新生儿溶血病检测操作SOP

1、-作者xxxx-日期xxxx新生儿溶血病检测操作SOP【精品文档】新生儿溶血病检测操作SOP一、 产前诊断1.夫妇血型检测（微柱凝胶检测法：ABO、Rh(D)血型定型检测卡）1.1将红细胞稀释至1% 红细胞生理盐水悬液；撕开微胶卡的封膜，于正定管蓝A、黄B、灰D、Control微柱管反应腔中加入1% 待检 RBC生理盐水悬液各50l；于反定管白色A、B、O、自身管分别对应加入1.0% A1、B、O型试剂红细胞和待检红细胞生理盐水悬液50l，再分别加入待检血浆（血清）50l；10 min,取出，置离心机1000r/min 2min，1800r/min 3 min离心；1.4取出，判定结果（凝集强

2、度判断详见结果判定示图）。按下表检验结果判定ABO、RhD血型：检验结果ABO、RhD血型判定兰A黄B灰DControl（待检RBC）A1BOControl（血浆与自身RBC）+-+或-+-A型RhD（+或-）-+或-+-B型RhD（+或-）-+或-+-O型RhD（+或-）+或-AB型RhD（+或-）（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）孕妇IgG(抗A/抗B)效价2.1.1取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各，充分混匀，37水浴2小时（以充分破坏血清中的IgM类抗体）。 2.1.2取4支干净试管排于试管架上；将第一管加入50微升中和血清和1.6毫升低离子介质（原液为1:1稀释，此时稀释倍

3、数为原液的64倍）。2.1.3 第24管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升的液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。2.1.4取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在4管中个依次加入倍比稀释好的灭活血清50微升和1的标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质(LIM)悬液50微升。2.1.5将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。2.1.6将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min），（离心必须在加样后30分钟内进行）2.1.7取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）临床参考值

4、：孕妇IgG(抗A/抗B)效价64。孕妇IgG(抗D)效价测定2. 确定孕妇为RhD阴性，丈夫为RhD阳性。2.取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各，充分混匀，37水浴2小时（孕妇血清与O型RhD阳性红细胞反应盐水法为阳性需要灭活，阴性不需要灭活）。 2.取4支干净试管排于试管架上；将第一管加入50微升中和血清和400毫升低离子介质（灭活血清为1:1稀释，此时稀释倍数为原液的16倍；如不灭活为8倍）。2.第24管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升的液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。2.取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在4管中个

5、依次加入倍比稀释好的血清50微升和1的标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质(LIM)悬液50微升。2.将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。2.将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min），（离心必须在加样后30分钟内进行）2.取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）临床参考值：孕妇IgG(抗D)效价16,其血型不合的胎儿溶血病一般较；IgG(抗D)效价64时，其血型不合胎儿死胎率增高。3.孕妇不规则抗体筛查（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）3.1取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在3管中个依次加入孕妇血清（血浆）50微

6、升和1的筛选细胞低离子介质(LIM)悬液50微升。3.2将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。3.3将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min），（离心必须在加样后30分钟内进行）3.4取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）二、新生儿溶血病血型血清学诊断（三项）1.患儿红细胞直接抗人球蛋白试验（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）1.1 取患儿血液，离心，洗涤，取压积红细胞用生理盐水配制成1的红细胞悬液。1.2 在抗人球蛋白检测卡上标注患儿的姓名或者编号，撕开卡上的铝箔。1.3 将50微升1红细胞悬液加入到相应的孔中。

7、1.4 离心5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min）。取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）。（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）采集患儿的血液标本，按照所检抗体的不同，使用不同的方法的到放散液（具体操作见附件）。2.1 取出试剂卡，检测前确保试剂卡及样品完全平衡至室温并标记，撕开试剂卡上的铝箔带，仅暴露试验所需使用的反应腔2.2 将 50 L 1% A、B、O红细胞LIM悬液加入相应的反应腔中 。2.3 向相应的反应腔中加入 100 L的放散液。2.4 观察反应腔内的反应物是否混匀，如需要，轻弹微柱。2.5 将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。

8、5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min）。取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）热放散法：取1ML体积的压积血用盐水至少洗涤三次，最后一次尽量取净，然后和等量或半量的生理盐水混匀，置于56孵育10分钟，期间摇动数次，迅速取出3500r/min离心2-3分钟，立即取上清。即热放散液。酸放散：详细见酸放散试剂盒说明书。结果判读AcBcOc 指示细胞 游离的抗A抗体 游离的抗B抗体 游离的抗A抗B抗体OO 游离的ABO 以外抗体 无游离抗体3. 游离抗体试验（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）。游离试验是新生儿出生后7天内，辅助诊断新生儿溶血病的试验。单纯游离

9、试验阳性，不能诊断IgG抗体已经致敏新生儿红细胞。3.1 取出试剂卡，使用前确保试剂卡完全平衡到室温。3.2 分别向反应柱内加入50ul 1%A、B、O红细胞LIM悬液。3.3 最后向反应柱内加入100 ul婴儿血清或血浆。注，加样时，枪头请勿触碰微柱管壁。3.4 观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。3.5 将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min）。2.7取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）。结果判读AcBcOc指示细胞 游离的抗A抗体 游离的抗B抗体 游离的抗A抗B抗体OO 游离的ABO 以外抗体 无游离抗体直抗试验游离试