正交实验法优化大血藤总皂苷的提取工艺

1、湖北医药学院药学本科开题报告正交实验法优化大血藤总皂苷的提取工艺开题报告人：付露指导老师： 于慧斌湖北医药学院药2012年X月X号内容内容 绪论绪论 选题目的、依据及结果选题目的、依据及结果 实验材料实验材料 实验方法实验方法 开展课题已具备条件开展课题已具备条件 可行性分析可行性分析 参考文献参考文献绪论绪论 大血藤别名红皮藤、大活血、红藤等,系大血藤本植物大血藤的藤茎,分布于我国华北、华南等地区。 其藤茎具有清热解毒、活血通经及祛风除湿等功效,用以治疗肠痈腹痛、经闭痛经、风湿痹痛、跌打扑痛。据文献报道,大血藤还有直接扩张冠状动脉的作用,预防术后腹腔内粘连的效果亦较好。在近几十年中,临床上用

2、大血藤复方制剂治疗急性阑尾炎等疾病取得了良好的效果1 大血藤的化学成分有蒽醌类化合物，皂苷类化合物，甾体类化合物，木脂素类化合物，及酚类等其他成分。 大血藤皂苷常用的提取大血藤皂苷常用的提取方法方法1.1.甲醇或乙醇提取甲醇或乙醇提取 常用不同浓度的乙醇或甲醇提取，如果皂苷分子中羟基、羧基等极性基团较多，亲水性较强，用稀醇提取效果较好。提取液减压浓缩后，加适量的水，必要时先用乙醚、石油醚等亲脂性溶剂萃取，除去亲脂性杂质，然后用水饱和正丁醇萃取，减压蒸干，得粗制总皂苷。2.2.甲醇或乙醇提取甲醇或乙醇提取- -丙酮或乙醚沉淀法丙酮或乙醚沉淀法 由于皂苷在甲醇或乙醇中溶解度大，在丙酮、乙醚中的溶解

3、度小，因此将醇提取液适当浓缩后，加入丙酮或乙醚，皂苷可能被沉淀析出。3.3.碱水提取法碱水提取法对于一些酸性皂苷，可先用碱水提取，再加酸酸化使皂苷沉淀析出。4.4.皂苷的色谱分离皂苷的色谱分离（1）吸附色谱法 硅胶、氧化铝正相反相硅胶反相洗脱剂：混合溶剂（2）分配色谱法支持剂：硅胶、氧化铝洗脱溶剂：不同比例的氯仿-甲醇-水系统（3）高效液相色谱法反相柱，用甲醇-水或乙晴-水洗脱，分离皂苷医学|教育网搜集整理（4）大孔树脂色谱水洗去糖等水溶性杂质，10-30%醇洗下极性大的皂苷（含糖多），50%以上醇 洗下极性小的皂苷（含糖少）。选题目的、依据及结果选题目的、依据及结果选题目的选题目的 筛选出溶

4、剂法提取大血藤总皂苷的最佳工艺选题依据选题依据 1.国外报道在大血藤中的总皂苷能影响细菌的主要次生代谢产物2，从而达到抗菌的作用。 2.国外报道包括大血藤在内的16种中国传统使用的药用植物具有抗病毒活性3。其提取物能够抑制某些病毒的失活、吸附、复制三个步骤，从而达到抗病毒的作用。 3.国外报道了大血藤等提取的生物碱对类风湿关节炎的治疗有一定疗效4。 4.国内报道了复方大血藤能改善CNP模型大鼠前列腺的组织病理结构，减轻炎症反应，降低TNF-和IL-8水平5。结果结果 可以在大血藤的提取物中分离出总皂苷成分。实验材料实验材料 仪器：仪器：天平（X），干燥箱（X），粉碎机（X），温水浴锅（X），离

5、心机（X），紫外分光光度仪（X），电子天平（X），冷凝回流装置，筛子（50目），过滤网，蒸发皿 试药：试药：大血藤药材（购于X厂），人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品检定所，批号：XXX），其余十几均为分析醇，香草醛，冰醋酸，乙醇（95%），高氯酸实验方法实验方法1.11.1供试品溶液的制备供试品溶液的制备 精密称取大血藤药材干燥粉末5g，加乙醇于圆底烧瓶中，加热回流2h，4000转离心（5min）。取200ul溶液在60水浴中蒸发至干（用氮气吹干）。加5%香草醛-冰醋酸溶液（临用新配）0.2ml，高氯酸0.8ml，密塞于60水浴显色15min后，置冰水浴中冷却（5min），加冰醋酸5ml1

6、.21.2对照品溶液的制备对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Re的标准品7.7（约10mg）mg，置10ml量瓶中，加甲醛定容，制成0.77mg/ml的溶液。1.31.3标准曲线的绘制标准曲线的绘制 取对照溶液20，30，40，50，100，200ul，分别加加5%香草醛-冰醋酸溶液（临用新配）0.2ml，高氯酸0.8ml，密塞于60水浴显色15min后，置冰水浴中冷却（5min），加冰醋酸5ml。摇匀后在波长400-700nm的范围内测定，空白溶液作参比，在548nm波长处有最大吸收，故确定s=548nm。以浓度为横坐标，以吸收光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程1.41.4精密度试验精

7、密度试验 分别精密量取对照品100ul溶液5份，按2.1.3的方法测定吸光度值，RSD为1.09%，结果表明，仪器的精密度良好。1.51.5稳定性试验稳定性试验 将供试品溶液分别在0，10，20，30min是测定吸光度值，结果RSD为1.03%，表明羊皮溶液在显色后半小时内稳定1.61.6重复性试验重复性试验 按2.1.项方法制备供试液5份，测定吸光度值，RSD为1.49%开展课题已具备条件开展课题已具备条件1 1、文献部分、文献部分1980-2008年，英文10余篇，中文5余篇。2 2、大血藤、大血藤XXXXXX3 3、仪器设备、仪器设备XXXXXX4 4、实验所需试剂均已到位，能迅速开展工

8、作。、实验所需试剂均已到位，能迅速开展工作。可行性分析可行性分析 目前，实验单位、仪器设备、试剂、动物已确定完毕。所采用的方法成熟，导师组，组成合理，带教人员经验丰富，本实验具有一定的可行性。参考文献参考文献1毛水春,顾谦群,崔承彬,等1中药大血藤中酚类化学成分及其抗肿瘤活性J1中国药物化学杂志,2004,14( 6):326233012Li JM，Jin ZX，Chen T，Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue BanJ.2006 May;35(3):273-80.3Guo JP，Pang J，Wang XW，Shen ZQ, World J GastroenterolJ。2006 Jul 7;12(25):4078-81.4