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1、会计学1基因组基因组DNA 文库的构建文库的构建第1页/共17页第2页/共17页第3页/共17页第4页/共17页第5页/共17页第6页/共17页ln(1-p)ln(1-p)ln(1-f)ln(1-f)N= N= 该公式用于预测一个完整基因组文库应该包含的克隆数目。该公式用于预测一个完整基因组文库应该包含的克隆数目。 第7页/共17页第8页/共17页第9页/共17页注注1：高纯度大分子量基因组：高纯度大分子量基因组DNA (High molecular weight DNA, HMW DNA)。注注2：构建噬菌体文库，连接产物不用电转化的方法转化宿主，而是采用包装蛋白进行包装并侵染宿主。：构建噬

2、菌体文库，连接产物不用电转化的方法转化宿主，而是采用包装蛋白进行包装并侵染宿主。注注3：以下，以：以下，以 噬菌体为例简述噬菌体为例简述DNA文库的制作过程（文库的制作过程（P184）。）。第10页/共17页噬菌体载体；限制性内切酶Sau3A、BamH；琼脂糖凝胶（或蔗糖）；T4连接酶；注注1：Sau3A与与BamH，是一对同尾酶。，是一对同尾酶。注注2：同尾酶是指切割不同的：同尾酶是指切割不同的DNA片段但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶。片段但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶。 第11页/共17页cos LR cosBamH 位点位点载体载体DNAcos LR cosBB可用载体可用载体DNA片段片段弃去中间片段弃去中间片段第12页/共17页真核基因组真核基因组DNA（约（约3109bp）Sau3 A做局部消化做局部消化被限制酶切开的被限制酶切开的DNA片段片段SS琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳纯化约纯化约20kb片段片段第13页/共17页cos LR cosBBSST4连接酶连接酶约约20kbDN片段片段体外包装体外包装重组噬菌体重组噬菌体侵染大肠杆菌侵染大肠杆菌大肠

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