中药鉴定实验指导-显微镜的构造和使用

1、中药鉴定技术实验指导实验室守则实验室守则1实验课是培养学生独立思考和理论联系实际、灵活应用能为的重要手段，也是进行科研工作的基础，必须严肃认真。2准时上实验课，不得无故缺席，不得迟到早退，按指定座位就坐，使用相应的显微镜。3.实验前必须通过预习本次实验，明确实验的目的要求、内容、方法和步骤。实验时要认真观察，独立思考，做好记录，实验完毕后要按时交实验报告。4.当老师讲解实验时，要专心听讲，并作必要的记录在实验中如有疑问请举手，不准大声喧哗。实验室守则实验室守则 5爱护实验室一切仪器设备，按操作规程使用显微镜，尽量节约水、电及擦镜纸、试剂等一切消耗物质损坏仪器须登记，按规定赔偿。 6每次实验必须

2、带备教科书，绘图用具（HB、2H铅笔各一支，橡皮、尺子等）和实验记录本。 7保持实验室清洁整齐，一切实验用具用完后要擦洗干净，放回原处每次实验完毕，要搞好室内清洁卫生离开实验室时要关好水、电、门、窗。实验一实验一 显微镜的构造和使用、显微镜的构造和使用、制片、制图及显微测量制片、制图及显微测量一、实验目的一、实验目的1了解普通光学显微镜的构造和各部分性能，学习和掌握显微镜的使用方法。2学习生活细胞观察方法，掌握植物细胞基本结构，了解类型及特点。3学习临时制片方法（撕取法、刮取法）和生物绘图方法。4.学习显微测量方法。二、实验器具、试剂及材料二、实验器具、试剂及材料光学显微镜、载玻片、盖玻片、尖

3、头镊子、解剖针、刀片、剪刀、吸水纸、擦镜纸、纱布块、吸水纸；蒸馏水、稀碘液、苏丹、水合氯醛、稀甘油、20%蔗糖液；洋葱鳞叶表皮细胞制片、新鲜洋葱。三、实验内容三、实验内容（一）普通光学显微镜的构造（一）普通光学显微镜的构造显微镜是研究植物细胞结构、组织特征和器官构造的重要的和不可替代的仪器。显微镜的种类繁多，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。电子显微镜结构相对复杂，光学显微镜结构较为简单，基本结构均可分为机械部分和光学系统部分。1机械部分：显微镜机械部分是由精密而牢固的零件组成，主要包括镜座、镜臂、载物台、镜筒、物镜转换器和调焦装置等。（1）镜座：是显微镜的基座，用以支持镜体平衡，其上装有反

4、光镜或照明光源。三、实验内容三、实验内容（2）镜柱：是镜座上面直立的短柱，连接、支持镜臂及以上的部分。（3）镜臂：弯曲如臂，上接镜筒、下接镜柱，支持载物台、聚光器和调焦装置。是取放显微镜时手握的部位。直筒显微镜镜臂和镜柱连接处有活动关节，可使显微镜在一定范围内后倾，一般不超过30。（4）镜筒：一般长160 mm170 mm。其上端放置目镜，下端与物镜转换器相连。双筒斜式的镜筒，两镜筒距离可以根据两眼距离及视力来调节。（5）物镜转换器：是固着在镜筒下端的圆盘，其上装有不同倍数的物镜。可以左右自由转动，便于更换物镜。三、实验内容三、实验内容（6）载物台：放置切片的平台，中央有一个通光孔，旁边装有固

5、定玻片的压夹或标本移动器。有的显微镜载物台下装有聚光镜。（7）调焦装置：镜臂两侧有粗、细调焦轮各一对，旋转时可使镜筒上升或下降，以便得到清晰物像，即调焦。大的一对是粗调，每旋转一周可使镜筒升降10 mm，用于低倍物镜观察；小的一对是细调，每旋转一周可使镜筒升降0.1 mm，用于高倍物镜观察。使用时，必须先用低倍镜、后用高倍镜。三、实验内容三、实验内容2光学部分：由成像系统和照明系统组成。前者包括物镜和目镜，后者包括反光镜（或内置光源）、聚光器。（1）物镜：物镜是决定显微镜性能（如分辨率）的最重要部件。它将标本第一次放大成倒像。物镜放大倍数一般低倍物镜有10、4，高倍物镜为40，而油镜为100。

6、使用油镜时，玻片与物镜之间需加入折射率大于的香柏油作为介质。（在物镜上标有“40/0.65 160/0.17”字样。40表示物镜放大倍数。0.65表示镜口率，其数值越大工作距离越小，分辨能力越高。分辨率是指显微镜能分辨两点之间最小的距离。160表示镜筒的长度。0.17表示要求盖玻片的厚度。）三、实验内容三、实验内容（2）目镜：目镜的作用是将物镜放大所成的像进一步放大，放大倍数有5、10、15等。目镜内可安装“指针”，也可安装测微尺。（3）聚光器：由聚光镜和彩虹光圈（可变光栏）组成。聚光镜可以使光汇集成束，增强被检物体的照明。彩虹光圈通过拨动其操作杆，可使光圈扩大或缩小，借以调节通光量。有的聚光

7、器下方还有一个滤光片托架，根据镜检需要可放置滤光片。构造简单的显微镜无聚光器，仅有光圈盘，其上有若干个大小不同的圆孔，使用时选择适当的圆孔对准通光孔。（4）反光镜：反光镜的作用是把光源投射来的光线向聚光镜反射。反光镜有平、凹两面，平面镜反光，凹面镜兼有反光和聚光的作用。一般前者在光线充足时使用，后者在光线不足时使用。装有内置光源的显微镜，只要打开电源开关，使用光亮调节器即可。取镜和安放 1 右手握住镜臂，左手托住镜座 2把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘7厘米左右 处）。安装好目镜和物镜。 3转动转换器，使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘 米的距离) 4把一个

8、较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼睁开，便于以后 同时画图)。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，可以看到白亮的视野。 观察5把所要观察的玻片标本（也可以用印有“”字的薄纸片制成）放在 载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。 6转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼 睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。 7左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直 到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 三、实验内容三、实验内容（二）普通光学显微镜的使用（二）普通光学显微镜的使用1取放：拿取显微镜时，应一只手握住镜

9、臂，另一只手平托镜座。将显微镜放置在座位桌子左侧距桌边510cm处，以便腾出右侧位置进行观察记录或绘图。装配好适当的目镜或否。2对光：对光时，先将低倍物镜对准通光孔，用左眼或双眼观察目镜。然后，调节反光镜或打开内置光源并调节光强，使镜下视野内的光线明亮、均匀又不刺眼。三、实验内容三、实验内容3低倍镜使用：将玻片标本放置在载物台上固定好，使观察材料一定正对着通光孔中心。转动粗调焦轮下降物镜距玻片5mm处，接着用左眼（或双眼）注视镜筒，再慢慢用粗调焦轮上升物镜，直到看见清晰的物像为止。4高倍镜使用：由于高倍镜视野范围更小，所以使用前应在低倍镜下选好欲观察的目标，并将其移至视野中央，然后转高倍镜至工

10、作位置。高倍镜下视野变暗且物像不清晰时，可调节光亮度和细调焦轮，不得使用粗调。由于高倍镜使用时与玻片之间距离很近，因此，操作时要特别小心，以防镜头碰击玻片。三、实验内容三、实验内容5油镜使用：在高倍镜下将要观察的部分移至视野中央，上升镜筒约1.5 cm，然后转油镜至工作位置。在盖玻片要观察的位置上滴一滴香柏油，慢慢下降镜筒，使之与油滴接触，然后慢慢调节细调焦轮上升镜筒到物像清晰。若发现香柏油液滴与因物镜分离，应重新下降镜筒至与油滴接触，然后细调。油镜工作距离非常小（约为0.2mm），所以这步操作要特别小心，防止压碎玻片。6调换玻片：观察时如需调换玻片，要将高倍镜换成低倍镜，取下原玻片，换上新玻

11、片，重新从低倍镜开始观察。7.显微测量显微测量目镜测微尺的校准目镜测微尺的校准目尺每小格的尺度目尺每小格的尺度=注意：注意：1.分别、多次校准分别、多次校准 2.台尺勿倒置台尺勿倒置两条两条重合线内台尺的尺度重合线内台尺的尺度两条重合线内目尺的格数两条重合线内目尺的格数三、实验内容三、实验内容8使用后整理：观察完毕后，上升镜筒，取下玻片，将物镜转离通光孔呈非工作状态，放上擦镜布，按原样收好显微镜。9使用注意事项： 显微镜是精密仪器，使用时一定严格遵守操作规则，不许随意拆修。三、实验内容三、实验内容 随时保持显微镜清洁。观察临时装片时，一定要将盖玻片四周溢出的水或其他液体用吸水纸吸干净，以免污染

12、镜头。已被污染的镜头要用镜头纸擦试。 观察时，坐姿要端正，双目同时张开，切勿睁一眼、闭一眼或用手遮挡一只眼。 观察玻片时，一定要按先低倍、后高倍物镜顺序使用。细调焦轮是在观察到物像而不够清晰时使用，切忌沿同一方向不停地转动细调焦轮。三、实验内容三、实验内容（三）临时水装片法：（三）临时水装片法：是用新鲜的少量植物材料(如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片等)，放在载玻片上的水滴中，再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。这种方法制成的标本，可以保持材料的生活状态和天然的色彩，一般多做为临时观察使用，但也可以根据需要选择适宜的染料染色，制成永久性标本或用某些化学试剂作组织化学反应。 制作方法如下： 1擦净载

13、玻片和盖玻片，即将浸洗过的玻片用纱布擦干。三、实验内容三、实验内容 擦载玻片时，用左手的拇指和食指夹住载玻片的边缘，右手将纱布包住载玻片的上下两面，反复轻轻地擦试。载玻片擦好后应注意切勿手触摸上、下表面，以免沾上指纹和油污。擦盖玻片时，应十分小心。应先把纱布铺在右手掌上，用左手拇指和食指夹住盖玻片的边缘，将其放在纱布上，然后用右手拇指和食指从上下两面隔着纱布轻轻夹住盖片，注意用力均匀，慢慢地轻擦，这样才不至于把盖片擦碎。 2用玻璃滴管吸水，滴一滴在载玻片的中央，然后挑选小而薄的材料，放置于载玻片上的水滴中。三、实验内容三、实验内容 3加盖片：右手持镊子，轻轻夹住盖玻片，使盖玻片边缘与材料左边水

14、滴的边缘接触，然后慢慢向下落，放平盖玻片。这样可使盖玻片下的空气逐渐被水挤掉，以免产生气泡。如果盖玻片下的水分过多，则材料和盖玻片容易浮动，影响观察，可用吸水纸条从盖玻片的侧面吸去一部分水。如果水未充满盖玻片时，容易产生气泡，可从盖玻片的一侧再滴入一滴清水，将水泡驱走，即可进行观察。 4如果这种临时装片尚需保存一段时间，则可用1030%甘油水溶液代替清水封片。并将用甘油封好的装片平放于大培养皿中(培养皿底先垫一湿滤纸)保存。这样一方面可以防尘，另一方面可防止水分过于蒸发。封片以后，当其中的水分丢失一部分后，可在盖玻片的一侧，用滴管补加30%或50%甘油溶液，如此反复进行，使材料完全浸于甘油中，

15、这种临时装片可以维持一个月以上，做示范教学或科研分析用均可。三、实验内容三、实验内容（四）观察洋葱鳞叶表皮细胞的基本结构（四）观察洋葱鳞叶表皮细胞的基本结构将制好的洋葱表皮装片置于显微镜下进行观察 可见以下几部分1. 细胞壁 洋葱表皮细胞的细胞壁几乎为无色透明的，在显微镜下观察仅能看到每一细胞的四壁组成的轮廓，而上下两层细胞壁看不到。所看到的细胞壁实际是由两相邻细胞共同组成，它包括两相邻细胞的两层初生壁，以及两相邻细胞所具有的胞间层，故所见细胞壁为三层结构。2. 细胞质 在成熟的细胞中，细胞质为紧贴细胞壁薄薄的一层，可见到细胞核位于其中，并可看到许多细小颗粒。三、实验内容三、实验内容3. 细胞

16、核 为半透明状圆形的小物体，因其有较强的折光，比细胞质容易看见。在细胞核内还可明显地看到1至多个颗粒状核仁。4. 液泡 在未成熟细胞中常见到数个小液泡在细胞内分散存在。在成熟的细胞中，液泡常占据中央的绝大部分，它将细胞质、细胞核等挤向紧贴细胞壁处。（五）绘图的要求与方法（五）绘图的要求与方法 绘图是重要的实验报告之一，比文字记录生动具体，可以帮助我们理解植物的结构和特征，是学习天然药物学时必须掌握的技能技巧。在以后工作的科研报告中，经常要运用形态结构图来表达所观察的内容。因此，开始时，一定要从严要求自己。 1用具：三、实验内容三、实验内容铅笔 (中华绘图铅笔2H3H、HB)、橡皮、小刀、直尺。

17、2要求：植物绘图与美术绘图不同，具体要求如下：首先要注意科学性和准确性：必须认真观察要画的对象(标本或切片等)，正确理解各部特征。选出正常的典型材料，才能在绘图时，保证形态结构的准确性，并说明某一科学问题。合理布局；绘图之前，应根据要求绘图的数量和内容，在图纸上，首先安排好各图的位置比例，并留出书写图题和注字的地方。三、实验内容三、实验内容先绘草图：即用削尖的HB铅笔轻轻地在图纸上勾出图形的轮廓，以便于修改。勾画草图时，注意比例，对照所观察的实物与所画轮廓大小是否杷符。草图经修饰后再绘出物象，正式绘图时要用2H3H的绘图硬铅笔，按顺手的方向运笔，描出与物体相吻合的线条。线条要一笔勾出、粗细均匀

18、，光滑清晰，接头处无分叉和痕迹(切忌重复描绘)。植物图一般用圆点衬阴，表示明暗和颜色的深浅，给予立体感。点要圆而整齐，大小均匀，根据需要灵活掌握疏密变化，不能用涂抹阴影的方法代替圆点。图纸要保持整洁，图注一律用正楷书写(尽量学写仿宋体)，应尽量详细， 并要求用平行线引出，最好在图的右侧，必须整齐一致。 三、实验内容三、实验内容绘图及注字一律用铅笔，不能用钢笔、有色水笔或圆珠笔。实验题目写在绘图报告纸的上方，图题和所用的植物材料名称和部位写在图的下方，可能时注明放大倍数。 平时多进行点、线的训练，做到点圆而匀，线均匀光滑。实验报告是根据实验材料认真观察而绘制的，切忌抄录书上或其它资料上的图形。三、实验内容三、实验内容3. 显微简图表示方法药材的显微制片可用组织简图来表示。简图：是且来表明在低倍镜下所见各种组织和某