玻璃器皿的清洗包扎培养基的配制及灭菌

1、实验七、实验七、化能异养微生物的化能异养微生物的 分离、纯化和培养分离、纯化和培养一、实验目的及要求一、实验目的及要求1、了解微生物分离和纯化的原理 2、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化、接种培养的基本操作技术，掌握微生物的无菌操作技术。二二.实验原理实验原理 微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必须从中进行分离。在保藏菌种时不慎污染时也需予以分离。 分离纯化方法很多，基本原理相似，即将待分离样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。上述工作又离不开接种，即将一种微生物移接到另一灭菌培养基上的过程。分离纯化常用的方法有：分离

2、纯化常用的方法有：（1）简易单细胞挑取法）简易单细胞挑取法 （2）平板分离法）平板分离法 选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。 将微生物的培养物或含有微生物的样品将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种的关键是要严格的进行无菌操

3、作种的关键是要严格的进行无菌操作 土壤是微生物生活的大本营，它所含微土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化得到许多有价值的菌株。化得到许多有价值的菌株。三三.材料仪器材料仪器 牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马丁培养基、移液管、三角瓶、无菌水、接种马丁培养基、移液管、三角瓶、无菌水、接种环、酒精灯、土壤悬液、无菌培养皿、玻璃刮环、酒

4、精灯、土壤悬液、无菌培养皿、玻璃刮铲、恒温培养箱等。铲、恒温培养箱等。倒平板划线培养挑单菌落接种移植保存 10-72.倒平板倒平板 : 右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒人培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。 3.涂布分离涂布分离 将将0.1m菌悬液小心的滴在平板培养基表面位置菌悬液小心的滴在平板培养基表面位置 。右手拿无菌涂棒平。右手拿无菌涂棒平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动，使之分放在平板培养

5、基表面上，将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动，使之分布均匀然后改变方向沿另一垂直线来回推动，平板内边沿处可改变方向用布均匀然后改变方向沿另一垂直线来回推动，平板内边沿处可改变方向用涂棒再涂布几次。涂棒再涂布几次。 4.划线分离划线分离 最常用的平板接种法是划线法。先将接种环用火焰灭菌，待冷却后挑最常用的平板接种法是划线法。先将接种环用火焰灭菌，待冷却后挑取检查材料，涂于平板的上端，随即向下连续平行划线至平板的底部，划取检查材料，涂于平板的上端，随即向下连续平行划线至平板的底部，划线时接种环与平板表面所成的角度要小，以免划破琼脂。划线要密而不重线时接种环与平板表面所成的角度要小，以免划破琼脂。划

6、线要密而不重复，充分利用平板的表面。划线完毕，先盖好平板，再将接种环上残留的复，充分利用平板的表面。划线完毕，先盖好平板，再将接种环上残留的细菌用火焰灭菌细菌用火焰灭菌 培养后可观察有无孤立菌落生长，每一孤立菌落即为一纯种细菌。一般病原菌的菌落数少于杂菌，故在分离培养时，应力求出现较多的孤立菌落，以提高病原菌检出率。5.稀释混合倒平板稀释混合倒平板 肉汤培养基融化备用；1ml无菌吸管加菌悬液于空皿中；无菌操作将冷却至50左右的培养基倒入上述平板内，旋转混合均匀。 6.恒温培养箱培养恒温培养箱培养 马丁、高氏培养基板于28 倒置培养5d，肉汤培养基于37 倒置培养28h后观察 作业：作业：1.在三种不同的平板上你分离得到哪些类群的微生物