微生物限度检查法-药典附录

1、微生物限度检查法微生物限度检查法（2005年版一部）附录C. 微生物限度检查法微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌素、酵母菌数及控制菌检查。微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为3035，霉

2、菌、酵母菌培养温度为2528，控制菌培养温度为361。检验结果的报告以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告。检验量检验量即一次试验所用的供试品（g、ml 或 cm2）。除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；中药膜剂为50 cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验应增加10g或10ml。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4片。一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。供试液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性，可采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需用

3、水浴加温时，温度不应超过45。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。 1.液体供试品取供试品10ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。2.固体、半固体或黏稠性供试品取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1：10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。3.需用特殊供试液制备方法的供试品(1)非水溶性供试品

4、方法1取供试品5g(5ml),加入含溶化的（温度不超过45）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45左右的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1:20的供试液。方法2取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯（制法见附录XIIIB无菌检查法中供试品的无菌检查项下）和无菌玻璃珠的适宜容器中 ，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇510分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液。

5、（2）膜剂供试品取供试品100cm2，剪碎，加50ml或100ml的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（必要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为1：10或1：20的供试液。(3)肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10g，加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液(用于肠溶制剂)PH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，置45水浴中，振摇，使溶解，作为1：10的供试液。（4）气雾剂、喷雾剂供试品取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液，加至适量的PH7.0无菌氯化钠-蛋白

6、胨缓冲液（若含非水溶性成分，加适量的无菌聚山梨酯80）中，混匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1：10的供试液。（5）具抑菌活性的供试品当供试品有抑菌活性时，应消除供试液的抑菌活性后，再依法检查。常用的方法如下。培养基稀释法取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级的供试液2ml，每1ml供试液可等量分注多个平皿，倾注琼脂培养基，混匀，凝固，培养，计数。每1ml供试液所注的平皿中生长的菌数之和即为1ml的菌落数，计算每1ml供试液的平均菌落数，按平皿法计数规则报告菌数；控制菌检查时，可加大增菌培养基

7、的用量。离心沉淀集菌法取一定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释液补至原量。薄膜过滤法 见细菌、霉菌及酵母菌计数项下的“薄膜过滤法”。中和法凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品，可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或灭活剂可加在所用的稀释液或培养基中。细菌、霉菌及酵母计数细菌计数法1 平皿菌落计数法 取均匀供试液，进一步稀释成1102、1103等稀释级。分别取连续三级10倍的供试液各1ml，置直径为90mm的平皿中，再注入约45的培养基约15ml，混匀，待凝固后，倒置培养

8、，每稀释级应做23个平皿。培养基 细菌计数为营养琼脂培养基。（在特殊情况下，同时点计霉菌、酵母菌菌落数）阴性对照试验 取供试验用的稀释剂1ml，置无菌平皿中，按平皿菌落计数法用的培养基制备平板，培养，检查，不得长菌。培养时间 48小时。分别在24小时及48小时点计菌落数，一般以48小时菌落数为准。菌落如蔓延生长成片，不宜计数。点计后，计算各稀释级的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。菌数报告规则 细菌数宜选取平均菌落数在30300之间的稀释级，作为报告菌数计算的依据。*如有1个稀释级平均菌落数在30300之间，将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。*如同时有2个稀释级平均菌落数在30300之间时

9、，按下式计算两级比值：比值=高稀释级的平均菌落数稀释倍数/低稀释级的平均菌落数稀释倍数当比值2时，以两稀释级的均值报告；当比值2时，以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。*如同时有3个稀释级平均菌落数在30300之间时，以后2个稀释级计算级间比值报告。*如各稀释级的平均菌落数均不在30300之间，以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。*如各稀释级的平均菌落数均在300以上，按最高稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。*如各稀释级的平均菌落数均小于30时，一般按最低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。*如当110（或1102）稀释级平均菌落数等于或大于原液（或110）稀释级时，应以

10、培养基稀释法测定。2 培养基稀释法 取供试液（原液或110、1102）3份，每份各1ml，分别注入5个平皿内（每皿各0.2ml）。每1个平皿倾注营养琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后，倒置培养，计数。每1ml注入的5个平皿的菌落数之和，即为每1ml的菌落数，共得3组数据，以3份供试液菌落数的平均值乘以稀释倍数报告。*如各稀释级平板均无菌落生长，或仅最低稀释级平均菌落数小于1时，则报告菌数为小于10个。一般营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌，

11、则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数较高的培养基中的菌数为计数结果。含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵母菌数，合并计数。菌数报告规则宜选取细菌平均菌落数在30300之间、霉菌宜平均菌落数在30100之间的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。稀释液稀释液配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。1.PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 照无菌检查法（附录 XIIB）制备。2.PH6.

12、8无菌磷酸盐缓冲液、PH7.6无菌磷酸盐缓冲液 按缓冲液（附录XVD）配制后，过滤，分装，灭菌。如需要，可再上述稀释液灭菌前后或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。3.0.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装，灭菌。培养基及其制备方法培养基可按以下处方制备，也可使用按该处方生产的符合要求的脱水培养基。配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。1.营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基及改良马丁琼脂培养基照无菌检查法（附录 XIII B）制备。2.玫瑰红钠琼脂培养基胨5.0g玫瑰红钠 0.0133g葡萄糖10.0g琼脂14.0g磷酸二氢钾

13、1.0g水1000ml硫酸镁0.5g除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD）胨10.0g琼脂14.0g 酵母浸出粉5.0g水1000ml葡萄糖20.0g除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，加入葡萄糖，分装，灭菌。4.胆盐乳糖培养基（BL）胨20.0磷酸二氢钾1.3g乳糖5.0g牛胆盐2.0g氯化钠5.0g（或去氧胆酸钠） （0.5g）磷酸氢二钾 4.0g水1000ml除乳糖、牛胆盐（或去氧胆酸钠）外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.40.2，煮沸，澄清，加入乳糖、牛胆盐（或

14、去氧胆酸钠），分装，灭菌。5.胆盐乳糖发酵培养基取未灭菌的胆盐乳糖培养基1000ml，加入0.04%溴甲酚紫指示液25ml，根据要求的用量分装于含倒管的试管中。灭菌。所用倒管的规格应保证产气结果的观察。 6.曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）营养琼脂培养基 100ml曙红钠指示液 2ml20%乳糖溶液5ml亚甲蓝指示液1.31.6ml取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。7.麦康凯琼脂培养基（MacC）胨20.0g1%中性红指示液 3ml乳糖10.0g琼脂14.0g牛胆盐5.0g水1000ml氯化钠5.0g除乳糖、1%中性红指示液、牛胆盐及琼脂外

15、，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.20.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60，倾注平皿。8.4-甲基伞形酮葡萄苷酸（4-methylumbelliferyl-D-glu-curonide,MUG）培养基胨10.0g磷酸二氢钾（无水） 0.9g硫酸锰 0.5mg磷酸氢二钠（无水）6.2g硫酸锌0.5mg亚硫酸钠40mg硫酸镁0.1g去氧胆酸钠1.0g氯化钠5.0gMUG75mg硫酸钙50mg水1000ml除MUG外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.30.1，加入MUG，溶解，每管分装5ml，灭菌。9.三糖铁琼脂培养基（T

16、SI）胨20.0g硫酸亚铁0.2g牛肉浸出粉 5.0g硫代硫酸钠0.2g乳糖10.0g0.2%酚磺酞指示液 12.5ml蔗糖10.0g琼脂12.0g葡萄糖1.0g水1000ml氯化钠5.0g除三种糖、0.2%酚磺酞指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后7.30.1，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，制成高底层（23cm）短斜面。10.四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）胨5.0g硫代硫酸钠30.0g牛胆盐1.0g水1000ml碳酸钙10.0g取上述成分，混合，微温溶解，灭菌。临用前，取上述培养基，每10ml加入碘试液0.2ml 和亮绿试液0.1ml，混

17、匀。11.沙门、志贺菌属琼脂培养基（SS）胨5.0g硫代硫酸钠8.5g牛肉浸出粉5.0g中性红指示液 2.5 ml乳糖10.0g亮绿试液0.33ml牛胆盐8.5g琼脂16.0g枸橼酸钠 8.5g水1000ml枸橼酸铁铵 1.0 g除乳糖、中性红指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.20.1，滤过，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，灭菌，冷至60，倾注平皿。12.胆盐硫乳琼脂培养基（DHL）胨20.0g枸橼酸钠1.0g 牛肉浸出粉3.0g枸橼酸铁铵 1.0g乳糖10.0g中性红指示液 3ml蔗糖10.0g琼脂16.0g去氧胆酸钠1.0g水1000ml硫代

18、硫酸钠 2.3 g除糖、指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.20.1，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余成分，摇匀，冷至60，倾注平皿。13.溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基胨10.0g溴化十六烷基三甲铵 0.3g 牛肉浸出粉3.0g琼脂14.0g氯化钠5.0g水1000ml除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.50.1，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷至60，倾注平皿。14.亚蹄酸盐肉汤培养基临用前，取灭菌的营养肉汤培养基，每100ml 中加入新配制的1%亚碲酸钠（钾）试液0.2ml，混匀，即得。15.卵黄氯化钠琼脂培养基胨6.0g10%

19、氯化钠卵黄液100ml牛肉浸出粉1.8g琼脂14.0g氯化钠30.0g水650ml除10%氯化钠卵黄液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.60.1，灭菌，待冷至约60，以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液，充分振摇，倾注平皿。10%氯化钠卵黄液的制备 取新鲜鸡蛋1个，以免菌操作取出卵黄，放入10%无菌氯化钠溶液100ml，充分振摇即得。16.甘露醇氯化钠琼脂培养基胨10.0g酚磺酞指示液 2.5ml牛肉浸出粉1.0g琼脂14.0g甘露醇10.0g水1000ml氯化钠75.0g除甘露醇、酚酞磺指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.40.2，加入琼脂，

20、加热溶化后，滤过，分装，灭菌，冷至60，倾注平皿。17.乳糖发酵培养基胨20.0g乳糖10.0g0.04%溴甲酚紫水1000ml指示液25ml除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.20.2，加入指示液，分装于含倒管的小试管中，每管3ml。灭菌。18.绿脓菌素（pyocyanin)测定用培养基（PDP琼脂培养基）胨20.0g甘油10ml氯化镁（无水） 1.4g琼脂14.0g硫酸钾（无水） 10.0g水 1000ml取胨、氯化镁、硫酸钾和水混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.30.1，加入甘油及琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，置成斜面。19.

21、庖肉培养基牛肉碎块的制备取新鲜牛肉，除去脂肪和筋腱，加蒸馏水煮沸约10分钟，切成约5mm3的小块，称重，按1：3（肉：水）加蒸馏水，置410浸1820小时后，煮沸1小时，用白布过滤（滤液即为1：3牛肉浸液），肉渣用自来水漂洗2次，然后加入适量氢氧化钠溶液，搅拌，使PH在8.4左右，浸泡过夜，次日倾去上层水，用蒸馏水冲洗23次，放在纱布上，自动沥干（不要挤压）。将肉渣铺在搪瓷盘上，灭菌，于80100烘干，筛去碎屑，装瓶，保持干燥，备用。庖肉培养基的制备将上述碎肉块装入合适的容器中，再加入营养肉汤培养基，碎肉的量为1.5%，调节PH使灭菌后为7.30.1。灭菌。20.哥伦比亚琼脂培养基酪蛋白胰酶消

22、化物10.0g肉胃酶消化物5.0g心胰酶消化物3.0g酵母浸出粉5.0g玉米淀粉1.0g氯化钠5.0g琼脂15.0g水1000ml除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.30.2，加入琼脂，加热溶化，滤过，分装，灭菌，冷至4550，加入相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混匀，倾注平皿。试液十四烷酸异丙酯 IsopropylMyristate C17H34O2=270.46本品为无色液体。溶于乙醇、乙醚、丙酮、三氯甲烷或甲苯，不溶于水、甘油或丙二醇。约208分解。二盐酸二甲基对苯二胺 N,N-dimethyl-p-phenylenedi-amineDihydroch

23、lorideC8H12N2.3HCL=209.12本品为白色或灰白色结晶性粉末；置空气中色渐变暗；易吸潮。在水或乙醇中溶解。溴化十六烷基三甲铵 Cetyl Trimethylammonium BromideC19H42BrN=364.46本品为白色结晶。在水中溶解，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。 中性红Neutral Red C15H17N4Cl=288.78本品为深绿色或宗黑色粉末。在水或乙醇中溶解。牛肉浸出粉 Beef ExtractPowder本品为米黄色粉末，在水中溶解。牛胆盐 Ox BileSalt本品为淡黄色或黄棕色粉末，味苦而甜，具吸湿性。在水或醇中易溶。 甘露醇Mannitol

24、C6H14O6=182.17本品为白色结晶；味甜。在水中溶解，在乙醇中微溶。4-甲基伞形酮葡萄苷酸4-Methylumbelliferyl-D-Glu-curonide,MUGC18H16O9=376.3本品为白色针状结晶。在水、乙醇或乙醚中溶解。在稀氢氧化钠溶液中分解。去氧胆酸钠 Sodium DeoxycholateC24H39NaO4=414.56本品为白色结晶性粉末，味苦。易溶于水，微溶于醇，不溶于醚。亚碲酸钠 Sodium Tellurite Na2TeO3=221.58本品为白色粉末。在热水中易溶，在水中微溶。玫瑰红钠（四氯四碘荧光素钠） Rose Bengal SodiumSal

25、t C20H2Cl4I4Na2O5=1017.6本品为棕红色粉末。在水中溶解，溶液呈紫色，无荧光；在硫酸中溶解，溶液为棕色。单硬脂酸甘油酯 GlycerolMonostearte C21H42O4=358.56本品为白色或黄色腊状。在热有机溶剂或矿物油中溶解，在水中不溶，但与水能乳化。 枸橼酸钠Sodium Citrate C6H5Na3O7.2H2O=294.10本品为白色结晶或粉末。在水中易溶，在乙醇中不溶。枸橼酸铁铵 Ammonium FerricCitrate C12H22FeN3O14=488.16本品为棕红色或绿色鳞片或粉末，易溶解，见光易还原成亚铁。在水中溶解，在醇或醚中不溶。胰

26、蛋白胨 Tryptone本品为米黄色粉末。在水中溶解。硫酸锌 Zinc Sufate ZnSO4.7H2O=287.56本品为白色结晶、颗粒或粉末。在水中易溶，在甘油中溶解，在乙醇中微溶。 硫酸锰Manganese Sulfate MnSO4.H2O=169.02本品为粉红色结晶。在水中溶解，在乙醇中不溶。酪蛋白胰酶消化物（胰酪胨或酪胨） Pancreatic Digestof Casein本品为黄色或浅黄色颗粒。以干酪素为原料经胰酶水解、活性炭脱色处理、精制而成。试液二盐酸二甲基对苯二胺试液取二盐酸二甲基对苯二胺0.1g，加水10ml,即得。需新鲜少量配制，于冷处避光保存，如试液变成红褐色，

27、不可使用。亚碲酸钠（钾）试液 取亚碲酸钠（钾）0.1g ，加新鲜煮沸后冷至50的水10ml使溶解。玫瑰红钠试液 取玫瑰红钠0.1g，加水使溶解成75ml。亮绿试液 取亮绿0.1g，加水100ml 使溶解。盐酸试液 取盐酸8.4 ml，加水使稀释成100 ml 。靛基质试液 取对二甲氨基甲醛5.0g，加入戊醇（或丁醇）75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，或取对二甲氨基苯甲醛1.0g，加入95%乙醇95 ml，充分振摇，使完全溶解后，取盐酸20ml徐徐滴入。碘试液 取碘6g与碘化钾5g，加水20ml使溶解。过氧化氢试液 取浓过氧化氢溶

28、液（30%），加水稀释 成3%的溶液，临用时配制。指示液中性红指示液取中性红1.0g，研细，加95%乙醇60ml使溶解，再加水至100ml。变色范围PH6.88.0（红黄）。亚甲蓝指示液 取亚甲蓝0.5g，加水使溶解成1000ml。酚磺酞指示液取酚磺酞1.0g，加1mol/L氢氧化钠溶液2.82ml，使溶解，再加水至100ml。变色范围PH6.88.4（黄红）。溴甲酚紫指示液 取溴甲酚紫1.6g，加95%乙醇使溶解成100ml。变色范围PH5.26.8（黄紫）。曙红钠指示液 取曙红钠2.0g，加水使溶解成100ml。微生物限度标准非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的

29、危害而制订的。药品的生产、贮存、销售过程中的检验，中药提取物及辅料的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。1.制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂应符合无菌检查法规定。2.口服给药制剂 2.1不含药材原粉的制剂细菌数 每1g不得过1000个。每1ml 不得过100个。霉菌和酵母菌数 每1g或1ml 不得过100个。大肠埃希菌每1g或1ml 不得检出。 2.2含药材原粉的制剂细菌数 每1g不得过10 000个（丸剂每1g不得过30000个）。每1ml不得过500个。霉菌数和酵母菌数每1g或1ml不得过100个。大肠埃希

30、菌 每1g或1ml不得检出。大肠菌群 每1g应小于100个。每1ml应小于10个。 2.3含豆豉、神曲等发酵成分的制剂 细菌数每1g不得过100 000个。每1ml不得过1000个。霉菌和酵母菌数 每1g不得过500个。每1ml不得过100个。大肠埃希菌 每1g或1ml不得检出。大肠菌群每1g应小于100个。每1ml应小于10个。3.局部给药制剂3.1 用于手术、烧伤及严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。3.2 用于表皮或黏膜不完整的含药材原粉的局部给药制剂细菌数 每1g或10cm2不得过1000个。每1ml不得过100个。霉菌数和酵母菌数 每1g、1ml或10cm2 不得过100个。

31、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 每1g、1ml或10cm2 不得检出。3.3 用于表皮或黏膜完整的含药材原粉的局部给药制剂细菌数每1g或10cm2 不得过10 000个。每1ml不得过100个。霉菌数和酵母菌数 每1g、1ml或10cm2 不得过100个。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 每1g、1ml或10cm2 不得检出。 3.4眼部给药制剂 细菌数每1g或1ml不得过10个。霉菌数和酵母菌数 每1g、1ml或10cm2 不得检出。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌每1g、1ml 不得检出。3.5耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂细菌数 每1g、1ml或10cm2不得过100个。霉菌和酵母菌数 每

32、1g、1ml或10cm2 不得过10个。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 每1g、1ml或10cm2 不得检出。大肠埃希菌 鼻及呼吸道给药的制剂 每1g、1ml或10cm2不得检出。 3.6阴道、尿道给药制剂细菌数 每1g或1ml 不得过100个。霉菌数和酵母菌数 每1g或1ml 应小于10个。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、梭菌 每1g或1ml 不得检出。 3.7直肠给药制剂细菌数 每1g不得过1000个。每1ml 不得过100个。霉菌和酵母菌数 每1g或1ml不得过100个。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌 每1g或1ml 不得检出。 3.8其他局部给药制剂细菌数 每1g、1ml或10c

33、m2 不得过100个。霉菌和酵母菌数 每1g、1ml或10cm2不得过100个。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 每1g、1ml或10cm2 不得检出。4.含动物组织（包括提取物）及动物类原药材粉（蜂蜜、王浆、动物角、阿胶除外）的口服给药制剂每10g或10 ml还不得检出沙门菌。 5.有兼用途径的制剂 应符合各给药途径的标准。6.霉变、长螨者 以不合格论。 7.中药提取物及辅料参照相应制剂的微生物限度标准执行。附录B. 无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查应在环

34、境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程中必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。培 养 基培养基的制备培养基可按以下处方制备，也可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在225、避光的环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。1.硫乙醇酸盐流体培养基(用于

35、培养好氧菌、厌气菌)酪胨（胰酶水解） 15g氯化钠2.5g葡萄糖5g新配制的0.1刃天青溶液1.0mlL-胱氨酸0.5g硫乙醇酸钠0.5g琼脂0.75g(或硫乙醇酸0.3ml)水1000ml酵母浸出粉5g除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.10.2，分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前, 培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则,须经100水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟）迅速冷却,只限加热一

36、次，并应防止被污染。硫乙醇酸盐流体培养基置3035培养。2.改良马丁培养基（用于培养真菌）胨5.0g磷酸氢二钾1.0g酵母浸出粉2.0g硫酸镁0.5g葡萄糖20.0g水1000ml除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH值约为6.8，煮沸,加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.40.2，分装，灭菌。改良马丁培养基置2328培养。3.选择性培养基按上述硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂或表面活性剂，如聚山梨酯80（用于非水溶性供试品）等。中和剂或表面活性剂的用量应通过验证。4.营养肉汤培养基胨10g牛肉浸出粉 3.0g氯化

37、钠5g水1000ml取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.20.2，分装，灭菌。5.营养琼脂培养基按上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入14.0g琼脂，调节pH值使灭菌后为7.20.2，分装，灭菌。6.改良马丁琼脂培养基按改良马丁培养基的处方及制法，加入14.0g琼脂，调节PH值使灭菌后为6.40.2，分装，灭菌。培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。无菌性检查每批培养基随机不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长。灵敏度检查。菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)CMCC（B） 26003铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)CMCC（B） 10 104枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)CMCC（B） 63 501生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)CMCC(B)64 94