中国药科大学药物分析APPT学习教案

1、会计学1中国药科大学药物分析中国药科大学药物分析A 1 1掌握本类药物质量检验的基本程序掌握本类药物质量检验的基本程序与方法类型。与方法类型。2 2掌握掌握HPLCHPLC法和酶活力测定法在本类法和酶活力测定法在本类药物测定中的应用。药物测定中的应用。3 3熟悉本类药物的范围、种类、质量熟悉本类药物的范围、种类、质量控制的要点。控制的要点。4 4了解本类药物含量测定的其他方法了解本类药物含量测定的其他方法。返 回第1页/共41页biopharmaceutics or biopharmaceuticalsbiochemical drugsbiotechnology drugsbiological

2、 products药药物物化化学学药药物物生生物物药药物物中中药药生生化化药药物物生生物物技技术术药药物物生生物物制制品品第2页/共41页动动物物植植物物微微生生物物提提取取现现代代生生物物技技术术生生命命基基本本物物质质及及衍衍生生物物降降解解物物大大分分子子的的结结构构修修饰饰物物生生物物- -化化学学半半合合成成第3页/共41页2. 2. 基因工程药物基因工程药物： 以以DNADNA重组技术生产的蛋白质、多肽重组技术生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长因子类药物。生长因子类药物。第4页/共41页DNADNA重组技术（基因工程）：重组技

3、术（基因工程）：生产过程生产过程为为天然基因天然基因合成的核合成的核苷酸序列苷酸序列内切内切酶酶连接酶连接酶载载体体重重组组的的遗遗传传物物质质转转移移到到宿宿主主细细胞胞增殖、表达增殖、表达分离纯化分离纯化目目的的产产物物第5页/共41页二、种类二、种类氨基酸、多肽与蛋白质类氨基酸、多肽与蛋白质类酶类与辅酶类酶类与辅酶类多糖类多糖类脂质类脂质类核酸及其降解物和衍生物核酸及其降解物和衍生物类药物类药物1 1生化药物生化药物第6页/共41页第7页/共41页第8页/共41页 6. 6. 安全性检查安全性检查 7. 7. 效价（含量）测定：效价（含量）测定： 理化法理化法：有效成分的含量：有效成分的

4、含量 效价测定和酶活力测定效价测定和酶活力测定：有效成分：有效成分 的生物活性的生物活性返 回第9页/共41页第二节第二节 质量检验的基本程序与方法质量检验的基本程序与方法第10页/共41页第11页/共41页（一）理化鉴别法一）理化鉴别法 1.1.化学鉴别法化学鉴别法： 例：溶菌酶例：溶菌酶 - CONH- +Cu- CONH- +Cu2+ 2+ 络合显色络合显色药药物物 + + 试试剂剂现现象象颜颜色色沉沉淀淀第12页/共41页第13页/共41页牛牛 纤纤 维维 蛋蛋 白白 原原牛牛 凝凝 血血 酶酶蛋蛋 白白 结结 块块尿尿 激激 酶酶牛牛 纤纤 维维 蛋蛋 白白 溶溶 酶酶 原原结结 块

5、块 溶溶 解解 ：气气 泡泡 上上 升升第14页/共41页第15页/共41页5. 5. 电泳法电泳法：以肝素鉴别为例。：以肝素鉴别为例。OOOOOOHCOO-OSO3-HNSO3-CH2OSO3-与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。第16页/共41页，惊厥停止。惊厥停止。第17页/共41页（二）杂质检查二）杂质检查 一般杂质检查一般杂质检查 特殊杂质检查：原料药纯度分析特殊杂质检查：原料药纯度分析 生产过程中杂质的检查生产过程中杂质的检查 1. 1. 原料药纯度分析原料药纯度分析： 多糖类多糖类-低聚糖、核酸、蛋白质低聚糖、核酸、蛋白质 酶类药物酶类药物

6、-酶催化反应基本产物的分析酶催化反应基本产物的分析， 具有一定活性的其他有关酶的检查具有一定活性的其他有关酶的检查。第18页/共41页第19页/共41页第20页/共41页 无菌试验：活菌无菌试验：活菌 基因工程药物中可能杂质与污染物检查基因工程药物中可能杂质与污染物检查 来源于宿主细胞的残留来源于宿主细胞的残留DNADNA，外源性杂质，外源性杂质 致突变试验致突变试验 生殖毒性试验生殖毒性试验第21页/共41页第22页/共41页返 回第23页/共41页第三节第三节 常用定量分析方法及其应常用定量分析方法及其应用用 第24页/共41页 2. HPLC2. HPLC法法 1 1）RP-HPLCRP

7、-HPLC：柱前衍生化自动测定氨基酸：柱前衍生化自动测定氨基酸 柱：柱：RPRP1818， 柱温：柱温：48 48 流动相：流动相：A-0.05% TFAA-0.05% TFA；B-B-乙腈乙腈- -异丙醇（异丙醇（4 4：1 1） 梯度洗脱梯度洗脱 荧光检测器：荧光检测器： exex=280nm=280nm340nm,340nm, emem=430nm=430nm第25页/共41页第26页/共41页N(CH3)2SO2ClR-NH2SO2NHRN(CH3)2+第27页/共41页第28页/共41页 2 2）HPIECHPIEC 测定对象：蛋白质，多肽测定对象：蛋白质，多肽 柱：离子交换键合相柱

8、：离子交换键合相 流动相：流动相：0.3mol/L0.3mol/L1.0mol/L1.0mol/L的盐的缓冲液的盐的缓冲液。 梯度洗脱：盐的浓度增大。尽量避免使用卤梯度洗脱：盐的浓度增大。尽量避免使用卤 素类盐素类盐 特点：特点：可回收活性蛋白可回收活性蛋白。第29页/共41页第30页/共41页标准蛋白分子量曲线的制备标准蛋白分子量曲线的制备： 醛缩酶醛缩酶血清白蛋白血清白蛋白右旋糖苷蓝右旋糖苷蓝 碳酸酐酶碳酸酐酶抑蛋白酶肽抑蛋白酶肽 酪氨酸酪氨酸T T0 0 完全排阻完全排阻完全进入填料空隙完全进入填料空隙 T Tt t标准蛋白分子量曲线：标准蛋白分子量曲线：K Kd d - lg M.W.

9、 - lg M.W.第31页/共41页Kd =T -T0Tt - T0测测定定样样品品的的 T T查查出出K Kd d计计算算l lg g M M. .W W. .计计算算M M. .W W. .第32页/共41页应用示例应用示例：ChPChP（20002000）重组人胰岛素的质量控制）重组人胰岛素的质量控制 1 1）鉴别：）鉴别： 法法1 1：在效价测定项下，供试品主峰的保留时间：在效价测定项下，供试品主峰的保留时间 应与对照品的一致。应与对照品的一致。 法法2 2：供试品与对照品分别经过酶解后，再分别：供试品与对照品分别经过酶解后，再分别 进行梯进行梯 度洗脱，供试品的肽图谱与对照品度洗脱

10、，供试品的肽图谱与对照品 的肽图谱一致。的肽图谱一致。第33页/共41页第34页/共41页第35页/共41页第36页/共41页3.3.灌注色谱法灌注色谱法 固定相：聚苯乙烯二乙烯高度交联结构上构固定相：聚苯乙烯二乙烯高度交联结构上构 成贯穿孔成贯穿孔 颗粒分离介质颗粒分离介质-POROS-POROSR R。 双模式孔结构：双模式孔结构：8080150nm150nm大扩散孔大扩散孔 600600800nm800nm贯穿孔贯穿孔第37页/共41页第38页/共41页灌灌注注色色谱谱预预添添充充柱柱分分析析型型F F系系列列：用用于于B Bi io oC CA AD D工工 作作站站或或中中压压系系统统M M系系列列：用用于于B Bi io oC CA AD D工工作作站站和和 传传统统H HP PL LC C的的分分离离纯纯化化P P系系列列：用用于于低低压压、B Bi io oC CA AD D 工工作作站站或或中中压压系系统统制制备备型型H H系系列列：用用于于B B