动物生化实验》实验牛乳中蛋白质的提取与鉴定ppt课件

1、了解蛋白质的化学性质；了解蛋白质的化学性质；掌握蛋白质的提取方法和鉴定理。掌握蛋白质的提取方法和鉴定理。 牛乳中含丰富的蛋白质水分牛乳中含丰富的蛋白质水分87.8%87.8%、脂、脂肪肪3.5%3.5%、蛋白质、蛋白质3.1%3.1%、乳糖、乳糖4.9%4.9%、灰分、灰分0.7%0.7%、能量、能量29.kg/100kg29.kg/100kg，其中主要是，其中主要是酪蛋白。酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量酪蛋白。酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量的的5/65/6。 蛋白质是含羧基和氨基的两性电解质，在某蛋白质是含羧基和氨基的两性电解质，在某一一pHpH值溶液中，蛋白质分子所带的正电荷和值溶液中，蛋白质分子

2、所带的正电荷和负电荷相等，蛋白质以两性离子形状存在，负电荷相等，蛋白质以两性离子形状存在，这时溶液的这时溶液的pHpH值，称为该蛋白质的等电点值，称为该蛋白质的等电点PIPI, ,酪蛋白酪蛋白PI=4.8 PI=4.8 。 在等电点时，蛋白质所带净电荷为零，在等电点时，蛋白质所带净电荷为零，溶解度最小，蛋白质沉淀析出，利用蛋白质溶解度最小，蛋白质沉淀析出，利用蛋白质的这个特点可将蛋白质提取出来。的这个特点可将蛋白质提取出来。 由于粗提出的酪蛋白中还含有脂肪，可由于粗提出的酪蛋白中还含有脂肪，可用乙醇和乙醚洗涤除去。用乙醇和乙醚洗涤除去。 酪蛋白中含有酪氨酸残基，酪氨酸残基酪蛋白中含有酪氨酸残基

3、，酪氨酸残基的的R R基团为：基团为： 含酚羟基，可与米伦试剂反响先生成白含酚羟基，可与米伦试剂反响先生成白色絮状沉淀，继续反响生成红色沉淀。色絮状沉淀，继续反响生成红色沉淀。 三、操作步骤三、操作步骤一酪蛋白的制备一酪蛋白的制备新颖牛奶、醋酸纳缓冲液各新颖牛奶、醋酸纳缓冲液各5ml 40 5ml 40 分别加热至同样温度分别加热至同样温度 上清液：保管做鉴定三上清液：保管做鉴定三边加边摇混匀边加边摇混匀 5min 5min 沉淀沉淀 加加4ml95%4ml95%的乙醇的乙醇 离心离心5 5分钟分钟 上清液：弃去上清液：弃去 沉淀：做鉴定沉淀：做鉴定2000r/min离心离心二酪蛋白的性质鉴定

4、二酪蛋白的性质鉴定1 1、溶解度、溶解度 取取3 3支试管支试管+ 0.1M NaOH+ 0.1M NaOH、 0.2M 0.2M HClHCl、 10%NaCl 10%NaCl各各2ml+2ml+少许酪蛋白少许酪蛋白振荡振荡察看溶解快慢。察看溶解快慢。2 2、米伦反响、米伦反响 1ml H2O1ml H2O 少许酪蛋白少许酪蛋白 加热察看加热察看 10 10滴米伦试剂滴米伦试剂三乳清中可凝固性蛋白质鉴定：三乳清中可凝固性蛋白质鉴定： 将第一次离心所得的上清液徐徐加热，出现蛋白将第一次离心所得的上清液徐徐加热，出现蛋白质沉淀球蛋白、清蛋白。质沉淀球蛋白、清蛋白。 四、实验结果四、实验结果 五、

5、讨论五、讨论实验室普通离心机运用方法实验室普通离心机运用方法 1.1.将离心机放在坚实而平整的任务台上；将离心机放在坚实而平整的任务台上； 2.2.在适用的离心管中参与样品，必需对称配重，否那在适用的离心管中参与样品，必需对称配重，否那么会损坏离心机；么会损坏离心机； 3.3.按离心机转头的离心管位置刻度所对应孔插入，放按离心机转头的离心管位置刻度所对应孔插入，放下离心机顶盖；下离心机顶盖； 4.4.检查确认调速钮处于最低速位置；检查确认调速钮处于最低速位置； 5.5.翻开电源开关，调速到需求的转速；翻开电源开关，调速到需求的转速； 6.6.选择任务时间，调选择任务时间，调“选时钮到需求的位置。选时钮到需求的位置。 7.7.离心完成，离心机自然停顿。离心完成，离心机自然停顿。 2、离心机运用本卷须知 1严禁各种液体和杂物进入离心任务室，那样会损坏主机； 2仪器电源线应有良好的接地