实验1微生物学实验常用仪器洗涤及干热灭菌

1、实验一实验一 微生物学实验常用仪器洗涤微生物学实验常用仪器洗涤及干热灭菌及干热灭菌 l目的要求目的要求l实验原理实验原理l实验材料实验材料l实验程序实验程序l结果与思考题结果与思考题目目 的的 要要 求求l 认识微生物实验所需要的各种器皿，认识微生物实验所需要的各种器皿，了解常用工具和仪器的名称、用途。了解常用工具和仪器的名称、用途。l 掌握对玻璃器皿的清洗、包扎方法掌握对玻璃器皿的清洗、包扎方法与干热灭菌的操作过程。与干热灭菌的操作过程。实验原理实验原理l 微生物学实验要求较高的无菌状态，因微生物学实验要求较高的无菌状态，因此，实验所用的器皿，大多数要进行消毒、此，实验所用的器皿，大多数要进

2、行消毒、灭菌从而用以培养微生物，所以对其质量、灭菌从而用以培养微生物，所以对其质量、规格、洗涤和包扎方法均有一定要求。规格、洗涤和包扎方法均有一定要求。l 清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防止污染杂先决条件，包扎方法要能保证防止污染杂菌。菌。l 空的玻璃器皿一般用干热灭菌空的玻璃器皿一般用干热灭菌. 实实 验验 材材 料料玻璃仪器：玻璃仪器： 每人数：每人数：培养皿培养皿 3套；套； 大试管大试管 3只。只。 每组数：每组数：三角瓶三角瓶 6只；只； 烧杯（烧杯（500ml）2只；只； 烧杯（烧杯（1000ml）1只；只； 小试管小

3、试管 6只；只； 吸管（吸管（ 0.2ml 2支，支， 0.5ml 2支，支，1ml 2支，支， 5ml 2支）共支）共8支支 每橱数：每橱数：量筒（量筒（500ml）1只；只；洗涤用品：洗涤用品： 去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷等。去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷等。包扎用品：包扎用品：棉花、扎绳、包扎纸等。棉花、扎绳、包扎纸等。实验程序实验程序（仪器的认识、清洗与包扎仪器的认识、清洗与包扎）（一）学习下列常用仪器的种类、规格和应用范（一）学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围：围： 培养皿培养皿； 试管试管； 三角瓶三角瓶； 烧杯；烧杯； 吸管；吸管； 量筒。量筒。（二）学习（二）学习玻璃器皿的洗涤

4、方法玻璃器皿的洗涤方法：（三）学习（三）学习各种器皿的包扎：各种器皿的包扎：l 由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿底直径直径90 mm，高，高15mm,皿底皿盖均为玻璃制成。l 制成平板，可用于分离、纯化、鉴分离、纯化、鉴定菌种、活菌计数定菌种、活菌计数以及测定抗生素测定抗生素、噬菌体的效价噬菌体的效价等。 l 根据其大小和用途不同，有下列三种型号有下列三种型号：l (1)大试管大试管(约约18mm180mm) : 可装倒平板用的培养基可装倒平板用的培养基; ; 可作制备斜面用（需要大量菌体时用）可作制备斜面用（需要大量菌体时用） 装液体培养基用于微生物的振荡培养。装液体培养基用于微生物的振荡

5、培养。l (2)中试管中试管(1315)mm(100150)mm: 装液体培养基培养细菌或做斜面用装液体培养基培养细菌或做斜面用, , 用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。l (3)小试管小试管(1012)mm100mm: 一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料的试验。的试验。l三角瓶三角瓶: 100ml、250ml、500ml和和1000 ml 用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物无菌水、培养基和振荡培养微生物等。l烧杯烧杯: 50ml、100ml、250ml、500ml和和1000ml 用来

6、配制培养基与各种溶液配制培养基与各种溶液等。l玻璃吸管玻璃吸管: 1ml、2ml、5ml、10ml 玻璃器皿的洗涤方法玻璃器皿的洗涤方法:1、新玻璃器皿的洗涤、新玻璃器皿的洗涤 在在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。2、旧玻璃器皿的洗涤、旧玻璃器皿的洗涤（1）试管、培养皿、三角瓶）试管、培养皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗 a 装有固体培养基：装有固体培养基：刮掉，洗涤刮掉，洗涤 b 带菌的器皿：带菌的器皿：2%来苏尔或来苏尔或0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡新洁尔灭消毒液中浸泡24小时小时或煮沸或煮沸

7、0.5小时，然后洗涤小时，然后洗涤 c 带病原菌培养物的器皿带病原菌培养物的器皿：先高压蒸汽灭菌，倒去培养物先高压蒸汽灭菌，倒去培养物（2）玻璃吸管）玻璃吸管：吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接，反复冲洗吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接，反复冲洗 a 吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投立即投入盛有自来水的容器中浸泡，实验后集中冲洗。入盛有自来水的容器中浸泡，实验后集中冲洗。 b 塞有棉花的吸管：塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗用水将棉花冲出，然后冲洗 c 吸过含有微生物培养物的吸管：吸过含有微生物培养物的吸管：2%来苏尔

8、或来苏尔或0.25%新洁尔灭新洁尔灭消毒液中浸泡消毒液中浸泡24小时然后洗小时然后洗 d 吸管内壁有油垢：吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗洗涤液中浸泡数小时，再冲洗 洗涤后，若内壁的水均匀分布成一洗涤后，若内壁的水均匀分布成一薄层薄层，表示完全洗净，若还挂有水珠，则需表示完全洗净，若还挂有水珠，则需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水冲洗。水冲洗。 洗净后的试管倒置于试管筐内，三角瓶倒置于洗涤架上，培养皿的洗净后的试管倒置于试管筐内，三角瓶倒置于洗涤架上，培养皿的皿底和皿盖分开，依次压着皿边排列倒扣在桌上皿底和皿盖分开，依次压着皿边排列倒扣在桌上,晾干晾

9、干. 培养皿的包扎：培养皿的包扎： 牛皮纸或旧报纸包紧，一牛皮纸或旧报纸包紧，一般以般以58套套培养皿包成培养皿包成1包包吸管的包扎：吸管的包扎： 1 在上端约0.5cm处，塞入一小段1.5 cm长的棉花（勿用脱脂棉），目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内，或不慎将菌液吸出管外。 2 45 cm宽的长纸条.试管和三角瓶等的包扎：试管和三角瓶等的包扎： 实验程序实验程序（干热灭菌的原理和操作方法干热灭菌的原理和操作方法 ） 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有达到灭菌的目的。细胞内

10、的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。 与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160170），），时间要长（时间要长（12h），但干热灭菌温度不能超过），但干热灭菌温度不能超过180，否则，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。原理原理实验程序实验程序（干热灭菌的原理和操作方法干热灭菌的原理和操作方法 ）1装入待灭菌物品装入待灭菌物品 将

11、包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。物品将包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。物品不要摆得不要摆得太挤，太挤，以免妨碍空气流通；以免妨碍空气流通；不要接触电烘箱内壁的铁板不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。，以防包装纸烤焦起火。2升温升温 接通电源，拨动开关，接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。，让温度逐渐上升。当温度升至当温度升至100时时，关闭排气孔。，关闭排气孔。3恒温恒温 当温度升达到当温度升达到160170时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度2h。干热火菌过程，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。干热火菌过程，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。4降温降温 切断电源、自然降温。切断电源、自然降温。5开箱取物开箱取物 待电烘箱内温