. 量取下列溶液，置于 1L 烧杯中1M Tris-HCl( pH8.0)25mL0.5 M EDTA( pH8.0)20mL20Glucose ( 1.11M )45mLdH2O910mL2. 高温高压灭菌后，4C保存。3. 使用前每 50 mL 的 Soliution I 中加入 2mL 的 RNase A( 20mg/mL )。15、Solution II组份浓度 250mM NaOH ， 1 ( W/V ) SDS(质粒提取用)配制量 500mL配置方法 1. 量取下列溶液置于 500mL 烧杯中。10

12、 SDS50mL2N NaOH50mL2. 加灭菌水定容至 500mL ，充分混匀。3. 室温保存。 此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意： SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌。16、 Solution III组份浓度 3M KOAc ， 5M CH3COOH(质粒提取用)配制量 500mL配置方法 1. 量取下列溶液置于 500mL 烧杯中。KOAc147gCH3COOH57.5mL2. 加入 300mL 去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至 500mL 。4. 高温高压灭菌后，4C保存。17、 0.5M EDTA组份浓度 0.5 M EDTA(pH8.0)配制量 1L配置方法

13、1.称取186.1g Na2EDTA?2H2O，置于1L烧杯中。2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌。3. 用 NaOH 调节 pH 值值 8.0(约 20g NaOH)。注意： pH 值至 8.0 时， EDTA 才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至 1L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。18、 1 M DTT组份浓度 1 M DTT配制量 20mL配置方法1.称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。2. 加 20mL 的 0.01 M 的 NaOAc (pH5.2) ，溶解后使用0.22滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20C保存。19、

14、 10mM ATP组份浓度 10mM ATP配制量 20mL配置方法 1.称取121mg Na2ATP?3H2O，加入到50mL塑料离心 管内。2. 加 20mL 的 25mM Tris-HCl (pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份，-20C保存。分子生物学实验常用培养基的配制方法1、Ampicillin组份浓度 100mg/ml Ampicillin(100mg/ml)配制量 50mL12g配置方法 1. 称量 5g Ampicillin 置于 50mL 离心管中。2. 加入 40mL 灭菌水，充分混合溶解后， 定容至 50mL 。3. 用0.22 m滤膜过滤除菌。4. 小份分装（1

15、mL/份）后，-20 C保存。2、 IPTG组份浓度 24mg/mL IPTG（ 24mg/mL ）配制量 50mL配置方法 1. 称量 1.2g IPTG 置于 50mL 离心管中。2. 加入 40mL 灭菌水，充分混合溶解后， 定容至 50mL。3. 用0.22滤膜过滤除菌。4. 小份分装（1mL/份）后，-20 C保存。3、 X- Gal组份浓度 20mg/mL X- Gal（ 20mg/mL ）配制量 50mL配置方法 1. 称取 1g X-Gal 置于 50mL 离心管中。2. 加入 40mL DMF （二甲基甲酰胺），充分混合 溶解后，定容至 50mL 。3. 小份分装（1mL/份

16、）后，-20 C保存。4、 LB 培养基组份浓度 1 （ W/V ） Tryptone ， 0.5 （ W/V ） Yeast Extract ， 1 （ W/V ） NaCl配制量 1L配置方法1. 称量下列试剂，置于 1L 烧杯中Tryptone10gYeast Extract5gNaCl10g2.加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5N NaOH （约 0.2mL），调节 pH 值至 7.04.高温高压灭菌后，4C保存。5、LB/Amp 培养基 组份浓度 1（ W/V）Tryptone0.5（ W/V ）Yeast Extract1 （ W/V ）NaCl0.1mg/

17、mLAmpicillin配制量 1L配置方法1. 称量下列试剂，置于 1L 烧杯中Tryptone10gYeast Extract5gNaCl10g2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5N NaOH （约 0.2mL） ，调节 pH 值至 7.04.加去离子水将培养基定容至1L。5.高温高压灭菌后，冷却至室温。6.加入 1mL Ampicillin （ 100mg/mL ）后均匀混合。7. 4C保存。6、 TB 培养基组份浓度1.2（ W/V ）Tryptone2.4（ W/V ）Yeast Extract0.4（ V/V ）Glycerol17mMKH2PO472m

18、MK2HPO4配制量 1L配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（ 0.17M KH2PO4 ， 0.72MK2HPO4） 100mLTryptoneYeast Extract24gGlycerol4mL3. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。4. 加去离子水将培养基定容至 1L 后，高温高压灭菌。5. 待溶液冷却至60 C以下时，加入100mL的上述灭菌 磷酸盐缓冲液。6. 4C保存。7、 TB/Apm 培养基组份浓度 1.2（ W/V）Tryptone2.4（ W/V ）Yeast Extract0.4（ V/V ）Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mg/mL

19、Ampicillin配制量 1L配置方法1. 配制磷酸盐缓冲液（ 0.17M KH2PO4 ， 0.72M K2HPO4 ） 100mL 溶解 2.31g KH2PO4 和 2.54g K2HPO4 于 90mL 的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌2. 称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。Tryptone12gYeast Extract24gGlycerol4mL充分搅拌溶解。1L 后，高温高压灭菌。3. 加入约 800mL 的去离子水，4. 加去离子水将培养基定容至5. 待溶液冷却至60C以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲 液和 1mL Ampicill

20、in （ 100mg/mL ）。6. 均匀混合后4C保存。8、SOB 培养基组份浓度 2（ W/V） Tryptone0.5（ W/V ） Yeast Extract0.05（ W /V ） NaCl2.5mMKCl10mMMgCl2配制量 1L配置方法1. 配制 250mM KCl 溶液。 在 90mL 的去离子水中溶解 1.86g KCl 后，定容至 100mL 。2. 配制 2M MgCl2 溶液。在 90mL 的去离子水中溶解 19g MgCl2 后，定容至 100mL ，高温高压灭菌。3. 称取下列试剂，置于 1L 烧杯中Tryptone20gYeast Extract5gNaCl0

21、.5g4. 加入约 800mL 的去离子水， 充分搅拌溶解5 量取 10mL 250 mM KCl 溶液，加入到烧杯中6. 滴加 5N NaOH 溶液（约 0.2mL） ，调节 pH 值至 7.07. 加入去离子水将培养基定容至 1L9. 使用前加入5mL 灭菌的 2M MgCl2 溶液。3. 滴加 5N NaOH 溶液(约 0.2mL)，调节 pH 值至 7.0。9、 SOC 培养基组份浓度 2%（ W/V）Tryptone4. .加水离子水将培养基定容至1L。0.5%( W/V)Yeast Extract5.高温高压后，4C保存。0.05%( W /V)NaCl13、 NZYM 培养基组份

22、浓度0.5%（ W/V ）Yeast Extract2.5mMKCl1 %( W /V )NZ 胺10mMMgCl20.5%( W /V)NaCl20mM葡萄糖0.2%(W /V)MgSO4?7H2O配制量 100mL配置方法 NZYM 培养基除不含 Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）配置方法外，其他成份与 NZCYM 培养基相同。1.配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中， 充14、 NZM 培养基组份浓度1 %（ W /V）NZ胺分溶解后定容至100mL，用 0.22 滤膜过滤除菌。0.5%( W /V)NaCl2.向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖

23、溶液2mL ,均匀0.2%(W /V)MgSO4?7H2O混合。配置方法 NZM培养基除不含 Yeast Extract （酵母提取物）外, 其他成份与 NZYM 培养基相同。10、 2xYT 培养基组份浓度 1.6%( W/V ) Tryptone，1 %( W/V )15、一般固体培养基的 配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好Yeast Extract， 0.5%( W/V) NaCl液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。配制量 1L配制Agar （琼脂：铺制平板用）15g/L配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Agar （琼脂：配制顶层琼脂用）7g/LTrypto

24、ne16gAgarose （琼脂糖：铺制平板用）15 g/LYeast Extract10gAgarose （琼脂糖：配制顶层琼脂用）7g/LNaCl5g2.高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使3. 4C保存。琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。3.待培养基冷却至50 60 C时，加入热不稳定物质（如 抗生素）,摇动容器充分混匀。4.铺制平板（3035mL培养基/90mm 培养皿）。2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加 1N KOH ，调节 pH 值至 7.0。4. .加水离子水将培养基定容至 1L。5. 高温高压后，4C保存。配制量 1L

25、平板培养基0.5%( W/V)Yeast Extract配置方法1.称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。1 %( W/V )NaClTryptone20g0.1mg/mLAmpicillinYeast Extract5g0.5%( W /V)IPTGMgSO4?7H2O5g0.04mg/mLX-Gal2.加入约 800mL 的去离子水， 充分搅拌溶解。1.5 %( W /V )Agar配制量 1L3.滴加1N KOH，调节pH值至7.5。配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。4.加水离子水将培养基定容至 1L。Tryptone10g5.高温高压后，4C保存。Yeast Extract5gN

26、ZCYM 培养基 组份浓度0.5%（W/V）Yeast ExtractNaCl10gW/V) Yeast Extract， 0.5%( W/V) MgSO4?7H2O/V )Tryptone0.1%( W/V )Casamino Acid2.加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。1 %( W /V )NZ 胺3.滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。0.5%( W /V )NaCl4.加水离子水将培养基定容至 1L 后，加入 15gAgar。0.2%(W /V)MgSO4?7H2O5.高温高压灭菌后，冷却至 60 C左右。6. 加入 1mL Ampicillin

27、(100mg/mL)、 1mL IPTG配制量 1L配置方法 1.称取下列试剂，置于 1L 烧杯中Yeast Extract5gCasamino Acid1gNZ 胺10gNaCl5gMgSO4?7H2O2g（24mg/mL ）、2mL X-Gal （ 20mg/mL）后均匀混合。7. 铺制平板（3035mL培养基/90mm培养基）8. 4 C保存平板。17、 TB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解1.2%(W /V)Tryptone平板培养基 2.4%（W/V)Yeast Extract0.4%( W/V )Glycerol11、 bx

28、 broth培养基 组份浓度 2%( W/V ) Tryptone , 0.5%16、 LB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度1( WKH2PO4K2HPO4AmpicillinIPTGX-GalAgar0.17M KH2PO4 ， 0.72M10、 0.1mol/L 蔗糖溶液11、 20%乙酸溶液组份浓度 20%配制量 1.2L配置方法 量取冰乙酸300mL ，用去离子水稀释至1200mL17mM72mM0.1mg/mL0.024mg/mL0.04mg/mL1.5 （ W /V ）配制量 1L配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液（K2HPO4 ） 100mL 。2. 称取下列试剂，置于 1L

29、 烧杯中。Tryptone12gYeast Extract24gGlycerol4mL3. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。4. 加水离子水将培养基定容至 1L 后， 加入 15gAgar。5. 高温高压灭菌后，冷却至 60 C左右。6. 加入 100mL 的上述灭菌磷酸盐缓冲液、 1mLAmpicillin （100mg/mL）、1mL IPTG （24mg/mL ）、 2mL X-Gal （20mg/mL ）后均匀混合。7. 铺制平板（3035mL培养基/90mm培养基）。8. 4 C保存平板。生物化学实验常用试剂的配制方法1、0.5mol/L 氢氧化钠溶液 组份浓度 0.5

30、mol/L配制量 2L配置方法 1. 准确称取氢氧化钠 40g。2. 用去离子水溶解并稀释至 2L 。2、0.5mol/L 盐酸溶液组份浓度 0.5mol/L配制量 2L配置方法 1.准确量取盐酸 83.4mL 。2. 用去离子水稀释至 2L。4、0.2葡萄糖标准溶液组份浓度 0.2配制量 1L配置方法1称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70C干燥2小时2. 干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。3. 准确称取葡萄糖 2.000g。4. 用去离子水溶解并定容至 1L5. 于4 C保存。5、 250卩g/mL牛血清组份浓度 250卩g/mL白蛋白标准液配制量 2L配置方法 1.准确称取 25

31、0mg 标准牛血清白蛋白。2.用 0.03mol/LpH7.8 的磷酸缓冲液溶解并定容至 1L3.4 C保存。6、Folin 试剂甲配置方法 1.称取 10g 氢氧化钠溶于 400mL 去离子水中，加入 50g 无水碳酸钠，溶解，待用。2.称取 0.5g 酒石酸钾钠，溶于 80mL 去离子水中，加入 0.25g 硫酸铜 ?5水，溶解。3. 将 1 ：2：去离子水按 20：4：1 的比例混合即可。4. 4C保存，可用一周。7、 Folin 试剂乙配置方法1. 在 500mL 的磨口回流装置内加入钨酸钠 ?2水 25.0359g，钼酸钠?2水6.2526g,去离子水175mL , 85%磷酸12.

32、5mL , 浓盐酸25mL ,充分混合。2. 回流10小时，再加硫酸锂 37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。3. 然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。4. 于棕色瓶中保存，可使用多年注意：上述制备地 Folin 试剂乙地贮备液浓度一般在 2mol/L 左 右， 几种操作方案都是把 Folin 试剂乙稀释至 1mol/L 的 浓度作为应用 液，我们这时是把贮备液于使用前稀释 18 倍，使之浓度为 0.1mol/L 略高。这种稀释 18 倍后的 Folin 试剂乙就是上文称之为的 “应用 液”。 Folin 试剂乙贮备 液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。 用 F

33、olin 试剂乙去滴定 1mol/L 左右的标准氢氧化钠溶液， 当溶液颜 色由红变为紫灰， 再突然变成墨绿即为终点， 如果用氢氧化钠去滴 定 Folin 试剂乙， 终点不太好掌握， 溶液地颜色是由浅黄变为浅绿， 再变为灰紫色为终点。8 、 DNS 试剂配置方法1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液 200mL 。（ 3， 5-二硝基水杨酸试剂）2. 将 3， 5-二硝基水杨酸溶解， 然后加入酒石酸钾钠 300g。3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至 2000mL，棕色瓶保存。9、5%蔗糖溶液组份浓度 5%配制量 1L配置方法 称取蔗糖50g，用去离子水溶解定容至 1L组

34、份浓度 0.1mol/L配制量 1L配置方法称取蔗糖34.230g，用去离子水溶解并定容至 1L12、30%（ W/V ） Acrylamide组份浓度 30%（ W/V ） Acrylamide 0.05 %配制量 1L配置方法 1.称量下列试剂，置于 1L 烧杯中Acrylamide 290g BIS10g2. 向烧杯中加入约 600mL 的去离子水，充分搅拌溶解3. 加入去离子水将溶液定容至1L ,用0.45卩!滤膜滤去杂质4. 于棕色瓶中4 C保存。注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作， 因为有可能含有

35、少量的未聚合成份。13、40( W/V ) Acrylamide组份浓度 40( W/V ) Acrylamide 0.05配制量 1L配置方法 1.称量下列试剂，置于 1L 烧杯中Acrylamide 380gBIS 20g2. 向烧杯中加入约 600mL 的去离子水， 充分搅拌溶解3加入去离子水将溶液定容至1L ,用0.45 滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中4 C保存。注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作 用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎 操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。14、 10( W/V )过硫酸铵组份浓度 10(W/V )过硫酸铵配

36、制量 10mL配置方法 1.称取 1g 过硫酸铵。2. 加入 10mL 的去离子水后搅拌溶解。3. 贮存于 4C。注意：10%过硫酸胺溶液在4C保存时间可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。15、考马斯亮蓝 R-250 染色液S份浓度0.1 %(W/V )考马斯亮蓝R-250, 25% (V/V )异丙醇，10 %( V/V )冰醋酸配制量 1L配置方法1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。2. 量取 250mL 的异丙醇加入上述烧杯中， 搅拌溶解。3. 加入 100mL 的冰乙醋酸，均匀搅拌。4. 加入 650mL 的去离子水，均匀搅拌。5. 用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。1

37、6、考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度10%( V/V )醋酸，5%( V/V )乙醇配制量 1L配置方法1.量取下列溶液，置于 1L烧杯中。醋酸100mL乙醇50mLdH2O850mL2.充分混合后使用。17、凝胶固定液组份浓度50%( V/V )甲醇，10%( V/V )醋酸(SDS-PAGE 银氨染色用 )配制量 100L耳己置方法1.量取下列溶液，置于 1L烧杯中。甲醇500mL醋酸100mL配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。甲醇 50mL戊二醛 10mLdH2O 40mL2. 均匀混合后室温保存。19、凝胶染色液组份浓度0.4%( W/V )硝酸银，1%( V/V )浓氨水，

38、(SDS-PAGE 银氨染色用 ) 0.04%( W/V )氢氧化钠配制量 100LE置方法1量取下列试剂，加入 100200mL试剂瓶中。20%硝酸银 2mL浓氨水 1mL4 %氢氧化钠 1mLdH2O 96mL2. 均匀混合。 该溶液应为无色透明状。 如氨水浓度过低时溶液会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。3. 本染色液应现用现配，不宜保存。20、显影液组份浓度0.005%( V/V )柠檬酸，0.02 %( V/V )甲醛(SDS-PAGE 银氨染色用 )配制量 1LE置方法1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。柠檬酸 50mg甲醛 0.2mL2. 加入 1L 去离子水后，摇动混合后

39、溶解。3. 室温保存。21、 45%乙醇溶液组份浓度 45%配制量 1LE置方法 量取无水乙醇450mL，加入去离子水 550mL，混匀。22、 5%的十二烷基硫酸钠溶液组份浓度 5%(W/V )配制量 0.1L配置方法：称取5.0g十二烷基硫酸钠，溶于100mL4 %的乙醇溶液中。23、三氯甲烷 -异戊醇混合试剂配置方法 取 500mL 三氯甲烷试剂， 加入 21mL 异戊醇试剂， 混匀24、 1.6%乙醛溶液组份浓度 1.6%配制量 0.1LE置方法 取47 %乙醛3.4mL，用去离子水定容至 100mL。25、二苯胺试剂四己置方法1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中，2.

40、 再加入 8mL 高氯酸混匀。3. 临用前加入 0.8mL 1.6%乙醛溶液。注意：配制完成后试剂应为无色。26、15%三氯乙酸溶液组份浓度 15%dH2O 400mL2. 均匀混合后室温保存。18、凝胶处理液S份浓度 50%( V/V )甲醇，10%( V/V )戊二醛(SDS-PAGE 银氨染色用 ) 配制量 1L配制量 2L配置方法称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至27、1%谷氨酸溶液组份浓度 1%2000mL2、洗脱液（含 0.15mol/L 氯 化钠的 0.005mol/L pH 6.0 的磷酸缓冲液）配制量 0.5L配置方法 1.称取 5g 谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解

41、。2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。3. 最后用去离子水定容至 0.5L 。28、 1丙酮酸溶液组份浓度1配制量 0.5L配置方法 1.称取 5g 丙氨酸， 先用适量得用去离子水溶解。2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。3. 最后用去离子水定容至 0.5L 。29、 0.1的碳酸氢钾溶液组份浓度 0.1配制量 0.5L配置方法 称取碳酸氢钾0.5g,用去离子水溶解定容至 0.5L。30、 0.05的碘乙酸溶液组份浓度 0.05配制量 0.25L配置方法 称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至 0.25L。31、 Locke 氏溶液配制量 2L配置方法 称取18g氯化钠,0.84g氯化钾，4

42、8g氯化钙,0.3g碳酸氢钠， 2g 葡萄糖，用去离子水溶解定容至 2000mL。32、 0.2mol/L 的丁酸溶液组份浓度 0.2mol/L配制量 1L配置方法 1. 量取 18mL 正丁酸试剂。2. 用 1mol/L 的氢氧化钠中和。3. 再用去离子水定容至 1L。33、0.1mol/L 的硫代硫酸钠溶液 组份浓度 0.1mol/L配制量 10L配置方法 称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至 10L。34、 0.1mol/L 的碘溶液组份浓度 0.1mol/L配制量 1L配置方法1称取碘12.7g和碘化钾25g。2.用去离子水溶解并定容至 1L。3. 用 0.1mol/L 的

43、硫代硫酸钠标定。35、 10氢氧化钠溶液组份浓度 10配制量 2L配置方法 称取 200g 氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至 2L。36、 10盐酸溶液组份浓度 10配制量 0.2L配置方法 量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至 0.2mL。37、 0.1标准丙氨酸溶液组份浓度 0.1配制量 0.5L配置方法称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至 0.5mL。38、 0.1标准谷氨酸溶液组份浓度 0.1配制量 0.5L配置方法称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至500mL39、 0.1水合茚三酮乙醇溶液组份浓度 0.1配制量 1L配置方法 称取 1g 水合茚三酮试剂， 溶于 100

44、0mL 无水乙醇中。40、酚溶液配置方法 在大烧杯中加入 80mL 去离子水，再加入 300g 苯酚， 在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL 去离子水的 1000mL 分液漏斗内， 轻轻振荡混合， 使其成为 乳状液。静止710小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水 饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。41、 0.5淀粉溶液组份浓度 0.5配制量 0.1L配置方法 称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至 0.1L。42、对羟基联苯试剂配置方法 称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5 %氢氧化钠溶液中，配制成 1.5的溶液。 若对羟基联苯颜色较深， 应

45、用丙酮或 无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶， 应摇匀后使用。生物化学实验常用缓冲液的配制方法1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液 组份浓度 0.2mol/LpH 6.0）配制量 1L配置方法 1. 称取磷酸氢二钠 ?12 水 8.82 g。2. 称取磷酸二氢钠 ?2水 27.34g。3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存注意：此为母液，使用时稀释 40倍使用组份浓度 0.15mol/L配制量 10L配置方法 1.称取氯化钠 87.66g。2. 用 0.2mol/L pH6.0 的 磷酸缓冲液 250mL 溶解3. 用去离子水稀释至10 L。室温保 存。3、 0.3mol/L 磷

46、酸缓冲液组份浓度 0.3mol/L（pH7.8）配制量 0.5L配置方法1.准确称取磷酸氢二钠？12水49.150g2.磷酸二氢钠 ?2水 2.000g。3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。注意：此为母液，使用时稀释 10 倍使用。4、 0.2mol/L 乙酸缓冲液组份浓度 0.2mol/L（pH4.6 ）配制量 2L配置方法 1.准确称取乙酸钠 ?3水 54.44g。2. 加入 23mL 冰乙酸，溶解。3. 用去离子水溶解并定容至2L。4 C保存.5、0.2mol/L 磷酸 -柠檬酸组份浓度 0.2mol/L缓冲液 配制量 各 1L（pH 2.6 、 4.6、6.6）配置方法 1

47、. 母液 A （ 0.2mol/L 的 Na2HPO4 溶液）：称取 Na2HPO4?12 水 143.256g， 用去离子水定容至 2L 。2. 母液 B （0.1mol/L 的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸 ?1 水 42.028g 用去离子水溶解定容至 2L 。3. pH2.6、4.6、6.6 的三种缓冲液如下表配制：pH 值 A ( mL)B( mL )2.6109.0891.04.6467.5532.56.6727.5272.5按上表混匀后，4 C保存。6、20 XSSC缓冲液配制量1LpH7.0 ）配置方法 1.准确称取 175.2g 氯化钠2.准确称取 88.2g 柠檬酸钠 ?2 水。

48、3. 溶解于 800mL 去离子水中。4. 加入数滴 10mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 值至 7.05. 加去离子水定容至 1L 。注意：按实验需要可分装后高压灭菌。10 SSCX 5WSC、1XSSC可由20 SSC做相应稀释得到。7、0.15mol/L 氯化钠 -组份浓度 0.15mol/L乙二胺四乙酸二钠配制量 1L缓冲液配置方法1.准确称取氯化钠 8.77g。（pH8.0 ）2. 称取乙二胺四乙酸二钠 37.2g。3. 溶于 800mL 去离子水中。 4.用固体的氢氧化钠调 pH 值为 8.0。5. 加去离子水定容至 1L。8、1/15mol/L 的磷酸盐组份浓度 0.15mol

49、/L缓冲液配制量 1L（pH7.6 ）配置方法1溶液甲（1/15mol/L 的 KH2PO4溶液）：称取 KH2PO4 9.078g，用 去离子水溶解定容至 1L。2.溶液乙（1/15mol/L 的 Na2HPO4溶液）：称取 Na2HPO4? 2水 11.876g（或磷酸氢二钠？12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将和按1.4 : 8.6比例混合即可9、5XTris-GlycineBuffer组份浓度 0.125M Tris , 1.25MGlycine ， 0.5( w/v) SDSSDS-PAGE 电泳缓冲液）配制量1L配置方法 1.称取下列试剂，

50、置于 1L 烧杯中。Tris15.1gGlycine94gSDS5.0g5 % （W/V ）&巯基乙醇配制量 5mL配置方法 1.量取下列试剂，置于 10mL 塑料离心管中。1M Tris-HCl 1.25mLSDS 0.5gBPB 25mg 甘油 2.5mL2. 加入去离子水溶解后定容至5mL。3. 小份（500 11份）分装后，于室温保存。4使用前将25 1的2-ME加到每小份中。5.加入 2-ME 的 Loading Buffer 可在室温下保存一个月左右生物化学实验常用柱料数据及性质1 、 DEAE 阴离子交换纤维素（ 1 ）纤维素的处理 取纤维素干品用蒸馏水浸泡，充分溶涨并搅拌均匀，

51、 过夜。次日再搅匀， 静止 30min 留下沉集部分 （重复 3次）， 用真空泵抽干。然后用适量的 0.5mol/L 的氢氧化钠溶液浸 泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；再用适量的 0.5mol/L 的盐酸溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；重复用 0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡 30min，抽干，蒸馏水洗至 中性。最后用 0.005mol/L pH6.0 的磷酸缓冲液浸泡待用。（ 2）纤维素的重生回收的纤维素先用 0.5mol/L 氯化钠 -0.5mol/L 氢氧化钠 溶液浸泡，再按上述（ 1 ）操作处理，即可再次投入使用。（ 3）纤维素的保存回收后，用 0.5mol/L 氢氧化钠溶液浸泡 30min 后，蒸 馏水洗至中性，抽干，于鼓风干燥箱中60 C烘干后，保存。2、SephadexG型葡聚糖凝胶（ 1 ）凝胶的特性要点葡聚糖 G 后面的数字代表不同的交联度， 数值越大交联度越小， 吸 水量越大。其数值大致为吸水量X的10倍。Sephadex对碱和弱酸稳定（在 0.1mol/L盐酸