《疫学检测方法》ppt课件

1、 免疫学检测方法免疫学检测方法 n免疫学检测方法主要包括酶联免疫吸附免疫学检测方法主要包括酶联免疫吸附检测和放射免疫技术检测和放射免疫技术,该方面的研讨获得该方面的研讨获得了长足的开展。由于该方法操作简单，了长足的开展。由于该方法操作简单，前处置简化，检测快速、准确、敏感，前处置简化，检测快速、准确、敏感，检验本钱低，检测容量大，可同时进展检验本钱低，检测容量大，可同时进展大批量样品检测。因此具有潜在的广大批量样品检测。因此具有潜在的广泛运用价值。泛运用价值。n免疫学检测技术是近几年开展起来的新技术，主要包括放射免疫技术、免疫酶技术、免疫荧光技术和免疫电镜技术等，现已广泛地运用于各个领域中。n

2、10多年前，一些研讨者开场尝试把放射免疫和免疫酶技术用于食品农药残留检测，并获得极大胜利。 n其中运用最多的是固相放射免疫饱和分析技术和酶联免疫吸附检测技术。n在这些检测技术中其中心反响都是抗原抗体反响。所谓抗原是指一切具有抗原性的物质：n抗体(又称免疫球蛋白)，是由抗原刺激机体而产生的特异性球蛋白。 n作为抗原(完全抗原)需求包括两个方面的特性：免疫原性和反响原性。n免疫原性是指可以刺激机体产生抗体或诱导机体构成免疫回答反响的特性。n反响原性是指可以与其诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞发生反响的特性。完全抗原是一些大分子物质(分子量大于l万)，如蛋白质等。 n假设一种抗原只需反响原性而没有免疫原

3、性那么称为不完全抗原(半抗原)，它通常是一些小分子物质(分子量小于1000)，必需与其它大分子物质结合后才具有免疫原性。各种农药属于这类物质，不具有免疫原性因此农药残留的免疫学方法检测要较医学等领域中致病微生物等完全抗原的免疫学方法检测复杂得多。 n农药残留酶联免疫，首先要把农药与载体蛋白衔接起来，构成农药一载体蛋白结合物免疫原，才可用来免疫动物制备抗体。因此能否合成稳定、具有良好免疫原性的农药一载体蛋白结合物是整个农药残留免疫学检测技术研讨的关键。农药免疫学检测技术的原理农药免疫学检测技术的原理n农药免疫学检测运用最多的两种固相免疫技术是固相放射免疫技术和酶联免疫吸附检测技术。n固相放射免疫

4、技术是采用标志抗原与未知抗原竞争限定量的固相抗体结合位点，然后经过测定抗原一抗体结合物中放射性强度的改动，确定未知抗原的存在及含量。 酶联免疫 ELISAnELISA是经过在适宜的载体上，酶标限定量抗原与未知抗原竞争固相抗体结合位点或固相抗原与未知抗原竞争限定量的标志抗体结合位点，构成抗体复合物。在一定底物参与下，复合物上的酶催化底物，使其水解、氧化或复原成另一种带色物质。由于酶的降解底物与显色是成正比的，经过眼观或分光光度计测定，从而确定能否存在未知抗原或含量。 n但由于放射免疫技术涉及放射资料的运用和经常制备放射标志物，检测设备也比较昂贵，所以越来越多地被较为平安、简便的ELISA方法取代

5、。n在利用免疫技术进展农药定量检测时，需求制备规范曲线，之后根据制备好的规范曲线即可对农药残留进展定量。免疫原的合成及酶标抗原的制免疫原的合成及酶标抗原的制备备n 由于农药属半抗原，不具有免疫原性，因此在制备抗体前首先要合成农药一载体蛋白结合物免疫酶原。由于各种农药分子构造不同各研讨者所采用的方法也不一样，但在绝大部分情况下由于农药分子不具备衔接反响基团，农药分子首先要经过衍生，之后经过衔接物与载体蛋白衔接。n常用的裁体蛋白有牛血洁白蛋白、人血洁白蛋白和卵清蛋白等。 农药衍生和衔接的化学反响条件n不能导致半抗原分子构造发生明显改动，否那么抗原性将发生变化。n另外，制备好的半抗原结合物在免疫动物

6、前，要测定结合物中半抗原数目由于结合中半抗原分子数目太多或太少，诱发抗体的才干都很差。 用于合成农药一载体蛋白结合物的方法，在不引起酶失活情况下通常都可用来衔接酶与农药分子，制备酶标农药抗原。抗农药抗体的制备抗农药抗体的制备n 抗农药的多克隆抗体可用农药一载体蛋白结合物直接免疫兔子等动物之后每间隔一个月加强免疫一股6个月左右可获得称心效价的抗血清。假设结合物免疫原性较差，那么需求甚至长达1年的免疫才干获得称心效价的抗血清。 n多克隆抗体虽然具有消费本钱低、消费方法简便等特点，但由于其特性随动物种类及个体差别而有变化，而且消费数量也受限制，因此不利于消费大批量商品试剂盒。n单克隆抗体可经过用毒素

7、载体蛋白结合物免疫小白鼠等之后建立杂交瘤细胞系来消费。单克隆抗体虽然消费本钱高、技术复杂，但其特性稳定，交叉反响少，并可大批量消费，在消费商品试剂盒上很有价值。 食品农药残留免疫学检测技术食品农药残留免疫学检测技术的运用的运用 自从自从10多年前开场尝试把免疫学技术运用于食多年前开场尝试把免疫学技术运用于食品农药残留检测以来，食品农药残留免疫学检品农药残留检测以来，食品农药残留免疫学检测技术研讨任务获得了极大的进展，已有大量测技术研讨任务获得了极大的进展，已有大量检测农药检测农药(杀菌剂、除草剂、杀虫剂杀菌剂、除草剂、杀虫剂)的研讨文的研讨文献报道。献报道。 检测的食品范围很广包括水果、蔬菜、

8、饮料、检测的食品范围很广包括水果、蔬菜、饮料、啤酒、葡萄酒、鱼、肉、猪油、奶、植物油、啤酒、葡萄酒、鱼、肉、猪油、奶、植物油、蜂蜜、豆类、谷物及谷物加工产品等。蜂蜜、豆类、谷物及谷物加工产品等。 n该方法不仅可用来定性挑选，而且也可以用来定量分析，其检测程度在很多农药可到达纳克(ng)甚至皮克(pg)程度。n另外一些检测的商品试剂盒也研制开发出来，并可用于食品中一些农药的残留检测。n在美国有关官方机构，如环境维护署(EFA)，农业部食品平安检验司(PSISUSDA)和AOAC已制定厂农药残留免疫学检验商品试剂盒评定和认可的建议准那么。 n随着农药残留免疫学检测技术不断被完善和商品化(消费出试剂

9、盒)，免疫学检测技术会成为食品农药残留和食品平安质量控制的有效快速的检测手段。n除草剂类农药残留免疫学检测技术研讨的一些文献报道(国内尚未见有关的研讨报道)，简述了方法类型、检出限、抗体类型、检测食品范围和检测农药种类等有关情况，另外还列出了一些已获得运用的商品试剂盒。 n农药残留免疫学检测技术与传统的色谱、质谱法相比所需设备简单(如ELISA方法只需一台酶标仪)，或者不需检测设备加样后直接进展眼观断定即可，适宜于现场运用，前处置程序简化(不需净化)，检验快速，检测容量大检验本钱低。n液体食品如牛奶、果汁、菜汁等通常不需求前处置可直接取样检测。检验操作几非常钟至几个小时内即可完成，净化和浓缩可

10、进一步提高检出限。 n固体食品如谷物等经抽提剂抽提、浓缩并重新溶于水溶液中即可取样检测，不需净化检验操作(不包括前处置)可在几非常钟至几个小时内完成。n检测容量，试管法每次最多可同时分析十几个样品，假设运用磁珠技术每次可同时分折3040个样品n微量酶标板法(96孔)每次可同时分折44个样品并且可同时做曲线。n虽然免疫学检测技术中农药与抗农药抗体反响是高度特异的，但由于该反响敏感性特别高，有时虽然底物的成分细微干扰了农药与抗农药抗体的结合，这时假设参照用缓冲溶液来制备的规范曲线定量，会产生一个低的假阳性应对，从而干扰检测结果。这种情况可经过用不含农药的样品抽提物制备规范曲线来消除干扰，也可经过对样品抽提物进展高倍稀释来消除，但后者同时会降低检测敏感性。n免疫学检测系统中的抗农药抗体对于构造非相关的靶抗原农药表现极高的特异性，但某些与检测农药构造亲密相关的农药，或待检农药的代谢产物能够与抗待捡农药抗体发生不同程度的交叉反响。假设样品中存在这些物质该农药的定量检测就会降为半定量或定性捡测。但从另一个角度看，这种交又反响又是特别有用的利用这种