玉米种子总蛋白质的提取与酸性聚丙烯凝胶电泳检测

1、玉米玉米种子种子总蛋白质的总蛋白质的提取与酸性聚丙烯凝提取与酸性聚丙烯凝胶电泳检测胶电泳检测指导老师：马丽指导老师：马丽答辩：赵小雷答辩：赵小雷成员：成员：房日裙、孙静、张延慧、房日裙、孙静、张延慧、 秦贵龙秦贵龙 、马鹏、马鹏从小麦种子中提取醇溶蛋白质从小麦种子中提取醇溶蛋白质失败原因：失败原因：没有提取醇溶蛋白用的没有提取醇溶蛋白用的2- 2-氯氯乙醇乙醇（有（有毒）；毒）；加蛋白质提取液多，蛋白质浓度低；加蛋白质提取液多，蛋白质浓度低；点点样时样品加的偏少。样时样品加的偏少。一一、实验原理实验原理（1 1）聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称为简称为PAGEPAGE）是以聚丙烯酰胺

2、凝胶作为支持介质是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质、TEMEDTEMED催化过硫酸铵催化过硫酸铵(AP)(AP)产生自由基产生自由基的的一种常用电泳技术。一种常用电泳技术。（2 2）蛋白质尿素（或者蛋白质尿素（或者SDSSDS）形成的复合）形成的复合物，在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率，不物，在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原来的电荷和形状的影响，再受蛋白质原来的电荷和形状的影响，而取决于分子量自身的大小，由于聚丙而取决于分子量自身的大小，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，因而蛋白质在电烯酰胺的分子筛作用，因而蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离，染色

3、后形成不同深浅和宽窄而被分离，染色后形成不同深浅和宽窄的蛋白质条带。的蛋白质条带。 二二、实验材料和用具实验材料和用具1. 1.材料：材料：玉米种子玉米种子2. 2.仪器：仪器： 离心机、垂直电泳设备、电泳仪离心机、垂直电泳设备、电泳仪3. 3.试剂试剂：TEMEDTEMED、AcrAcr、BisBis、冰、冰醋醋酸、硫酸、硫酸亚铁、甲基绿、过硫酸铵、考马斯亮蓝酸亚铁、甲基绿、过硫酸铵、考马斯亮蓝R-250R-250、无水乙醇、尿素、无水乙醇、尿素、三氯乙酸三氯乙酸4. 4. 溶液配制溶液配制（1 1）蛋白质提取液：蛋白质提取液：18g18g尿素，尿素，12ml12ml冰醋酸，加冰醋酸，加 蒸

4、馏水溶解，再加蒸馏水溶解，再加4ml TEMED4ml TEMED和和0.05g0.05g甲基绿，加甲基绿，加蒸馏水定容到蒸馏水定容到100ml,100ml,摇匀，低温避光保存。摇匀，低温避光保存。（2 2）凝胶溶液：凝胶溶液：10g10g丙烯酰胺，丙烯酰胺，10g10g尿素，尿素，0.2gBis0.2gBis加蒸馏水溶解，加加蒸馏水溶解，加2ml2ml冰醋酸，冰醋酸，0.020g0.020g硫酸亚铁，硫酸亚铁，加蒸馏水定容到加蒸馏水定容到100ml100ml，摇匀，低温避光保存。，摇匀，低温避光保存。（3 3）催化剂溶液：催化剂溶液：3.5%3.5%的过硫酸铵溶液，用前现的过硫酸铵溶液，用前

5、现 配。配。（4 4）电极液：电极液：2%2%的冰醋酸溶液配制的冰醋酸溶液配制1000ml1000ml。（5 5）染色液：染色液：0.4g0.4g考马斯亮蓝加考马斯亮蓝加25ml25ml无水乙醇溶无水乙醇溶解，加解，加50-60g50-60g三氯乙酸，加蒸馏水至三氯乙酸，加蒸馏水至500ml500ml。三三、实验、实验方案方案样品提样品提取取凝胶制凝胶制备备点样点样电泳电泳染色染色计算纯计算纯度度四四、实验结果与分析实验结果与分析五五、实验结论实验结论（1）从电泳图可知，总蛋白质量较好，）从电泳图可知，总蛋白质量较好，蛋白组份完整，各组分的量均匀。蛋白组份完整，各组分的量均匀。（2）电泳图较为完整，实验结果清晰、）电泳图较为完整，实验结果清晰、显著。显著。（3）因实验材料均为一种品种玉米，对）因实验材料均为一种品种玉米，对比分析性不大。比分析性不大。六、六、讨论讨论（1）种子研磨时要单粒磨碎，每一粒磨完后清扫干）种子研磨时要单粒磨碎，每一粒磨完后清扫干净，防止样品的交叉污染。净，防止样品的交叉污染。（2）控制实验变量一致）控制实验变量一致（3）蛋白质提取时，提取期间可以摇匀）蛋白质提取时，提取期间可以摇匀2-3次，保证次，保证蛋白提取充分。催化剂过硫酸铵要现用现配。蛋白提取充分。催化剂过硫酸铵要现用现配。（4）加入催化剂时