《显微镜直接计数法》ppt课件

1、实验三、微生物数量的测定实验三、微生物数量的测定一、实验目的：一、实验目的：掌握运用血球计数板进展微生物显微镜直接掌握运用血球计数板进展微生物显微镜直接计数的方法计数的方法了解微生物数量丈量的几种方法、原理及其了解微生物数量丈量的几种方法、原理及其运用运用二、实验原理二、实验原理常用的微生物细胞数目的检测法常用的微生物细胞数目的检测法血球计数板法血球计数板法平板菌落计数法平板菌落计数法干重法干重法比浊法等比浊法等干重法干重法将一定量的菌液中的菌体经过离心或过滤分将一定量的菌液中的菌体经过离心或过滤分别出来，然后烘干至恒重别出来，然后烘干至恒重( (枯燥温度可采用枯燥温度可采用105105、10

2、0100或或80)80)、称重。普通干重为、称重。普通干重为湿重的湿重的10%20%10%20%。 注：该法适宜菌浓度较高的样品。注：该法适宜菌浓度较高的样品。 比浊法比浊法 在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与吸光值成正比，菌与混浊度成正比，即与吸光值成正比，菌数越多，吸光值越大。因此，借助于分光数越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反响出菌液的浓度。该法适宜测度，就可反响出菌液的浓度。该法适宜测定大量的细胞。定大量的细胞。显微镜直接计数法显微镜直接计数法利用血球计数

3、板在显微镜下计数是常用的一种微生利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一种微生物计数法物计数法优点：直观、快速优点：直观、快速缺陷：误差较大，不适宜细菌计数太小缺陷：误差较大，不适宜细菌计数太小其原理与计数板的构造有关其原理与计数板的构造有关每块计数板上有两个计数室每块计数板上有两个计数室 正方形，盖上盖玻正方形，盖上盖玻片后容积是一定的片后容积是一定的0.1mm3，深为，深为0.1mm，边长为边长为1mm，其上面有准确的刻度。，其上面有准确的刻度。其刻度普通有两种规格其刻度普通有两种规格16个中方格，每个中方格分个中方格，每个中方格分25个小格个小格 162525个中方格，每个中方格分个中方格

4、，每个中方格分16个小格个小格 2516 我们采用的是我们采用的是2516的，计数时查的，计数时查5个中方格的总菌数。个中方格的总菌数。如图：如图： 计算：计算：1个计数室的总菌数个计数室的总菌数=A/525B 1gml样品中的总菌数样品中的总菌数=A/525101000B =50,000AB个个5个方格的总菌数个方格的总菌数稀释倍数稀释倍数三三 实验器材实验器材1.菌种菌种 酵母酵母Saccharomyces cerevisiae菌悬菌悬液液(已稀释已稀释100倍倍)2.器具器具 显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。 四四 实验方法实验方法1.1.检查计数板检

5、查计数板 检查计数板能否有破损。检查计数板能否有破损。2.2.镜检计数室镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进在加样前，先对计数板的计数室进展镜检。假设有污物，那么需清洗后展镜检。假设有污物，那么需清洗后才干进展计数。才干进展计数。 3 3加样品加样品 将清洁枯燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细将清洁枯燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点一小滴不宜过多，让菌液沿缝隙靠毛细浸一小滴不宜过多，让菌液沿缝隙靠毛细浸透作用自行进入计数室，普通计数室均能充溢透作用自行进入计数室，普通计数室均能充溢菌液。留意不可有气泡产生。菌液

6、。留意不可有气泡产生。4.4.显微镜计数显微镜计数 静置几分钟，将计数板放在显微静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再镜下，先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进展计数换成高倍镜进展计数5.5.清洗血球计数板清洗血球计数板 计数终了，将计数板在水龙头下计数终了，将计数板在水龙头下冲洗干净后自行晾干，镜检察看每冲洗干净后自行晾干，镜检察看每小格内无残留物为止。小格内无残留物为止。 本卷须知本卷须知1 1、加样时先摇匀菌液，计数室中不可、加样时先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；有气泡产生；2 2、菌液浓度以每小格有、菌液浓度以每小格有5-105-10个菌体为个菌体为宜。宜。3 3、计数时，格线上的菌体只数上方和、计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；右边线上的；4 4、如遇酵母出芽，芽体大小到达母细、如遇酵母出芽，芽体大小到达母细胞的一半时，作为两个菌体计算；胞的一半时，作为两个菌体计算；5 5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用水柱清洗，直到洗净为在水龙头上用水柱清洗，直到洗净为止。止。6 6、一个样品要从两个计数室中计得的、一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。平均值来计算。特别留意特别留意 血球计数板均有编号，一人一血球计数板均有编号，一人一个，务必小