流式细胞术样本制备

1、流式细胞术样本制备流式细胞术样本制备流式细胞术样本制备BD质控品制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206流式细胞术样本来源流式细胞术样本来源z含有生物学颗粒的悬液：单细胞悬液、微生物颗粒悬液、人工微球悬液z标本类型：y细胞悬液：x外周血（溶血）、PBMC、骨髓x灌洗液、体腔积液x培养细胞、细胞系y实体组织：x病理组织：新鲜样本/石蜡包埋样本x针吸组织：新鲜样本z鞘液、洗液、PMA等：洁净，无颗粒杂质制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206流式细胞术样本来源流式细胞

2、术样本来源z血液成分的分析：如白细胞、红细胞、血小板等y分离血液中特定细胞成分，进行分析：操作复杂，分离、离心步骤导致细胞特定群体丢失，并可能引入某些误差y直接使用全血：最接近生理状况，操作简便，样本用血量小z实体组织：MediMachine制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206单细胞悬液的处理单细胞悬液的处理z荧光标记抗体的染色：使用特异的单克隆抗体y单色分析：直接标记、间接标记y双色分析：SimulSET IMK、HLA-B27y多色分析：TriTEST、MultiTEST、ProCOUNTz溶血：FACS Lysing

3、Solutionz细胞打孔：FACS Perm2z固定：1%多聚甲醛制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206细胞染色细胞染色z染色要求：y特异识别某一群细胞，有效区分不同细胞亚群y非特异反应水平低y抗体校价高，用量适用于常规标本z使用特异的单克隆抗体z最好使用荧光直接标记的抗体z采用适当的阴性对照物z抗体最适滴度制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206淋巴细胞表面抗原分析淋巴细胞表面抗原分析z样本来源y新鲜抗凝全血yPBMCz单克隆荧光抗体染色z溶血z洗细胞z固定

4、z上机检测制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206淋巴细胞细胞内抗原分析淋巴细胞细胞内抗原分析z样本来源y新鲜抗凝全血yPBMCz细胞表面抗体染色z溶血、固定z细胞打孔z细胞内抗体染色z上机检测制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206红细胞、血小板表面抗原分析红细胞、血小板表面抗原分析z样本来源y新鲜抗凝全血yPRPz单克隆荧光抗体染色z固定z上机检测制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206细胞周期

5、分析细胞周期分析z准确分析细胞核中DNA含量z单细胞悬液：y细胞数0.5-1106y碎片和粘连细胞少zDNA染色的线性度：CENz单细胞分析：CTN进行DDM检查zCV：2m微球制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206细胞周期分析细胞周期分析zDNA Cycle PlusyBuffer Solution：细胞保存液ySolution A：破膜剂ySolution B：RNaseySolution C：PIz单细胞悬液1106cells/ml，固定z消化RNAzDNA染色制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联

6、系：8562206对照样本对照样本z对照样本应与实验样本平行操作z阴性对照：评估非特异反应水平，界定阴性范围z阳性对照：在诊断抗原表达确失性疾病时，需确定抗原表达正常时的抗原表达强度和百分含量z补偿调整管制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206质控品z体外诊断试验的必要保证z稳定样品，提供靶值和质控范围，供实验室监测流式细胞仪分析实验全过程，确保结果可靠z质控品应与实验样本同时处理，采用相同步骤，相同试剂，相同的画门分析方法z双水平控制：Low/High三水平控制：Low/Median/High制作：

7、姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206BD Stem Cell Controlz流式细胞术造血干细胞免疫表型分析与计数的全血质控物y抗体染色y溶血y流式细胞仪设置及运行状况y分析数据，计数干细胞zCat. No 340991y12.0ml，CD34Lowy12.0ml，CD34High制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206BD Multi-Check Controlz流式细胞术淋巴细胞免疫表型分析与计数的全血质控物y抗体染色y溶血y固定y流式细胞仪设置及运行状况y分

8、析数据，计算淋巴细胞各亚群含量制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206BD Multi-Check Controlz淋巴细胞免疫表型：yCD3+yCD3+CD4+yCD3+CD8+yCD19+yCD3-CD16+56+yCD3+HLA-DR+z靶值及质控范围：y% Total LymphyAbsolute Number/L制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206BD Multi-Check ControlBD Multi-Check ControlCat. No

9、34091112.5mlCat. No 34091222.5ml Cat. No 34091352.5ml BD Multi-Check CD4 Low Control Cat. No 340914 12.5ml Cat. No 340915 22.5ml Cat. No 340916 52.5ml制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206BD Retic-COUNT ControlzCat. No 340999y11.5ml，Lowy11.5ml，Med y11.5ml，HighzCat. No 341000y11.5ml，Lowy11.5ml，Med y11.5ml，Highz流式细胞术网织红细胞分析与计数的全血质控物y荧光染色y流式细胞仪设置及运行状况y分析数据，计数网织红细胞制作：姚新生制作：姚新生 审校：孙万邦审校：孙万邦 联系：联系：8562206BD LeucoCOUNT Controlz血制品的残