生物化学蛋白质

1、蛋白质存在于所有的生物细胞中，是构成生物体最基本的结构物质和功能物质。蛋白质是生命活动的物质基础，它参与了几乎所有的生命活动过程。l早在早在18781878年，思格斯就在年，思格斯就在反杜林论反杜林论中指出：中指出：“生命是蛋白体的存在方式，这种存在方式本生命是蛋白体的存在方式，这种存在方式本质上就在于这些蛋白体的化学组成部分的不断质上就在于这些蛋白体的化学组成部分的不断的自我更新。的自我更新。” ” l可以看出，第一，蛋白体是生命的物质基础；可以看出，第一，蛋白体是生命的物质基础；第二，生命是物质运动的特殊形式，是蛋白体第二，生命是物质运动的特殊形式，是蛋白体的存在方式；第三，这种存在方式的

2、本质就是的存在方式；第三，这种存在方式的本质就是蛋白体与其外部自然界不断的新陈代谢。蛋白体与其外部自然界不断的新陈代谢。l现代生物化学的实践完全证实并发展了恩格斯现代生物化学的实践完全证实并发展了恩格斯的论断的论断。木瓜蛋白酶（组织蛋白酶）木瓜蛋白酶（组织蛋白酶）一、蛋白质的化学组成与分类一、蛋白质的化学组成与分类v蛋白质是一类含氮有机化合物蛋白质是一类含氮有机化合物，除含有碳、氢、，除含有碳、氢、氧外，还有氮和少量的硫。某些蛋白质还含有氧外，还有氮和少量的硫。某些蛋白质还含有其他一些元素，主要是磷、铁、碘、碘、锌和其他一些元素，主要是磷、铁、碘、碘、锌和铜等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约

3、为：铜等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为：l 碳碳 5050l 氢氢 7 7l 氧氧 2323l 氮氮 16%16%l 硫硫 0 03 3l 其他其他 微量微量v氮占生物组织中所有含氮物质的绝大部分。因此，可以将生物组织的含氮量近似地看作蛋白质的含氮量。由于大多数由于大多数蛋白质的含氮量接近于蛋白质的含氮量接近于16%16%，所以，可以根据生物样品中的含氮量来计算蛋白质的大概含量：v蛋白质含量（克蛋白质含量（克% %）= =每克生物样品中含每克生物样品中含氮的克数氮的克数 6.25 6.25v凯氏定氮法测定的基础凯氏定氮法测定的基础(1) (1) 依据蛋白质的外形分类依据蛋白质的外形分类按

4、照蛋白质的外形可分为球状蛋白质和纤维状蛋白质。l球状蛋白质：球状蛋白质：globular proteinglobular protein外形接近球形或椭圆形，溶解性较好，能形成结晶，大多数蛋白质属于这一类。l纤维状蛋白质纤维状蛋白质：fibrous proteinfibrous protein分子类似纤维或细棒。它又可分为可溶性纤维状蛋白质和可溶性纤维状蛋白质和不溶性纤维状蛋白质不溶性纤维状蛋白质。l按照蛋白质的组成，可以分为按照蛋白质的组成，可以分为l简单蛋白简单蛋白(simple protein) (simple protein) l结合蛋白结合蛋白(conjugated protein)

5、 (conjugated protein) l又称为单纯蛋白质；又称为单纯蛋白质；这类蛋白质只含由这类蛋白质只含由 - -氨基酸组成氨基酸组成的肽链的肽链，不含其它成分。，不含其它成分。l1 1，清蛋白和球蛋白：，清蛋白和球蛋白：albumin and globulin广泛存在于广泛存在于动物组织中。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易动物组织中。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易溶于稀酸中。溶于稀酸中。l2 2，谷蛋白，谷蛋白( (glutelin) )和醇溶谷蛋白和醇溶谷蛋白( (prolamin) )：植物蛋：植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸、稀碱中，后者可溶于白，不溶于水，易溶于稀酸、稀碱

6、中，后者可溶于70708080乙醇中。乙醇中。l3 3，精蛋白和组蛋白：碱性蛋白质，存在与细胞核中。，精蛋白和组蛋白：碱性蛋白质，存在与细胞核中。l4 4，硬蛋白：存在于各种软骨、腱、毛、发、丝等组织，硬蛋白：存在于各种软骨、腱、毛、发、丝等组织中，分为角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白和丝蛋白。中，分为角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白和丝蛋白。l由简单蛋白与其它非蛋白成分（辅基）结合而由简单蛋白与其它非蛋白成分（辅基）结合而成成l色蛋白：由简单蛋白与色素物质结合而成。如色蛋白：由简单蛋白与色素物质结合而成。如血红蛋白、叶绿蛋白和细胞色素等。血红蛋白、叶绿蛋白和细胞色素等。l糖蛋白：由简单蛋白与糖类物质组成

7、。如细胞糖蛋白：由简单蛋白与糖类物质组成。如细胞膜中的糖蛋白等。膜中的糖蛋白等。l脂蛋白：由简单蛋白与脂类结合而成。脂蛋白：由简单蛋白与脂类结合而成。 如血如血清清 - -， - -脂蛋白等。脂蛋白等。l核蛋白：由简单蛋白与核酸结合而成。如细胞核蛋白：由简单蛋白与核酸结合而成。如细胞核中的核糖核蛋白等。核中的核糖核蛋白等。 酶类酶类, 占细胞内蛋白质种类的绝大部分占细胞内蛋白质种类的绝大部分运输蛋白运输蛋白, 如如albumin, hemoglobin, transferrin等等收缩运动蛋白收缩运动蛋白, 如如actin, myosin, tubolin等等 激素蛋白激素蛋白, 如如insu

8、lin, growth hormone等等 细胞激动素细胞激动素(cytokinin), 如如egf, pdgf, il-2等等 受体蛋白受体蛋白, 如如insulin receptor, rhodopsin等等 毒素蛋白毒素蛋白, 如如cholera toxin, ricin, pertussis t. 营养贮藏蛋白营养贮藏蛋白, 如如prolamine, glutelin等等 防御蛋白防御蛋白, 如如igg等等 结构蛋白结构蛋白, 如如keratin, collagen等等二、蛋白质的大小与分子量l蛋白质是分子量很大的生物分子。对任蛋白质是分子量很大的生物分子。对任一种给定的蛋白质来说，它

9、的所有分子一种给定的蛋白质来说，它的所有分子在氨基酸的组成和顺序以及肽链的长度在氨基酸的组成和顺序以及肽链的长度方面都应该是相同的，即所谓均一的蛋方面都应该是相同的，即所谓均一的蛋白质。白质。l蛋白质分子量变化范围很大，从蛋白质分子量变化范围很大，从6000-6000-10000001000000道尔顿以上道尔顿以上l蛋白质分子量的上下限是人为蛋白质分子量的上下限是人为规定的，因为这决定于蛋白质和规定的，因为这决定于蛋白质和分子量概念的定义。分子量概念的定义。l某些蛋白质是由两个或更多个某些蛋白质是由两个或更多个蛋白质亚基蛋白质亚基( (多肽链多肽链) )通过非共价通过非共价结合而成的，称寡聚

10、蛋白质。有结合而成的，称寡聚蛋白质。有些寡聚蛋白质的分子量可高达数些寡聚蛋白质的分子量可高达数百万甚至数千万。百万甚至数千万。三、蛋白质的构象l对于不含辅基的简单蛋白质，用110除它的分子量可大略估计氨基酸残基的数目。l蛋白质分子是由氨基酸首尾相连而成的共价多肽链l每种天然蛋白质都有自己特有的空间结构，这种空间结构叫蛋白质的构象l球状蛋白、纤维状蛋白l一级结构：多肽链共价主键的氨基酸顺序l二级结构：多肽链借助氢键排列成沿一维方向具有周期性结构的构象，如-螺旋、-折叠。l三级结构：多肽链借助各种次级键盘绕成具有特定肽链走向的紧密构象。l四级结构：寡聚蛋白中各亚基之间在空间上的相互关系或结合方式。

11、 第二节 蛋白质的基本结构单位氨基酸蛋白质和多肽的肽键与一般的酰胺键一样可以蛋白质和多肽的肽键与一般的酰胺键一样可以被酸碱或蛋白酶催化水解，酸或碱能够将多肽被酸碱或蛋白酶催化水解，酸或碱能够将多肽完全水解，酶水解一般是部分水解完全水解，酶水解一般是部分水解. .多肽是由氨基酸以酰胺键形式连接而成的线性多肽是由氨基酸以酰胺键形式连接而成的线性大分子。它在生物体内可以单独存在，但是更大分子。它在生物体内可以单独存在，但是更多的则是作为蛋白质的组成部分多的则是作为蛋白质的组成部分。蛋白质是由。蛋白质是由一个或多个多肽链通过共价键（主要是二硫键）一个或多个多肽链通过共价键（主要是二硫键）或非共价力结合

12、而成。应用化学或物理方法，或非共价力结合而成。应用化学或物理方法，可以将蛋白质拆分成多肽组分。可以将蛋白质拆分成多肽组分。完全水解得到各种氨基酸的混合物，部完全水解得到各种氨基酸的混合物，部分水解通常得到多肽片段。最后得到各分水解通常得到多肽片段。最后得到各种氨基酸的混合物。种氨基酸的混合物。所以，所以，氨基酸氨基酸是蛋白质的是蛋白质的基本结构单元基本结构单元。大多数的蛋白质都是由大多数的蛋白质都是由2020种氨基酸组成。种氨基酸组成。这这2020种氨基酸被称为种氨基酸被称为基本氨基酸基本氨基酸。l常用常用6 mol/l6 mol/l的盐酸或的盐酸或4 mol/l4 mol/l的硫酸在的硫酸在

13、105-110105-110条件下进行水解，反应时间约条件下进行水解，反应时间约2020小时。小时。l此法的优点是不容易引起水解产物的消此法的优点是不容易引起水解产物的消旋化。缺点是旋化。缺点是色氨酸色氨酸被沸酸完全破坏；被沸酸完全破坏；l含有羟基的氨基酸如丝氨酸或苏氨酸有含有羟基的氨基酸如丝氨酸或苏氨酸有一小部分被分解；一小部分被分解；天冬酰胺天冬酰胺和和谷氨酰胺谷氨酰胺侧链的酰胺基被水解成了羧基。侧链的酰胺基被水解成了羧基。l一般用一般用5 mol/l5 mol/l氢氧化钠煮沸氢氧化钠煮沸10-2010-20小时。小时。l由于水解过程中许多氨基酸都受到不同由于水解过程中许多氨基酸都受到不同

14、程度的破坏，产率不高。程度的破坏，产率不高。l部分的水解部分的水解产物发生产物发生消旋化消旋化。l该法的优点是该法的优点是色氨酸色氨酸在水解中不受破坏。在水解中不受破坏。l目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶（proteolytic enzymeproteolytic enzyme）或称蛋白酶）或称蛋白酶（proteinaseproteinase）已有十多种。）已有十多种。l应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。水解的产物为较小的会发生消旋化。水解的产物为较小的肽肽段。段。 l最常见的蛋白水解酶有以下几种：最常见的蛋白

15、水解酶有以下几种：ltrypsin ：r r1 1= =赖氨赖氨酸酸lyslys和精氨酸和精氨酸argarg侧链（专一性较强，侧链（专一性较强，水解速度快）。水解速度快）。nhchcor4nhchcor3nhchcor2nhchcor1肽链水解位点水解位点胰蛋白酶胰蛋白酶l或胰凝乳蛋白酶或胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）：）：r1=r1=苯丙氨酸苯丙氨酸phe,phe,色氨酸色氨酸trp,trp,酪氨酸酪氨酸tyr; tyr; 亮氨酸亮氨酸leuleu，蛋氨酸蛋氨酸metmet和组氨和组氨酸酸hishis水解稍慢。水解稍慢。nhchcor4nhchcor3nhchcor2nhchcor

16、1肽链水解位点水解位点糜蛋白酶糜蛋白酶lpepsin：r1r1和和r2r2r1=r1=苯丙氨酸苯丙氨酸phe,phe,色氨酸色氨酸trp,trp,酪氨酪氨酸酸tyr; tyr; 亮氨酸亮氨酸leuleu以及其它疏水以及其它疏水性氨基酸水解速度性氨基酸水解速度较快较快。nhchcor4nhchcor3nhchcor2nhchcor1肽链水解位点水解位点胃蛋白酶胃蛋白酶lthermolysin)：r2=r2=苯丙氨酸苯丙氨酸phe,phe,色氨酸色氨酸trp,trp,酪氨酸酪氨酸tyr; tyr; 亮氨酸亮氨酸leuleu，异亮氨酸，异亮氨酸ileu,ileu,蛋氨酸蛋氨酸metmet以及其它疏水

17、性强的氨基以及其它疏水性强的氨基酸水解速度较快。酸水解速度较快。nhchcor4nhchcor3nhchcor2nhchcor1肽链水解位点水解位点嗜热菌蛋白酶嗜热菌蛋白酶l分别从肽链羧基分别从肽链羧基端和氨基端水解端和氨基端水解nhchcor4nhchcor3nhchcor2nhchcor1肽链水解位点水解位点羧肽酶和氨肽酶羧肽酶和氨肽酶l-氨基酸的基本结构氨基酸的基本结构残基：在肽链中每个氨基酸都脱去一个水分子，脱水后残基：在肽链中每个氨基酸都脱去一个水分子，脱水后的残余部分叫残基（的残余部分叫残基（residue), residue), 因此蛋白质肽链中的氨因此蛋白质肽链中的氨基酸统统是

18、残基形式。基酸统统是残基形式。coohcoohh h2 2n nh hc cr r要求全部背出要求全部背出1.脂肪族脂肪族含一氨基一羧基的中性氨基酸：甘、丙、缬、亮、异亮含一氨基一羧基的中性氨基酸：甘、丙、缬、亮、异亮含羟基的氨基酸：丝、苏含羟基的氨基酸：丝、苏含硫氨基酸：半胱、甲硫含硫氨基酸：半胱、甲硫含酰胺基氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺含酰胺基氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺含一氨基二羧基的酸性氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸含一氨基二羧基的酸性氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸含二氨基一羧基的碱性氨基酸：赖、精含二氨基一羧基的碱性氨基酸：赖、精2.芳香族：苯丙、酪芳香族：苯丙、酪3.杂环类：色、组、脯杂环类：色、

19、组、脯甘氨酸甘氨酸 glycine gly g 5.97丙氨酸丙氨酸 alanine ala a 6.00缬氨酸缬氨酸 valine val v 5.96亮氨酸亮氨酸 leucine leu l 5.98 异亮氨酸异亮氨酸 isoleucine ile i 6.02 苯丙氨酸苯丙氨酸 phenylalanine phe f 5.48脯氨酸脯氨酸 proline pro p 6.301. 非极性疏水性氨基酸非极性疏水性氨基酸目目 录录色氨酸色氨酸 tryptophan trp w 5.89丝氨酸丝氨酸 serine ser s 5.68酪氨酸酪氨酸 tyrosine tyr y 5.66 半胱氨

20、酸半胱氨酸 cysteine cys c 5.07 蛋氨酸蛋氨酸 methionine met m 5.74天冬酰胺天冬酰胺 asparagine asn n 5.41 谷氨酰胺谷氨酰胺 glutamine gln q 5.65 苏氨酸苏氨酸 threonine thr t 5.602. 极性中性氨基酸极性中性氨基酸目目 录录天冬氨酸天冬氨酸 aspartic acid asp d 2.97谷氨酸谷氨酸 glutamic acid glu e 3.22赖氨酸赖氨酸 lysine lys k 9.74精氨酸精氨酸 arginine arg r 10.76组氨酸组氨酸 histidine his

21、h 7.593. 酸性氨基酸酸性氨基酸4. 碱性氨基酸碱性氨基酸目目 录录几种特殊氨基酸几种特殊氨基酸 脯氨酸脯氨酸（亚氨基酸）（亚氨基酸）ch2chcoo-nh2+ch2ch2ch2chcoo-nh2+ch2ch2-ooc-ch-ch2-s+nh3s-ch2-ch-coo-+nh3-ooc-ch-ch2-s+nh3s-ch2-ch-coo-+nh3 半胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫键二硫键-hh-ooc-ch-ch2-sh+nh3-ooc-ch-ch2-sh+nh3hs-ch2-ch-coo-+nh3hs-ch2-ch-coo-+nh3l在少数蛋白质中分离出一些不常见的氨基酸，通常称在少

22、数蛋白质中分离出一些不常见的氨基酸，通常称为不常见蛋白质氨基酸。为不常见蛋白质氨基酸。l这些氨基酸都是由相应的基本氨基酸衍生而来的。这些氨基酸都是由相应的基本氨基酸衍生而来的。l其中重要的有其中重要的有4-4-羟基脯氨酸、羟基脯氨酸、5-5-羟基赖氨酸、羟基赖氨酸、n-n-甲基甲基赖氨酸、和赖氨酸、和3,5-3,5-二碘酪氨酸等。这些不常见蛋白质氨二碘酪氨酸等。这些不常见蛋白质氨基酸的结构如下。基酸的结构如下。nhhocooh4-羟基脯氨酸h2nch2chch2ch2chcoohohnh25-羟基赖氨酸nh2ch3nhch2chch2ch2chcooh6-n-甲基赖氨酸hoiich2chcoo

23、hnh23,5-二碘酪氨酸 l150多种其他氨基酸，大多是20种氨基酸的衍生物。有些是、氨基酸。l-丙氨酸是维生素前体，瓜氨酸和鸟氨酸是尿素循环的中间体l-氨基丁酸是传递神经冲动的化学介质l除甘氨酸外，氨基酸均含有一个手性除甘氨酸外，氨基酸均含有一个手性 - -碳原子，因碳原子，因此都具有旋光性此都具有旋光性。比旋光度是氨基酸的重要物理常比旋光度是氨基酸的重要物理常数之一，是鉴别各种氨基酸的重要依据数之一，是鉴别各种氨基酸的重要依据 l不对称碳原子不对称碳原子ll,dl,d型型l+ +，- -l - -氨基酸具有的这种性质称为旋光性或光学活性，氨基酸具有的这种性质称为旋光性或光学活性，手性手性

24、l光学异构体在化学和物理性质上一样光学异构体在化学和物理性质上一样ld d、l l混合物称为消旋物混合物称为消旋物 l-氨基酸的基本结构氨基酸的基本结构残基：在肽链中每个氨基酸都脱去一个水分子，脱水后残基：在肽链中每个氨基酸都脱去一个水分子，脱水后的残余部分叫残基（的残余部分叫残基（residue), residue), 因此蛋白质肽链中的氨因此蛋白质肽链中的氨基酸统统是残基形式。基酸统统是残基形式。coohcoohh h2 2n nh hc cr r 甘油醛的旋光性甘油醛的旋光性 与与 l- amino acidd- amino acid 将将h h原子靠近自己，观察原子靠近自己，观察car

25、car的走向，逆时的走向，逆时针（左转）为针（左转）为l l型，顺时针（右转）为型，顺时针（右转）为d d型。型。 d：dextro 右右 ：carboxyl group ; l： levo 左左 ：amino group ; ：residue ;l和d型氨基酸的判断拉丁语中拉丁语中cral型型cd型型ar 二硫键二硫键disulfide bonddisulfide bondl构成蛋白质的构成蛋白质的2020种氨基种氨基酸在可见光区都没有光酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区吸收，但在远紫外区(220nm)(220nm)均有光吸收。均有光吸收。l在近紫外区在近紫外区(220-300nm)(2

26、20-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能和色氨酸有吸收光的能力。力。l酪氨酸的酪氨酸的 maxmax275nm275nm， 275275=1.4x10=1.4x103 3; ;l苯丙氨酸的苯丙氨酸的 maxmax257nm257nm， 257257=2.0 x10=2.0 x102 2; ;l色氨酸的色氨酸的 maxmax280nm280nm， 280280=5.6x10=5.6x103 3; ;光吸收的测定l蛋白质在紫外区有吸收，一般在280nm处llambert-beer定律 a=lgi0/i=lg1/t=cl a-吸光度 -摩尔消光系数 c-摩尔浓度

27、 l-吸收杯的内径长度 i0-入射光强度 i-透射光强度 t-透光率l氨基酸在结晶形态或在水溶液中，并不氨基酸在结晶形态或在水溶液中，并不是以游离的羧基或氨基形式存在，而是是以游离的羧基或氨基形式存在，而是离解成两性离子。在两性离子中，氨基离解成两性离子。在两性离子中，氨基是以质子化是以质子化(-nh(-nh3 3+ +) )形式存在，羧基是以形式存在，羧基是以离解状态离解状态(-coo(-coo- -) )存在。存在。氨基酸的两性解离l在不同的在不同的phph条件下，两性离子的状态也条件下，两性离子的状态也随之发生变化。随之发生变化。coo-chh3n+r-pk1+h+h+coohchh3n

28、+rh+h+pk2-coo-chh2nrph 1 7 10净电荷 +1 0 -1 正离子 两性离子 负离子 等电点pilk1和k2分别代表碳原子上的羧基和氨基的表观解离常数l如果侧链r上有可解离的基团，其表观解离常数用kr表示l表观解离常数可以用测定滴定曲线的方法求得 标准naoh 标准hcllhanderson-hasselbalch方程： ph=pk+ lg质子受体/质子供体氨基酸的酸碱滴定l可以算出在任一可以算出在任一phph条件下一种氨基酸的各条件下一种氨基酸的各种离子的比例种离子的比例l带有可解离带有可解离r r基团的氨基酸，相当于三元酸，基团的氨基酸，相当于三元酸，有三个有三个pk

29、pk值值l二十种基本氨基酸，除组氨酸外，在生理二十种基本氨基酸，除组氨酸外，在生理phph下都没有明显的缓冲容量，在接近下都没有明显的缓冲容量，在接近pkpk值时才显示出来。值时才显示出来。l 当溶液浓度为某一当溶液浓度为某一phph值时，氨基酸分子中所含的值时，氨基酸分子中所含的- -nhnh3 3+ +和和-coo-coo- -数目正好相等，净电荷为数目正好相等，净电荷为0 0。这一。这一phph值即为值即为氨基酸的等电点，简称氨基酸的等电点，简称p pi i。在等电点时，氨基酸既不。在等电点时，氨基酸既不向正极也不向负极移动，即氨基酸处于两性离子状态。向正极也不向负极移动，即氨基酸处于两

30、性离子状态。l 侧链不含离解基团的中性氨基酸，其等电点是它的侧链不含离解基团的中性氨基酸，其等电点是它的p pk k1 1和和p pk k2 2的算术平均值：的算术平均值：p pi i = (p = (pk k1 1 + + p pk k2 2 )/2 )/2 l 同样，对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其同样，对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其p pi i值也决定于两性离子两边的值也决定于两性离子两边的p pk k值的算术平均值。值的算术平均值。l 酸性氨基酸：酸性氨基酸：p pi i = (p = (pk k1 1 + p + pk kr-coor-coo- - )/2 )/2 l 碱性氨基

31、酸：碱性氨基酸：p pi i = (p = (pk k2 2 + p + pk kr-nh2 r-nh2 )/2 )/2 r-ch-cooh +hno2 nh2r-ch-cooh +n2+h2o oh与与hno2反应（瓦氏定氮法）反应（瓦氏定氮法）（一）-氨基参加的反应（1）与亚硝酸的反应：ch2-o-coclr-ch-cooh nh2弱碱弱碱(2)与酰化试剂反应与酰化试剂反应 与苄氧酰氯反应与苄氧酰氯反应ch2-o-conh-ch-cooh+na+clr其他酰化试剂： 叔丁氧甲酰氯、 对甲苯磺酰氯 邻苯二甲酰氯、 丹磺酰氯（3）烃基化反应 氨基酸氨基的一个氢原子被烃基取代l与2，4-二硝基氟苯（dnfb或fdnb）反应。sanger反应，鉴定多肽或蛋白质的氮端氨基酸l与苯异硫氰酸酯（pitc）反应，生成ptc-氨基酸和pth-氨基酸 用层析法分离鉴定，edman反应。鉴定n-端氨基酸（4）形成西佛碱：-氨基与醛类化合物反应生成弱碱。（5）脱氨基反应：在生物体内经氨基酸氧化酶催化脱去-氨基变成酮酸（二）-羧基参加的反应（1）成盐和成酯反应羧基被保护（2）成酰氯反应：羧基与二氯亚砜或五氯化磷生成酰氯，可活化羧基（3）脱羧基反应：脱羧酶作用下，放出二氧化碳。（4）叠氮反应 使羧基活化，用于肽的人工合成（三）-氨基和-羧基共同参加的反应（1）茚三酮反应茚