植物生理生化实验教学大纲

1、植物生理生化实验课程教学大纲一、课程基本概况1. 课程名称：植物生理生化实验2. 课程名称（英文）： Experiment s of Plant physiology and Biochemistry3. 课程编号：B160354. 课程总学时：60学时（均为实验教学）5. 课程学分：3学分6. 课程分类：必修课7. 开设学期：第3、4学期8. 适用专业：园艺、农学、植物保护、植物生物技术等农科类本科专业。9. 先行课：物理学、化学、分析化学、植物生理生化等。二、课程性质、目的和任务本课程是植物生理学的配套课程，是农科类各专业必修的专业基础课，属于以植物为对象各专业的工具课程之一。其先行课为物

2、理学、化学、分析化学、植物学、生理生化。该课程主要介绍植 物生理生化的实验研究技术以及常用植物生理生化指标的分析方法及原理，为专业课的学习与科学 研究工作提供技术支持与手段。通过本课程的学习，要求学生掌握植物生理生化的一些基本实验技术与原理，熟悉植物生理生化常规仪器的使用方法，能独立设计并完成一般性实验内容，操作规范，能够完成以植物为材料的 基本的科学研究工作。从而达到更好地利用植物、人为地影响和改造植物，使之更大限度的为人类 服务的目的。三、主要内容、重点及难点实验一应用纸层析分离鉴定氨基酸（一）目的要求：学习纸层析分离技术，掌握纸层析分离鉴定氨基酸的原理和方法。（二）重点：纸层析分离鉴定氨

3、基酸的原理、操作方法、结果分析。（三）难点 点样适量、分析确定层析结果。实验二氨基酸含量的测定一一茚三酮比色法（一）目的要求：掌握茚三酮比色法测定氨基酸含量的原理和方法；学习分光光度计的使用；学 习标准曲线的制作。（二）重点：实验原理和操作方法（三）难点：样品提取、标准曲线制作和使用。实验三可溶性糖含量的测定一一蒽酮法（一）目的要求：掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法，了解可溶性糖含量这一生理指标 的意义。练习分光光度计的使用和标准曲线的制作。（二）重点：实验原理和方法；蒽酮试剂的配制。（三）难点：样品提取及适度稀释，标准曲线制作和使用。实验四蛋白质含量的测定（一）方法：考马斯亮蓝比色法；

4、福林酚比色法（二）目的要求：掌握测定蛋白质含量的原理和方法，了解蛋白含量测定的意义及使用方面。练 习分光光度计的使用和标准曲线的制作。（三）重点：了解实验原理，正确运用方法。（四）难点：样品提取及适度稀释，标准曲线制作和使用。实验五酶的基本性质（一）目的要求：通过实验，进一步理解酶的重要性质和影响酶活性的条件。（二）重点：酶的专一性，温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响，鉴定酶促反应速度快慢的依据和方法（三）难点：鉴定酶促反应速度快慢的依据和方法。实验六RNA的提制（一）目的要求：掌握浓盐法提制RNA的原理和方法，进一步理解 RNA的理化性质。（二）重点：理解实验原理和各步操作的方法、意义

5、和目的。（三）难点：理解实验原理和各步操作的方法、意义和目的。实验七RNA含量的测定（一）目的要求：掌握苔黑酚法测定RNA含量的原理和方法；学习 RNA含量和纯度的计算方法及计算原理；进一步练习分光光度计的使用和标准曲线法的应用。（二）重点：掌握苔黑酚法测定RNA含量的原理和方法；学习 RNA含量和纯度的计算方法及计算原理。（三）难点：正确称量，掌握测定原理。实验八淀粉酶活性的测定（一）目的要求：了解 a淀粉酶和B淀粉酶催化的产物和作用条件，掌握a淀粉酶活性、B淀粉酶活性和淀粉酶总活性的测定原理和方法；进一步理解酶的作用条件。（二）重点：淀粉酶活性的测定原理和方法，进一步理解酶的作用条件。（三

6、）难点：通过控制实验条件，准确测定不同淀粉酶的活性。实验九电泳法分离酶或蛋白质（一）方法：醋酸纤维薄膜电泳；聚丙烯酰胺凝胶电泳（二）目的要求：掌握电泳的概念、原理以及电泳技术（三）重点：电泳的原理和电泳技术（四）难点：电泳技术的掌握实验十谷物种子中赖氨酸含量测定（一）方法：茚三酮溶液显色法；染料结合（DBL ）法；三硝基苯磺酸（PDAB ）法（二）目的要求：掌握测定原理、方法及技术（三）重点：原理及标准曲线制作（四）难点：材料处理实验一 植物组织水势的测定（一）方法：小液流法（二）目的要求：学习并掌握小液流法植物组织水势的测定方法，理解水分在细胞内外的转移的 条件和水势的概念。（三）重点：测定

7、原理和方法（四）难点：根据试材确定浓度系列；检验操作方法。实验十二 呼吸强度的测定（一）方法：小篮子法；氧电极法。（二）目的要求：掌握呼吸强度的测定原理和方法；学习滴定管的使用。（三）重点：测定原理和方法。（四）难点：滴定管的使用；滴定终点的把握。实验十三叶绿素含量的测定（一）方法：光电比色法（二）目的要求：掌握分光光度法测定叶绿素含量的原理和方法；学习分光光度计的使用。（三）重点：叶绿素的提取、含量计算。（四）难点：叶绿素的提取、定容；按要求稀释到适当浓度；正确地使用分光光度计。实验十四 光合色素的提取分离与理化性质（一）目的要求：进一步理解光合色素的重要理化性质；学习鉴定理化性质的方法。（

8、二）重点：光合色素的种类；光合色素的化学与光学性质；纸层析分离鉴定光合色素的方法。（三）难点：皂化反应；吸收光谱。实验十五硝酸还原酶活力测定（一）方法：对-氨基苯磺酸法。（二）目的要求：掌握测定硝酸还原酶活力的原理及方法，加深对硝酸还原酶在植物体内重要作 用的认识；学习真空泵的使用；练习标准曲线的制作。（三）重点：测定原理和方法；真空泵的使用；标准曲线的制作。（四）难点：理解测定原理；制作出符合要求的标准曲线；理解各步操作的目的性。实验十六种子生活力的测定（一）方法（三种方法同时做）：红墨水染色法；TTC染色法；BTB显色法。（二）目的要求：理解测定原理；学会用三种方法测定种子生活力。（三）重

9、点：三种方法的原理与操作；各步注意事项。（四）难点：在实践中能根据具体种子的特点选择适用的测定方法；能正确判别种子的生活力。实验十七超氧化物歧化酶（SOD活性测定（一）方法：NBT光化还原法。（二）目的要求：认识SOD的作用及测定SOD活性的意义，掌握 SOD的测定原理和方法。（三）重点：掌握测定原理和方法；理解照光的意义。（四）难点：测定原理；具体使用中能根据酶活决定加入提取液的数量；各种试剂的作用；实验 条件的控制。实验十八过氧化物酶（POD活性的测定（一）方法：联苯胺氧化法；愈创木酚法。（二）目的要求：认识过氧化物酶的作用，掌握过氧化物酶活性的测定原理和方法。（三）重点：明了测定原理；掌

10、握测定方法。（四）难点：具体使用中能根据酶活决定加入提取液的数量及三滤乙酸的量；准确保温。实验十九 丙二醛（POD含量的测定（一）方法：硫代巴比妥酸法。（二）目的要求：认识丙二醛的来源、作用及测定意义，掌握测定原理和方法。（三）重点：测定原理和方法（四）难点：明了测定原理；掌握测定方法。实验二十植物细胞差别透性的测定（一）方法：电导率仪法。（二）目的要求：了解逆境对细胞膜透性的影响，掌握电导仪法测定细胞膜透性的原理和方法； 学习电导仪的使用。（三）重点：明了测定原理；掌握测定方法；学会使用电导率仪。（四）难点：正确控制实验环节，正确使用电导率仪。实验二一 光合强度的测定（一）方法：改良半叶法；

11、氧电极法；光合测定仪法。（二）目的要求：学习不同方法测定光合强度的原理；进一步理解总光合强度和净光合强度；掌 握测定方法；要求能根据需要和条件独立完成光合强度测定。（三）重点：相关仪器的使用、测定原理和方法；实验环节的条件控制。（四）难点：正确使用仪器和测定方法。 实验二十二脯氨酸含量影响（一）方法：酸性茚三酮法；磺基水杨酸法。（二）目的要求：掌握脯氨酸的测定方法及原理；能根据需要独立完成测定过程。（三）重点：标准曲线的制作、植物材料的处理。（四）难点：标准曲线的制作、植物材料的处理。实验二十三 植物根系活力的测定（一）方法：TTC比色法；a -萘胺氧化法。（二）目的要求：理解根系活力的内涵，

12、掌握根系活力的测定原理和方法。（三）重点：实验原理和方法（四）难点：操作方法实验二十四 维生素C含量的测定（一）方法：滴定法；二苯胺萃取比色法；2, 4二硝基苯肼比色法；荧光法。（二）目的要求：掌握测定原理和方法；能根据需要和条件选择适当的测定方法。（三）重点：相关仪器的使用、测定原理和方法；实验环节的条件控制。（四）难点：正确掌握操作方法。实验二十五 综合性实验一一植物组织中 POD的提取分离纯化与鉴定（一）方法：采用分段盐析法提取分离POD用透析法脱盐；用福林酚法测定蛋白质含量；愈创木酚法测定POD活性，计算比活力和回收率；用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离鉴定POD同工酶。（二）目的要求：掌握实验

13、的基本原理和方法；能设计实验操作流程。（三）重点：相关仪器的使用、测定原理和方法；各实验环节的衔接。（四）难点：实验技术的综合运用。实验二十六 设计性实验一一植物组织衰老过程中的生理变化（一）方法和实验流程：设计使植物组织衰老的处理方法；根据理论知识，设计在衰老的不同阶段测定与衰老有关的生理指标；确定各生理指标的测定方法；写出实验设计方案；配制药品；取材、测定；写出实验报告。（二）目的要求：学习实验设计方法，初步培养科学研究的基本能力。（三）重点：实验设计、相关仪器的使用、测定原理和方法；各实验环节的衔接。（四）难点：试验设计、实验技术的综合运用。四、学时分配表教学时数分配顺 序授课内容学时分

14、配小计生化实实验一应用纸层析分离鉴定氨基酸44验部分实验二氨基酸含量的测定一-茚三酮比色法33（第三实验三可溶性糖含量的测定-恩酮法33学期与实验四蛋白质含量的测定一-福林酚法33生化理实验五RNA的提制44论课教实验六RNA含量的测定33学平行实验七淀粉酶活性的测定44开课）实验八聚丙烯酰胺凝胶电泳分离同工酶66综合性实验 （任选）将蛋白质含量测定、酶活性测定、聚 丙烯酰胺凝胶电泳三项实验内容综合 起来，开设综合性实验植物组织POD的提取分离纯化与鉴定。1818备选实验一酶的基本性质44备选实验二谷物种子中赖氨酸含量测定33实验十一植物细胞水势测定33实验十二呼吸强度测定33实验十三光合色素

15、含量测疋33实验十四光合色素的提取分离与理化性质33生理实 验部分（第四 学期与 植物生 理理论 课教学 平行开课）实验十五硝酸还原酶活性测定33实验十六种子生活力快速测定33实验十七超氧化物岐化酶（SOD活性测定33实验十八过氧化物酶（POD活性测定22实验十九丙二醛（MDA含量测定33实验二十细胞差别透性测定44备选实验一光合强度测定44备选实验二脯氨酸含量测定33备选实验三根系活力测定33备选实验四维生素C含量测定33设计性实验（任选）将光合色素含量测定、POD SOD活性 测定、MDA含量测定和细胞差别透性测 定结合起来，开设设计性实验植物组 织衰老过程中的生理变化。1515注：根据需

16、要和实验室条件从中选择60学时实验，生理、生化部分各30学时五、课程教学的基本要求和主要环节（一）实验教学的基本要求：1坚持精讲多练的原则，讲授、演示、指导与学生独立设计独立完成相结合，让学生成为实 验课主体。2. 将能力培养做为实验课的主要目标追求。一方面要求学生掌握实验原理，能根据实验原理适当调整实验步骤；另一方面训练学生能根据专业研究的需要，能独立地从选择实验内容、确定实验 方法、试剂配制、实验条件控制、仪器使用等环节完成实验内容；3 把培养学生动手能力做为实验课重点之一，达到规范操作目的。4实验内容可根据需要和实验室条件在大纲范围内选择1011项，并应根据需要和实验室条件启动备选实验。

17、（二）教学主要环节1 实验教学：与相应理论课相伴进行。2 考试及成绩构成：本课程为考查课。成绩由两部分构成，一是实验报告成绩，占总成绩的30%50% 二是期末考试成绩，占总成绩的50%70%六、本课程与其它课程的联系与分工本课程与物理学、化学、分析化学、植物学、生理生化理论课有重要联系，与化学尤其是分析 化学的联系尤为重要。化学课为本课程奠定试剂配制、实验室基本操作方法与操作规范的基础，本课程运用这些知识 与技能基础完成教学，并在教学中使之巩固和强化；植物学为以植物为材料试材准备和取舍提供基础知识；植物生理生化为本课程的学习提供必要的理论指导，本课程的学习加深对生理生化知识的理解，并使深奥的理

18、论知识具有可操作性，甚至使之物质化。七、建议教材与参考教材建议教材：刘永军主编植物生理生化实验，中国农业科技出版社， 2002年。参考教材：1. 李合生主编植物生理生化实验原理及技术 北京：高等教育出版社，2000.2. 李建武等主编生物化学实验原理和方法北京：北京大学出版社，2000.3. 白宝璋等植物生理学测试技术中国科学技术出版社，19934西北农业大学基础生物化学实验指导陕西科学技术出版社，19865张志良主编植物生理学实验指导（第二版）北京：中国农业出版社，2000.6.邹琦主编植物生理学实验指导北京：高等教育出版社，1990.7朱广廉等主编植物生理学实验北京：北京大学出版社，199

19、0 .9. 李秀锦主编实用生化实验技术北京：中国农业出版社，1995.10. 刘福岭编著食品物理与化学分析方法北京：轻工业出版社，1987.11. 张承圭等合编生物化学仪器分析与技术北京：高等教育出版社，1990.12 .何忠孝主编电泳北京：科技出版社，1999.13华东师范大学生物系植物生理教研组编.植物生理学实验指导，人民教育出版社，198014. 植物生理与分子生物学报15. 植物生理学通讯八、责任人撰稿人：郭守华参加人：杨晓玲、杨晴、刘永军出师表两汉：诸葛亮先帝创业未半而中道崩殂，今天下三分，益州疲弊，此诚危急存亡之秋也。然侍卫之臣不懈于 内，忠志之士忘身于外者，盖追先帝之殊遇，欲报之于陛下也。诚宜开张圣听，以光先帝遗德，恢 弘志士之气，不宜妄自菲薄，引喻失义，以塞忠谏之路也。宫中府中，