新课动物细胞融合与单克隆抗体

1、蛇身蛇身马首马首鹿角鹿角兽脚兽脚鹰爪鹰爪鱼鳞鱼鳞虎须虎须鬣尾鬣尾（lie）植物体细胞杂交过程：植物体细胞杂交过程：植物细胞植物细胞a植物细胞植物细胞b去除细胞壁去除细胞壁去除细胞壁去除细胞壁原生质体原生质体a原生质体原生质体b诱导融合诱导融合融合的原生质体融合的原生质体再生出细胞壁再生出细胞壁杂种细胞杂种细胞细胞分裂（脱分化）细胞分裂（脱分化）分化发育（再分化）分化发育（再分化）愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株原生质体原生质体的制备的制备原生质体原生质体的融合的融合筛选筛选组织培养组织培养1 1、如果让动物细胞进行融合、如果让动物细胞进行融合/ /杂交，应注杂交，应注意动、植物之间的哪些区别？

2、意动、植物之间的哪些区别？无细胞壁无细胞壁全能性受限制，不能发育成杂种动物全能性受限制，不能发育成杂种动物动物细胞融合与植物细胞杂交的不同：动物细胞融合与植物细胞杂交的不同： 无需去除细胞壁无需去除细胞壁 不能培养成新的动物个体不能培养成新的动物个体 细胞融合是正常的生命活动细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用a细胞细胞b细胞细胞人工诱导人工诱导1.11.1动物动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交细胞杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指交）：是指两个或多个细胞两个或多个细胞融融合形成一个合形成一个单核细胞单核细胞的过程。的过

3、程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒灭活病毒、pegpeg、电激等、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞形成完整的杂交细胞诱导的手段？诱导的手段？融合后细胞的类型？融合后细胞的类型？abab杂种细胞遗传物质杂种细胞遗传物质有什么特点？有什么特点？三种三种aaaa、abab、bbbb（a a、b b）含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质1.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程原理？原理？ 1.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程 为什么灭活的为什么灭活的病毒能作诱导剂病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染

4、性保留融合活性保留融合活性意义：意义： 突破了有性杂交方法的局限，使突破了有性杂交方法的局限，使远缘远缘杂交杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。为可能。 这一项技术成为研究这一项技术成为研究细胞遗传、细胞细胞遗传、细胞免疫、肿瘤免疫、肿瘤和和生物新品种生物新品种培育等的重要手段。培育等的重要手段。应用：应用：最重要的用途是：最重要的用途是：制备单克隆抗体制备单克隆抗体植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理细胞膜的流动性、植细胞膜的流动性、植物细胞

5、全能性物细胞全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合细胞融合的方法的方法去处细胞壁后诱导原去处细胞壁后诱导原生质体融合生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合诱导方法诱导方法 物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒（p52）小结：一、动物细胞融合（细胞杂交）小结：一、动物细胞融合（细胞杂交）1.1.概念概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。细胞的过程。2.2.结果结果： 形成含有形成含有2或多个细胞遗传物质的或多个细胞遗传

6、物质的单核杂交细胞单核杂交细胞3.3.融合原理融合原理： 细胞膜的流动性细胞膜的流动性4.4.诱导方式诱导方式物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（peg)peg)生物法：灭活的病毒生物法：灭活的病毒5.5.意义：意义：突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能广泛应用多个领域广泛应用多个领域重要用途：重要用途：抗体：能够与抗原发生特抗体：能够与抗原发生特异性结合的异性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细浆细胞（即效应胞（即效应b细胞）。细胞）。二、单克隆抗体二、单克隆抗体抗体的传统生产

7、方法：抗体的传统生产方法：从从血血清清中中分分离离抗抗体体该法制备抗体的特点（缺陷）：该法制备抗体的特点（缺陷）： 产量低、纯度低，且抗体的产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。特异性差、灵敏度低。多多种种效效应应b细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 抗原抗原 动物体动物体刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗体不纯抗体不纯抗原不纯抗原不纯反复注射反复注射读下面一段资料，读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的b b细胞细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个可以产生

8、多达百万种以上的特异性抗体，但是每个b b细胞只细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个单一抗体，必须用单个b b细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 单克隆单克隆抗体：抗体：单个单个b b细胞克隆产生的细胞克隆产生的化学化学性质单一、特异性强性质单一、特异性强的抗体的抗体 科学家的设想：克隆（无性繁殖）单一的科学家的设想：克隆（无性繁殖）单一的b b淋淋巴细胞，形成细胞群，产生大量高纯度抗体。巴细胞，形成细胞群，产生大量高纯度抗体。存在的困难：存在的

9、困难：体外培养的体外培养的b b淋巴细胞不可无限增殖淋巴细胞不可无限增殖问题问题1 1：哪种细胞可以无限增殖呢？：哪种细胞可以无限增殖呢？ 骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞问题问题2 2：怎样让细胞：怎样让细胞既能大量繁殖，又能产既能大量繁殖，又能产生专一抗体生专一抗体呢？呢？ b b淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合, ,制制备单克隆抗体备单克隆抗体怎样获得大量高纯度抗体呢？怎样获得大量高纯度抗体呢？一个一个b b淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设

10、计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞为什么给小鼠注射为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？特定的抗原蛋白？ 会有几种融合方式？会有几种融合方式？ 杂交瘤细胞是如何杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特筛选出来的？有何特点？点？ 是否所有的杂交瘤是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性细胞都能产生专一性抗体？抗体？ 如何大规模进行培如何大规模进行培养得到大量的单克隆养得到大量的单克隆抗体？抗体？bbbb 、b b瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （b b、瘤）、瘤）（一选）（一选）选选择性培养基择性培养基：只有只有杂交瘤杂交

11、瘤细胞细胞才能存才能存活活获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的b b细胞细胞（二选）：选（二选）：选能产生所需能产生所需专专一抗体的杂交一抗体的杂交瘤细胞瘤细胞(多孔培多孔培养板养板) 用小鼠骨髓瘤细胞与用小鼠骨髓瘤细胞与b b细胞融合的细胞融合的杂交瘤细杂交瘤细胞，继胞，继承了双亲细胞的遗传物质，承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有不仅具有b b细胞分泌抗体的细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单，因而可以获得大量单克隆抗体克隆抗体由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性

12、质单一的，特异性强的单克隆抗体的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，只不过克隆克隆的含义，只不过克隆的不是的不是b淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。）。） 细胞融合技术、动物细胞培养技术细胞融合技术、动物细胞培养技术单抗制备过程分哪几步？单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？序是？ 2.3单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简

13、易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏特异性强，灵敏度高，并能大量制备。度高，并能大量制备。主要用于癌症治疗主要用于癌症治疗瞄准癌细胞的生物导弹瞄准癌细胞的生物导弹优势：既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。优势：既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势【例【

14、例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ）a.离心离心 b.灭活的病毒灭活的病毒 c.电刺激电刺激 d.振动振动【例【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ ）a. 具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息 b.能无限增殖能无限增殖 c.可形成新个体可形成新个体 d.培养过程会贴壁培养过程会贴壁【例【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（】动物细胞融合的作用中最重要的是（ ）a.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 b.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 c.培育新物种培育新物种 d.生产杂种

15、细胞生产杂种细胞 bba【例【例4 4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ）a.a.经过免疫的经过免疫的b b淋巴细胞淋巴细胞 c.c.经过免疫的经过免疫的t t淋巴淋巴细胞细胞b.b.不经过免疫的不经过免疫的t t淋巴细胞淋巴细胞 d.d.不经过免疫的不经过免疫的b b淋淋巴细胞巴细胞【例【例5 5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ ）a.a. b b淋巴细胞淋巴细胞 b bt

16、t淋巴细胞淋巴细胞 c c骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 d d杂交瘤细胞杂交瘤细胞ad【例【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中列实验步骤中错误错误的是（的是（ ）a a将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的b b淋淋巴细胞巴细胞b b用纤维素酶处理用纤维素酶处理b b淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞c c用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的b b淋淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合d d筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体bb b体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔a ac c 7.7.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体制备单克隆抗体 不能，没有注射抗原，无法获得产生不能，没有注射抗原，无法获得产生单一抗体的单一抗体的b