动物细胞培养和核移植技术(上课用)

1、2.2动物细胞工程学习目标:1、简述动物细胞培养的过程、条件及 应用2、对比说出动物细胞培养与植物组织 培养原理、条件、结果、培养目的复习：植物细胞工程常用的技术手段有哪些?植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术动物细胞工程常用的技术手段:动物细胞培养技术、 动物细胞核移植技术、 动物细胞融合技术、生产单克隆抗体技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础O动物细胞培养过程 阅读“动物细胞培养过程”并思考：1v动物细胞培养的概念是什么？该技术实施 的原理是什么？特点是什么？712、为什么要对取出的动物组织进行处理，使 细胞分散？3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细 胞间的物质主要是什么？

2、用胃蛋白酶可以吗？714、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什 么？5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或 组织做动物细胞培养材料？716、简述动物细胞培养的操作过程取动初纲织块动物细胞培 养过程：转人培养液中 遊行传代培菲原代培养站*1用輩的细頼用I*鐵白懿牡玛 分敵成单个细胞.阳成纲口乞液传代培养轻人培祚 沌中ut幵 szyffi 2-16 动拘堀胎1M养过秤示魚刃(&人二恒 化i*培痒 irvr培齐聚焦一、动物细胞培养过程1v动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么?从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生 长和繁殖。原理是细胞增殖（有丝

3、分裂）。动物细胞生长特点: 细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、 易于贴附。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。一、动物细胞培养过程动物细胞生长特性接触抑制=50代以后接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分 裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细 胞分裂和生长停止，数量不再2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散?分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排出 代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞的营 养供应和代谢废物的排出都较困难。一、动物细胞培养过

4、程3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗?细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2,当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适 宜环境pH为7.284。多数动物细胞培养的适宜pH 为7.27.4。4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么?胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时 间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作 用,因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间O5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或 组织做动物细胞培养材料？动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺容易培养。物的组织、

5、器官J胰蛋白酶单个细胞JJ加培养液 细胞悬浮液3原代培养 J0代细胞、煞质细胞株动物细胞培养不能J最终培养成生物体；50代细胞 传代培养无限传代丿丿6、动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动 传代培养一般传至10代直至 50代就不能再分裂了，这时细 胞核内遗传物质未发生变化， 形成的细胞群 传代培养过程中有个别细胞 传至50代以后，由于遗传物 质改变，失去控制，成为无 限增殖的不死的癌症细胞， 形成的细胞群7、什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？用駅蛋口昨处理 分做虑罩个紬8&转人培养液申 适行原代培养的幻龍网険交白詡处理分做 威館个*8RM.料人培养故人二償养原代培养:取材（动物组织

6、）-细胞分散-初次培养传代培养:培养的细胞- 细胞分散一继续培养进行传代培养的原因=接触抑制一、动物细胞培养过程8、传代培养中， 第10代细胞与第50 代以后细胞的主要 区别是什么？细胞癌变，失去接触抑制特性。幼龄动物/ 用wisng/ 分散胶个细觉幼龄动物幼龄动物进行厳代塔养幼龄动物幼龄动物族人培养 浪中iS行 伶代培养枚人二H 化典培养 中培养KRMSWCft 用 SI JI 白处 分傲成个电.一、动物细胞培养过程9、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗?不可以，因为高度分化的动物细胞的全能性受到抑制。不需要诱导其脱分化。原代珞养iD定义：把第1代细胞的

7、培养与10代以内的细朋 培养统称为原代培养。过程：从动物机体中取出组织T剪碎T加胰蛋白酶T细胞游离T加培养液T将 如胞接种到j培养鹹内- 培罪（1一2天换一 次培养液）T细胞贴壁生长T长成单层细 胞取材（动物组织）-细胞分散T初次培养传代磅养定义：当原代培养的细胞生长停止，这 时如果要使细胞继续生长，就要及时用 胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来, 然后加入新的培养液，将细胞分离稀释, 并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内, 这个过程称传代培养培养的细胞T细胞分散T继续培养细胞株:从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。细胞系:传到40-50代后有部

8、分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限 制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。二、动物细胞培养条件1v无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）保证细胞顺利的3、温度和PH36. 5+ （-） 0.5度，7. 2-4、气体环境：。2和CO? （95%空气和5% 002 ）思考：动物血清的作用?主要是：提供有利于细胞生长增殖所需的 激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏 的营养物质等。：3成分比较:动物细胞培养液的主要成分:葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。植物组织培养呢?动物体细胞大都生活在液体

9、的环境：3：3(1)液体培养基与植物培养特点是:：3：3III一 1一血清无机盐、蔗糖、维生素、生矿、 调节物质、植物激素一三、动物细胞培养的应用1、获得细胞产物，如蛋白质生物制品一 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等2、获得烧伤病人植皮所需的细胞3、获得细胞用于检测有毒物质4、为治疗及预防疾病提供理论依据。：3h植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基状态培养基特有 成分培养结果培养目的你达到学习目标了吗?说出动物细胞培养的过程?2、简述动物细胞培养的条件?3、说出动物细胞培养的应用?4、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的巩固练习:都需

10、用培养箱z 都须用液体培利 都要在无菌条件卞 都可体现细胞的金1 用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下 列叙述正确的是A.外界条件适 宜，植物细 胞不需要。B.CD动物细胞培 养一般需要培养箱。C动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D动物细胞能够大量培养，而植物细j 养成植葆3、动物细胞工程技术的基础是DA.动物细胞融合B单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养订71订能培愈伤组织 条件适宜 可以传代 培养不分4、细胞株的特点是A. 遗传物质没有改变,B. 遗传物质发生改变,C. 遗传物质没有改变,D. 遗传物质发生改变, 无限传代可以无限传代 不可无限传代 不可无限传代 且有癌变特点，可以

11、5、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养 条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为:A.原代培养B.传代培养DC.细胞株 D.细胞系2申丐图物细胞培养的组织和细胞大都取自胚 胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 其主要 原因是这样的组织细胞貝王雯亠DA.容易产生各种变异B 具有更强的全能性C. 取材十分方便D分裂增殖的能力强7. (09江苏)下图是一个新生小鼠的肝脏小块 培养装置示意图。请回答下列问题。(1)肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细 吸收氧气和营养物质、排出代谢废物。是5气体的主要作用(3)培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生 长，但要注意选择抗生素的种类和剂量 以 保证抗生素对肝脏无害。玻璃盖 肝脏小块 滤纸 培养液 气室08年宁夏卷回答下列有关动物细胞培养的问题：在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂 生长到细胞表面相互接触时.细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的無触抑制。此时, 瓶壁上形成的细胞层数是亟壁的细 胞从瓶壁上分匿疋来，需要用酶处理，可用的酶 是 胰蛋白酶。71(2)随着细胞传代疼的增多,绝大部分细胞分裂 停止，进而出现衰老甚至死亡的现象;但极少 数细胞可以连续增殖，基鹽些细胞会因遗传物 质发生改变血密成不死性细胞.该种细胞