分子生物学：3 实验三 用于大分子分离的电泳技术

1、试验三试验三用于大分子分离的电泳技术用于大分子分离的电泳技术2013.03.09实验目的实验目的1. 1.学习电泳原理和技术学习电泳原理和技术2. 2. 学习和掌握琼脂糖凝胶水平电泳和聚丙烯酰胺凝胶垂学习和掌握琼脂糖凝胶水平电泳和聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离直板电泳分离DNADNA技术技术 电泳技术，是指在电场作用下，带电颗粒在由于所电泳技术，是指在电场作用下，带电颗粒在由于所带的电荷不同以及分子大小差异而有不同的迁移行为从带的电荷不同以及分子大小差异而有不同的迁移行为从而彼此分离开来的一种实验技术。而彼此分离开来的一种实验技术。 电泳技术原理电泳技术原理 许多生物分子都带有电荷，其电荷的多少

2、取决于分许多生物分子都带有电荷，其电荷的多少取决于分子结构及所在介质的子结构及所在介质的pHpH值和组成。由于混合物中各种组值和组成。由于混合物中各种组分所带电荷性质、电荷数量以及相对分子质量的不同，分所带电荷性质、电荷数量以及相对分子质量的不同，在同一电场的作用下，各组分泳动的方向和速率也各异。在同一电场的作用下，各组分泳动的方向和速率也各异。因此，在一定时间内各组分移动的距离也不同，从而达因此，在一定时间内各组分移动的距离也不同，从而达到分离鉴定各组分的目的。到分离鉴定各组分的目的。 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳Agarose gel electrophoresis Agarose gel

3、 electrophoresis 琼脂糖凝胶电泳原理：琼脂糖凝胶电泳原理： 琼脂糖是从琼脂中提纯出来的，主要是由琼脂糖是从琼脂中提纯出来的，主要是由D D半乳糖和半乳糖和3,63,6脱水脱水L L半乳半乳糖连接而成的一种线性多糖。糖连接而成的一种线性多糖。 在在 pH pH 值为值为 8.0 8.08.3 8.3 时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为电泳酸分子带负电，在电泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，在分子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出支持

4、物，在分子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。核酸分子中嵌现较大的差异，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。核酸分子中嵌入荧光染料（如入荧光染料（如 EB EB ）后，在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。）后，在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。 琼脂糖凝胶的制作是将干的琼脂糖悬浮于缓冲液中，通常使用的浓度琼脂糖凝胶的制作是将干的琼脂糖悬浮于缓冲液中，通常使用的浓度是是0.60.63 3，加热煮沸至溶液变为澄清，注入模板后室温下冷却凝聚即成，加热煮沸至溶液变为澄清，注入模板后室温下冷却凝聚即成琼脂糖凝胶。琼脂糖主要在琼脂糖

5、凝胶。琼脂糖主要在DNADNA制备电泳中作为一种固体支持基质。制备电泳中作为一种固体支持基质。 琼脂糖可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶琼脂糖可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离分离DNADNA度大小范围较广度大小范围较广, ,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp200bp至近至近50kb50kb的的DNADNA段。段。 琼脂糖凝胶可以用于琼脂糖凝胶可以用于蛋白质和核酸蛋白质和核酸的电泳支持介质，尤其适合于的电泳支持介质，尤其适合于核酸的提纯、分析核酸的提纯、分析。如浓度为。如浓度为1 1的琼脂糖凝胶的孔径对于蛋白质来说的琼脂糖凝胶的孔径对于

6、蛋白质来说是比较大的，对蛋白质的阻碍作用较小，这时蛋白质分子大小对电泳是比较大的，对蛋白质的阻碍作用较小，这时蛋白质分子大小对电泳迁移率的影响相对较小，所以适用于一些忽略蛋白质大小而只根据蛋迁移率的影响相对较小，所以适用于一些忽略蛋白质大小而只根据蛋白质天然电荷来进行分离的电泳技术，如免疫电泳、平板等电聚焦电白质天然电荷来进行分离的电泳技术，如免疫电泳、平板等电聚焦电泳等。泳等。 另外，一些另外，一些低熔点低熔点的琼脂糖（的琼脂糖（62 62 时熔化，因此其中的样品如时熔化，因此其中的样品如DNADNA可以重新溶解到溶液中而回收。可以重新溶解到溶液中而回收。由于琼脂糖凝胶的弹性较差，难以从小管

7、中取出，所以一般琼脂糖凝由于琼脂糖凝胶的弹性较差，难以从小管中取出，所以一般琼脂糖凝胶不适合于管状电泳，管状电泳通常采用聚丙烯酰胺凝胶。琼脂糖凝胶不适合于管状电泳，管状电泳通常采用聚丙烯酰胺凝胶。琼脂糖凝胶通常是形成水平式板状凝胶，用于等电聚焦、免疫电泳等蛋白质电胶通常是形成水平式板状凝胶，用于等电聚焦、免疫电泳等蛋白质电泳，以及泳，以及DNADNA、RNARNA的分析。垂直式电泳应用得相对较少。的分析。垂直式电泳应用得相对较少。目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下：目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下：1 1） 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理

8、就可琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。以进行电泳。2 2） 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（约占琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（约占98%99%98%99%），近似自由电），近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。辨率高，重复性好。3 3） 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。及定量测定。4 4） 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可电泳后区带易染色，

9、样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。长期保存。 电泳仪电泳槽电泳模具凝胶成像系统操作操作凝胶的凝胶的EBEB染色染色EBEB使用时的配制、贮存及使用使用时的配制、贮存及使用EBEB常用水配制成常用水配制成10 mg/ml10 mg/ml的贮存液，于室温保存在棕色瓶或用的贮存液，于室温保存在棕色瓶或用铝箔包裹的瓶中，使用终浓度为铝箔包裹的瓶中，使用终浓度为0.5 g/ml 0.5 g/ml 。琼脂糖浓度（琼脂糖浓度（W/VW/V） 大小范围（大小范围（bpbp） 0.6%0.6% 1000-230001000-23000 0.8%0.8% 800-10000800-10000 1.0

10、%1.0% 400-8000400-8000 1.2%1.2% 300-7000300-7000 1.5%1.5% 200-4000200-4000 2%2% 100-3000100-3000琼酯糖凝胶电泳的浓度及分辨率琼酯糖凝胶电泳的浓度及分辨率琼脂糖凝胶电泳的注意事项琼脂糖凝胶电泳的注意事项1. DNA1. DNA分子带负电，从琼脂糖凝胶的负极向正极泳动，速度依赖于其分子质分子带负电，从琼脂糖凝胶的负极向正极泳动，速度依赖于其分子质量。量。2. 2. 小的紧密的小的紧密的DNADNA分子的较大伸展片断容易穿过琼脂糖介质。分子的较大伸展片断容易穿过琼脂糖介质。3. 3. 依据所要分离的依据所

11、要分离的DNADNA分子的大小来选择琼脂糖的浓度。分子的大小来选择琼脂糖的浓度。4. 4. 加入水溶性的阴离子追踪染料（如溴酚蓝）。加入水溶性的阴离子追踪染料（如溴酚蓝）。5. 5. 加入标准分子质量样品，根据已知分子质量的带相应位置做出标准曲线。加入标准分子质量样品，根据已知分子质量的带相应位置做出标准曲线。6. 6. 在紫外灯下可以看到在紫外灯下可以看到DNADNA带，这种方法检测的界限是每条带约带，这种方法检测的界限是每条带约10ng 10ng 。7. 7. 要对某一条带（如质粒）进一步分析，可将含该带的凝胶切割下来，回收要对某一条带（如质粒）进一步分析，可将含该带的凝胶切割下来，回收D

12、NA DNA 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳Polyacrylamide gel electrophoresisPolyacrylamide gel electrophoresisPAGEPAGE 聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，具有机械强度聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小（样品量小（1100ug1100ug）、）、分辨率高分辨率高等优点，并可通过控制单体等优点，并可通过控制单体浓度或单体与交联剂的比例，聚合成不同孔径大小的凝胶，浓度或单体与交联剂的比例

13、，聚合成不同孔径大小的凝胶，可用于可用于蛋白质蛋白质、核酸核酸等分子大小不同的物质的分离、定性和等分子大小不同的物质的分离、定性和定量分析。还可结合解离剂十二烷基硫酸钠（定量分析。还可结合解离剂十二烷基硫酸钠（SDSSDS），以测），以测定蛋白质亚基的相对分子质量。定蛋白质亚基的相对分子质量。聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰胺胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，这一聚合过和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，这一聚合过程需要有自由基催化完成。常用的催化聚合方法有两种：化学聚合和光聚合。程需要有自由基催化完成。常用的催化聚合方法有两种：化学聚合和光聚合。化学聚合通常是加入催化剂过硫酸铵化

14、学聚合通常是加入催化剂过硫酸铵(AP)(AP)以及加速剂四甲基乙二胺以及加速剂四甲基乙二胺(TEMED)(TEMED)，四甲基乙二胺催化过硫酸铵产生自由基。四甲基乙二胺催化过硫酸铵产生自由基。溶液的溶液的pHpH对聚合作用是重要的，因为过低对聚合作用是重要的，因为过低pHpH没有足够的碱基加速催化反应，没有足够的碱基加速催化反应，同样过多的氧分子存在，会使聚合作用很快停止。核黄素催化的聚合作用，常同样过多的氧分子存在，会使聚合作用很快停止。核黄素催化的聚合作用，常用于制备浓缩胶，因为这样制得的凝胶孔度要大些。核黄素在光照射下及有微用于制备浓缩胶，因为这样制得的凝胶孔度要大些。核黄素在光照射下及

15、有微量氧存在时，产生自由基使量氧存在时，产生自由基使AcrAcr发生聚合作用。发生聚合作用。CHCH2 2=CH=CHC=OC=ONHNH2 2丙烯酰胺丙烯酰胺CH2=CHCH2=CH C=O C=O NH NH CH CH2 2 NH NH C=O C=O CH CH2 2=CH=CH-CH-CH2 2-CH-CH-CHCH2 2-CH-CH-n nCHCH2 2-CH-CH- C=O C=O C=O C=O NH NH2 2 NH NH CH CH2 2 NH NH C=O C=O-CH-CH2 2-CH-CH-CHCH2 2-CH-CH-n nCHCH2 2-CH-CH- C=O C=O

16、 C=O C=O NH NH NH NH2 2N,N-N,N-甲叉双丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺+丙烯酰胺丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺 聚丙烯酰胺凝胶具聚丙烯酰胺凝胶具有一定的网状结构。有一定的网状结构。如如果形成的孔径大小接近果形成的孔径大小接近于所分离样品分子的平于所分离样品分子的平均半径均半径，样品分子在通，样品分子在通过凝胶孔洞时，所受过凝胶孔洞时，所受到到的阻力就会和样品分子的阻力就会和样品分子的大小及形状有关。的大小及形状有关。聚丙烯酰胺凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳，普遍用于分离蛋白质及较小分子的核普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸酸。聚丙烯酰胺分离小片段。聚

17、丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)DNA(5-500bp)效果较好，其分辩效果较好，其分辩力极高，力极高，甚至相差甚至相差1bp1bp的的DNADNA段就能分开段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快，可容纳相对大量的泳很快，可容纳相对大量的DNADNA，但制备和操作比琼脂糖凝，但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGEPAGE胶的配制胶的配制50ml体系：体系：丙烯酰丙烯酰胺胺有效分离有效分离(bp)(bp) 二甲二甲苯青苯青 溴酚蓝溴酚蓝 丙烯酰丙烯酰胺胺30

18、%(ml)30%(ml)1010TBTBE (ml)E (ml) ddH ddH2 2O O (ml)(ml) TEMED TEMED (l)(l) 过硫酸过硫酸铵铵10% (l)10% (l)3.5% 3.5% 100-1000100-1000460 460 1001005.835.835 539.1739.1725.025.02502505.0%5.0%100-500100-50026026065658.338.335 536.6736.6725.025.02502508.0%8.0%60-40060-400160160454513.3313.335 531.6731.6725.025.0

19、25025012.0%12.0%40-20040-2007070202020.020.05 525.0025.0025.025.025025015.0%15.0%25-15025-1506060151525.025.05 520.0020.0025.025.025025020.0%20.0%5-1005-1004545121233.3333.335 511.6711.6725.025.0250250水平板式电泳槽水平板式电泳槽垂直板式电泳槽垂直板式电泳槽1. 安装玻璃板安装玻璃板2. 灌注分离胶灌注分离胶3. 根据需要插入不同的梳子根据需要插入不同的梳子4. 点样，电泳点样，电泳SDSProt

20、ein蛋白质的蛋白质的SDS-PAGESDS-PAGE原理原理 蛋白质分子与蛋白质分子与SDSSDS充分结合后，所带上的充分结合后，所带上的SDSSDS负电荷大大超负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量过了蛋白质分子原有的电荷量，因而也就，因而也就掩盖或消除掩盖或消除了不同种类了不同种类蛋白质分子之间蛋白质分子之间原有的电荷差异原有的电荷差异。 这样的蛋白质这样的蛋白质-SDS-SDS复合物在复合物在SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶系统中聚丙烯酰胺凝胶系统中的电泳迁移率便不再受蛋白质原有电荷和形状等因素的影的电泳迁移率便不再受蛋白质原有电荷和形状等因素的影响，而主要取决于响，而主要取决于蛋白质分子量

21、大小蛋白质分子量大小。Protein加加 样样加电场，样品浓缩在界面上加电场，样品浓缩在界面上电泳结束电泳结束加加 样样加电场，分子开始迁移加电场，分子开始迁移电泳结束电泳结束SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质AM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16147101100190BM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21DCResistantM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

22、 11 12 13 14 15 16 17147190101100ResistantSusceptibleSusceptibleResistantSusceptibleResistantSusceptible147101100190147190GWM344核酸电泳指示剂的选择核酸电泳指示剂的选择指示剂：指示剂： 核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中 呈紫兰色，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色，它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁

23、移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液.载样缓冲液的作用有：1、 增加样 品密度，使其比重增加，以确保DNA均匀沉入加样孔内。2、 在电泳中形成肉眼可见的指示带，可预测核酸电泳的速度和位置。3、 使样品呈色，使加样操作更方便。染色剂：染色剂： 核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其次是银染色。 溴化乙锭(ethidium bromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。 可在凝胶电泳液中加入终浓度为 0.5ug/ml的EB，有时亦可在电泳后，将

24、凝胶浸入该浓度的溶液中染色1015min。琼脂 糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，其DNA量一般5ng，当溴化乙锭太多，凝胶染 色过深，核酸电泳带看不清时，可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察。银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛 使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染色黑褐色。主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色，灵敏度比EB高200倍。但银染色后，DNA不宜回收。主要试剂及相关问题：主要试剂及相关问题：1. Acr 1. Acr 和和 Bis Bis 比例比例2929：1 1，一般使用中还会用到，一般使用中还会用到1919:1 :1和和3939:1 :1

25、等比例，此时分辨率等比例，此时分辨率最佳最佳 ，凝胶成透明；，凝胶成透明；BisBis多硬无弹性。避光室温保存，隔几个月重多硬无弹性。避光室温保存，隔几个月重配。配。2. SDS 2. SDS 电泳级电泳级 10%10%母液，室温储备。母液，室温储备。3. 3. 分离胶、浓缩胶的分离胶、浓缩胶的Tris Tris 缓冲液缓冲液 分别为分别为PH 6.8 PH 6.8 、PH 8.8 PH 8.8 神经毒剂！神经毒剂！刺激呼吸系统！刺激呼吸系统！4. TEMED (4. TEMED (四甲基乙二胺四甲基乙二胺) ) 通过催化过硫酸铵形成自由基，加速通过催化过硫酸铵形成自由基，加速Acr Bis

26、Acr Bis 聚合。低聚合。低PHPH聚合反聚合反应受到抑制。应受到抑制。5. 5. 过硫酸铵过硫酸铵 提供引发聚合反应的自由基。提供引发聚合反应的自由基。10% 410% 4保存，保存， 吸入致命、挥发性强极其易燃，吸入致命、挥发性强极其易燃，周围不得有明火！周围不得有明火！每周新配！每周新配！脉冲场凝胶电泳脉冲场凝胶电泳pulsed-field gel electrophoresispulsed-field gel electrophoresis PFGE PFGE 超过一定大小的线状双链超过一定大小的线状双链DNA分子在琼脂糖凝胶中以分子在琼脂糖凝胶中以相同速率迁移。大于该极限长度（相

27、同速率迁移。大于该极限长度（40kb）后）后DNA的迁移速的迁移速率几乎与分子大小无关，而主要决定于电场强度。但率几乎与分子大小无关，而主要决定于电场强度。但 PEGE 解决了这一问题。解决了这一问题。 这种电泳是在两个不同方向的电场周期性交替进行的。这种电泳是在两个不同方向的电场周期性交替进行的。DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间取分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间取决于它的大小。决于它的大小。 该法可分离长至该法可分离长至5Mb的的DNA分子。严格说来，应叫交分子。严格说来，应叫交替电场凝胶电泳。替电场凝胶电泳。 A-+AB+-B脉冲电场电泳示意图脉冲电场电泳示意

28、图A-A-+A+AB-B-+B+B垂直交变电场系统垂直交变电场系统场翻转系统场翻转系统箝位匀强电场系统箝位匀强电场系统旋转胶系统旋转胶系统A-A-+A+AB-B-+B+BA-A-+A+AB-B-+B+B- -+ +等电聚焦电泳等电聚焦电泳Isoelectric Focusing ElectrophoresisIsoelectric Focusing ElectrophoresisIEFEIEFE等电聚焦电泳等电聚焦电泳 蛋白质是带有电荷的两性生物大分子，其正负电荷的数量随所处环境酸蛋白质是带有电荷的两性生物大分子，其正负电荷的数量随所处环境酸碱度的变化而变化。在电场存在下的一定碱度的变化而变化

29、。在电场存在下的一定pHpH溶液中，带正电的蛋白分溶液中，带正电的蛋白分子将向负极移动而带负电的蛋白分子将向正极移动，在某一子将向负极移动而带负电的蛋白分子将向正极移动，在某一pHpH时，蛋时，蛋白分子在电场中不再移动，此时的白分子在电场中不再移动，此时的pHpH值即为该蛋白质的等电点。值即为该蛋白质的等电点。 等电聚焦等电聚焦(IEF(IEF）电泳就是在凝胶中加入两性电解质从而构成从正极到负）电泳就是在凝胶中加入两性电解质从而构成从正极到负极极pHpH逐渐增加的逐渐增加的pHpH梯度，处在其中的蛋白分子在电场的作用下运动，梯度，处在其中的蛋白分子在电场的作用下运动，最后各自停留在其等电点的位

30、置上，测出蛋白分子聚焦位置的最后各自停留在其等电点的位置上，测出蛋白分子聚焦位置的pHpH值，值，便可以得到它的等电点。便可以得到它的等电点。 两性电解质两性电解质 Ampholine( Ampholine(由瑞典由瑞典LKBLKB公司生产公司生产) ) 它是由许多脂肪族的多氨基它是由许多脂肪族的多氨基, ,多羧基的异构体和同系物组成的多羧基的异构体和同系物组成的, pH, pH范围范围2.5-4.52.5-4.5，4-6.54-6.5，5-85-8，3.5-9.53.5-9.5。 在没有电场时在没有电场时, ,载体两性电解质溶液的载体两性电解质溶液的pHpH值大约是该溶液值大约是该溶液pHp

31、H范围的平均范围的平均值值( (如如pH3-10pH3-10的载体两性电解质溶液，其的载体两性电解质溶液，其pHpH约为约为6.56.5左右左右) )。所以载体两性。所以载体两性电解质分子都带有电荷，只是在溶液中的正电荷和负电荷数目相等，净电解质分子都带有电荷，只是在溶液中的正电荷和负电荷数目相等，净电荷为零。引入电场时，载体两性电解质分子分别向阴极和阳极移动，电荷为零。引入电场时，载体两性电解质分子分别向阴极和阳极移动，最终在分子净电荷为零的位置停止迁移，最终在分子净电荷为零的位置停止迁移，在凝胶内制造一个在凝胶内制造一个pHpH梯度。梯度。 每种蛋白质都将迁移至与它的每种蛋白质都将迁移至与

32、它的pI pI 相一致的相一致的pHpH处。处。等等电电聚聚焦焦电电泳泳进进行行过过程程中中等等电电聚聚焦焦电电泳泳结结束束后后（）（）（）（）（）（）（）（）高高pHpH低低pHpH蛋白质双向电泳蛋白质双向电泳Two-dimensional electrophoresisTwo-dimensional electrophoresis2-DE2-DE蛋白质的蛋白质的2-DE2-DE电泳电泳 2-DE2-DE电泳可用于蛋白质转录及转录后修饰研究、蛋白质组的比较和蛋电泳可用于蛋白质转录及转录后修饰研究、蛋白质组的比较和蛋白质间的相互作用、细胞分化凋亡研究、致病机制及耐药机制的研究、白质间的相互作用

33、、细胞分化凋亡研究、致病机制及耐药机制的研究、疗效监测、新药开发、癌症研究、蛋白纯度检查、小量蛋白纯化、新疗效监测、新药开发、癌症研究、蛋白纯度检查、小量蛋白纯化、新替代疫苗的研制等许多方面。替代疫苗的研制等许多方面。 蛋白质组学已成为当今生物领域中极其活跃的学科。其中双向电泳蛋白质组学已成为当今生物领域中极其活跃的学科。其中双向电泳 (Two Dimensional Electrophoresis(Two Dimensional Electrophoresis，2-DE) 2-DE) 是蛋白质组研究的三大关键是蛋白质组研究的三大关键核心技术之一核心技术之一 ( ( 另两种是质谱技术和蛋白质组信息学另两种是质谱技术和蛋白质组信息学 ) ) 。 双向电泳技术在蛋白质组研究中的重要位置。双向电泳技术在蛋白质组研究中的重要位置。 双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二向则按分子量的不同用分离，第二